摘要：目的建立EvaGreen qPCR检测牛腺病毒3型(bovine adenovirus 3,BAV3)的方法,用于牛血清等牛源材料的检测。方法依据GenBank公布的BAV3标准毒株WBR-1全基因序列,基于E2B区域高度保守序列设计引物,提取并制备DNA标准品,建立EvaGreen qPCR检测BAV3的方法,并对该方法的特异性、灵敏度及精密度进行验证。最后利用该方法检测牛血清中的BAV3,并与细胞培养法及荧光抗体检测对比,以验证该方法的适用性。结果建立的EvaGreen qPCR检测BAV3的方法标准曲线R^(2)>0.99,扩增效率处于90%~110%,可检测范围为0.2×10^(0)~0.2×10copies/μL。实验内Ct值的CV<2.2%,在不同实验间Ct值的CV<1.8%。设计的BAV3引物与牛腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、副流感病毒3型(parainfluenza virus 3,PI3)、呼肠孤病毒(reovirus,REO)、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)、狂犬病毒(rabies virus,RV)、羊轮状病毒(Lanzhou lamb rotavirus,LLR)基因组均无交叉反应,特异性良好。采用EvaGreen qPCR对198份新生牛血清进行BAV3检测,阳性检出率为10.1%,检出率高于细胞培养法及荧光抗体检测。结论成功建立了EvaGreen qPCR检测BAV3的方法,该方法快速、灵敏、特异、易于标准化,可用于牛血清中BAV3的检测。

摘要：以单因素和正交实验方法对W135群脑膜炎球菌的摇瓶种子培养条件进行优化。通过单因素试验确定摇瓶种子培养的主要影响因素包括接种量、培养基起始pH和活化菌龄,对以上三个影响因素进行正交实验设计,以培养液菌密度到达OD600值1.1的时间为评价指标,在实验范围内得到影响因素大小顺序为接菌量>起始pH值>活化菌龄,得到最佳培养条件组合是接菌量2.4%,起始pH值7.2,活化菌龄16h。验证试验表明优化的摇瓶种子培养条件可用来进一步完善W135群脑膜炎球菌的培养工艺。

摘要：目的 探究Lowry法测定A群C群脑膜炎奈瑟菌(简称脑膜炎球菌)多糖原液蛋白质含量时,细菌内毒素对Lowry法的干扰情况。方法 根据《中华人民共和国药典》2015版(三部)规定的方法,测定含不同浓度的细菌内毒素的A群C群脑膜炎球菌多糖原液的蛋白质含量,对检测结果进行分析。以细菌内毒素为干扰物质,设计3种方法进行验证,对验证结果进行离散系数,即CV值分析,确定干扰限值。结果 当细菌内毒素含量较高时,A群C群脑膜炎球菌多糖原液的蛋白质含量明显增高,该结果可能为假阳性。验证试验结果显示,当溶液中细菌内毒素浓度达到0.313EU/mL时,会对检测结果产生干扰,浓度越高,干扰程度越高。结论 为获得准确的检测结果,当细菌内毒素浓度达到干扰限值时,应先消除干扰,再测定蛋白质含量。