摘要：为了研究Sry基因的调控网络,采用siRNA技术使Sry基因沉默,探讨了有效沉默Sry基因的途径和最佳条件.设计、合成针对小鼠Sry基因的发夹状寡核苷酸链,退火后连入真核表达载体pSilencer4.1-CMVneovector,构建以小鼠Sry基因为靶点的siRNA干涉载体pSilencer4.1/Sry217及pSilencer4.1/Sry565,通过尾静脉注射法将载体质粒导入妊娠小鼠体内,于小鼠妊娠第11.5天,即11.5dpc(dayspostcoitum,性交后天数)取出胚胎,采用双重PCR法对胚胎进行性别鉴定,鉴定为雄性的胚胎采用半定量RT-PCR法检测Sry基因的表达量,研究不同干扰序列、不同注射时间及注射剂量对Sry基因表达量的影响.研究结果,确定了质粒的最佳注射时间为9.5dpc,注射剂量为20μg,注射干扰质粒pSilencer4.1/Sry565对Sry基因的抑制效率达85%左右.结果表明,siRNA可以显著抑制雄性胚胎Sry基因的表达.

摘要：本研究旨在建立一种能够快速、简便、灵敏地检测猪星状病毒的基于SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。根据已报道的猪星状病毒ORF2基因序列,设计并合成1对引物,通过PCR扩增ORF2基因片段,将测序正确的ORF2基因片段克隆入pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,经测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线,并对其灵敏性、特异性和重复性进行验证。结果表明,猪星状病毒荧光定量PCR的标准曲线Ct值与模板浓度呈良好的线性关系,熔解曲线特异,灵敏度可达1×101拷贝,是普通PCR检测方法的100倍,特异性和重复性较好。本次建立的猪星状病毒荧光定量PCR检测方法具有快速、简便、敏感等优点,有重要的实用价值。

摘要：本试验旨在研究十二指肠灌注亮氨酸对奶牛胰腺淀粉酶分泌的影响。以4头周岁荷斯坦母牛[(215±7)kg]为试验动物,手术安装十二指肠胰液收集袋、灌注管和回流管以及颈静脉插管,采用4×4拉丁方试验设计,进行十二指肠亮氨酸灌注试验[(灌注水平分别为0、29.5、59.1和88.6μmol/(kg.h)]。结果表明,随亮氨酸灌注水平升高,血浆胰岛素和胆囊收缩素浓度升高(P<0.05),胰腺α-淀粉酶合成速率(U/h)呈先升高后降低趋势(P<0.01),在29.5μmol/(kg.h)灌注水平时最大。十二指肠灌注亮氨酸也极显著影响了胰腺α-淀粉酶分泌浓度(U/L,P<0.01;U/g prot,P<0.01)。结果表明,亮氨酸可能通过刺激胰岛素和胆囊收缩素释放,调控青年奶牛胰腺淀粉酶分泌功能,二者存在剂量效应。

摘要：为研究上海地区犬感染细小病毒(Canine parvovirus,CPV)的基因特点和基因型,参考GenBank上细小病毒3个基因型的全基因设计6对扩增引物进行PCR,分段扩增出目标片段,克隆于T载体上,测定序列并拼接,用MEGA软件、NJ法构建进化树。结果显示,犬细小病毒全基因为4 758bp,命名为CPV-SH,提交到GenBank上的序列号为FJ792845,与GenBank中4种基因型犬细小病毒的VP2基因核苷酸序列同源性比较发现,CPV-SH克隆与2a亚型犬细小病毒核苷酸同源性为最高99.7%,与2型、2b亚型、2c亚型的同源性分别为98.8%、99.5%、99.5%。CPV-SH属于2a亚型犬细小病毒,与国内北京分离株CPV/BJ082亲缘关系最近,同源性为99.9%。