摘要：目的优化b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)多糖活化工艺,提高Hib结合疫苗的产量和质量。方法设计三因素三水平正交试验,考察不同pH、溴化氰加量和活化时间对Hib多糖衍生物、多糖蛋白结合物的影响,依据正交试验结果确定最优的多糖活化工艺,并对该工艺进行放大和验证。结果多糖活化时pH和活化时间对多糖衍生物衍生率及重均分子量(M_(w))均影响显著(P均0.05)。多糖衍生物衍生率和M与多糖蛋白结合物的多糖回收率、多糖与蛋白比值、高分子结合物含量、K_(D)≤0.2的多糖回收率、GMT各指标均显著相关(P均<0.05)。综合多糖蛋白结合物产量、免疫原性及稳定性。确定的最优多糖活化工艺为:在pH 10.5条件下,加入与精制多糖等重的溴化氰反应5 min。结论经优化的多糖活化工艺可以用于Hib多糖蛋白结合物规模化的生产。

摘要：目的以氯化钠溶液为样品和洗脱液,对电导法测定Sepharose 4FF凝胶层析柱柱效方法进行验证,确定该方法测定柱效的最优条件。方法设计四因素三水平正交实验对电导法测定Sepharose 4FF凝胶层析柱柱效方法进行验证,考察不同样品体积、流速、样品浓度和洗脱液浓度对Sepharose 4FF凝胶层析柱柱效和对称性的影响。依据正交实验结果确定电导法测定柱效的最优条件并进行验证。结果9次实验测得柱效均>2800 N/m、对称性为1.020~1.160。通过单因素方差分析,样品体积对柱效的影响无统计学意义(P=0.123,P>0.05),对对称性的影响无统计学意义(P=0.735,P>0.05);流速对柱效的影响无统计学意义(P=0.600,P>0.05),对对称性的影响有统计学意义(P=0.032,P0.05),对对称性的影响无统计学意义(P=0.824,P>0.05);洗脱液浓度对柱效的影响无统计学意义(P=0.930,P>0.05),对对称性的影响无统计学意义(P=0.596,P>0.05)。通过极差分析,确定测定柱效的最优条件为:样品体积为600 mL、样品浓度为1.0 mol/L、洗脱液浓度为0.2 mol/L、流速为20 cm/h;重复性和耐用性考察中柱效RSD均0.05)。结论电导法可用于测定Sepharose 4FF凝胶层析柱柱效,确定的最优条件重复性、耐用性良好,可准确、真实地评估Sepharose 4FF凝胶层析柱的性能。