摘要：试验通过探究高产和低产奶牛不同泌乳阶段甲烷产量和产甲烷菌多样性的变化规律,从瘤胃微生物菌群结构变化的角度揭示高产和低产奶牛甲烷产量不同的原因,并将产甲烷菌的相对丰度与甲烷产量、产奶量和乳品质进行相关性分析。试验采用双因素试验设计,选用36头健康状况良好,体重、胎次和饲养管理条件相近的荷斯坦奶牛,按泌乳性能(高产、低产)和泌乳阶段(前期、中期、后期)分为高产泌乳前期组、高产泌乳中期组、高产泌乳后期组、低产泌乳前期组、低产泌乳中期组和低产泌乳后期组,每组6头奶牛。所有奶牛饲喂相同的全混合日粮。选用甲烷产量预测模型计算甲烷产量,运用高通量测序技术测定瘤胃产甲烷菌多样性。结果显示,高产奶牛甲烷产量显著低于低产奶牛(P0.05)。高产奶牛瘤胃甲烷球形菌属相对丰度显著高于低产奶牛(P<0.05),甲烷短杆菌属相对丰度显著低于低产奶牛(P<0.05)。奶牛泌乳前期和中期瘤胃甲烷球形菌属相对丰度显著高于泌乳后期(P<0.05),奶牛泌乳后期甲烷短杆菌属相对丰度显著高于泌乳前期和中期(P<0.05)。奶牛瘤胃甲烷球形菌属相对丰度与甲烷产量和乳脂率等呈显著负相关(P<0.05),与产奶量呈显著正相关(P<0.05)。研究表明,高产奶牛甲烷产量、瘤胃甲烷短杆菌属相对丰度低于低产奶牛,奶牛泌乳前期甲烷产量高于泌乳中期和后期。

摘要：试验以脂多糖(LPS)为刺激源,以细胞活力、抗氧化指标和炎症因子为判断指标,探讨白细胞介素1受体颉颃剂(IL-1Ra)通过抑制白细胞介素1β(IL-1β)的活性,对LPS诱导外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)氧化损伤的缓解作用。试验采用单因子完全随机设计,PBMCs被随机分为7个组(每组6个重复),分别给予不同的处理:第1组是阴性对照组(Neg组),完全培养基培养30 h;第2组损伤组(Dam组),是在完全培养基中培养6 h后,再经10μg/mL的LPS工作液培养24 h;第3至7组(R0.25、R0.5、R1、R5组和R10组)细胞分别经浓度为0.25、0.5、1、5、10 ng/mL的IL-1Ra培养6 h,接着经10μg/mL的LPS工作液培养24 h。结果表明:与Neg组相比,Dam组的细胞活力、抗氧化相关酶[包括总抗氧化能力(T-AOC)以及总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和硫氧还蛋白还原酶(TrxR)]的活性显著降低,丙二醛(MDA)浓度、炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β含量以及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性、一氧化氮(NO)含量均显著升高(P≤0.05)。与Dam组相比,R1组显著逆转了氧化损伤引起的上述抗氧化活性的降低和炎症因子浓度的升高,其他IL-1Ra处理组对上述指标的逆转效果不同程度地低于R1组(P≤0.05)。上述结果说明,LPS通过诱发PBMCs产生大量IL-1β进而导致细胞氧化损伤,IL-1Ra剂量依赖性地缓解了LPS引起的氧化损伤,添加剂量以1 ng/mL为宜。

摘要：本试验旨在研究维生素A对一氧化氮(NO)诱导损伤的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)内乳脂合成相关酶活性和基因表达下降的缓解作用,并从中筛选出适宜的维生素A添加量。本试验采用单因子完全随机试验设计,以二乙烯三胺/一氧化氮聚合物(DETA/NO)作为氧化应激源,对照组不添加DETA/NO和维生素A培养30 h;试验1组(记为NO组)不添加维生素A培养24 h后添加DETA/NO继续培养6 h;试验2~8组(记为NOA0.05、NOA0.1、NOA0.2、NOA0.5、NOA1、NOA2和NOA4组)分别添加0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00和4.00μg/mL维生素A培养24 h后添加DETA/NO继续培养6 h。每组6个重复。结果表明:与对照组相比,NO组细胞活力,谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)、硫氧还蛋白还原酶(TrxR)、脂肪酸合成酶(FASN)、脂蛋白脂酶(LPL)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)活性,甘油三酯(TG)含量,总抗氧化能力(T-AOC)及GPx、TrxR、过氧化酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、ACC和FASN mRNA相对表达显著下降(P<0.05),活性氧(ROS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性和一氧化氮(NO)含量显著增加(P<0.05)。与NO组相比,NOA0.1~NOA4组细胞活力、T-AOC与ACC、FASN、LPL活性以及GPx1、TrxR、FASN、LPL、PPARγ和SREBP1 mRNA相对表达量显著增加(P<0.05);NOA0.2~NOA2组TG含量,TrxR、CAT、GPx和SCD活性及SCD mRNA相对表达量显著增加(P<0.05),而iNOS活性、NO含量显著降低(P<0.05)。综合上述结果分析得出,NO诱导BMECs损伤导致抗氧化功能及乳脂合成相关酶活性及基因表达、TG合成下降;维生素A缓解了NO诱导损伤的BMECs抗氧化功能和乳脂合成的下降,以0.20~2.00μg/mL的效果较好,尤以1.00μg/mL效果最好。

摘要：本试验旨在研究添加维生素A对一氧化氮(NO)诱导损伤的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)内乳蛋白合成下降的缓解作用。试验采用单因子完全随机试验设计,以二乙烯三胺/一氧化氮聚合物(DETA/NO)作为氧化应激源,将第3代BMECs随机分为9组,分别为对照组(CON组)、NO损伤组(NO组)和NO损伤+不同浓度(0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、4.00μg/mL)维生素A预保护组(NA0.05、NA0.1、NA0.2、NA0.5、VA1、VA2和NA4组),每组4个重复。待细胞生长融合至80%~90%后,使用无血清培养基饥饿培养12 h后,CON组不添加维生素A和DETA/NO继续培养30 h;NO组不添加维生素A培养24 h后,再添加1000μmol/L的DETA/NO继续培养6 h;NA0.05、NA0.1、NA0.2、NA0.5、VA1、VA2和NA4组分别添加0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、4.00μg/mL的维生素A培养24 h后,再添加1000μmol/L DETA/NO继续培养6 h。结果显示:与CON组相比,NO组细胞的相对增殖率以及细胞内硫氧还蛋白还原酶(TrxR)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、p70核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)活性与总抗氧化能力(T-AOC)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)含量以及αs1-酪蛋白(CSN1S1)、β-酪蛋白(CSN2)、κ-酪蛋白(CSN3)、mTOR、S6K1、真核起始因子4E(eIF4E)、真核起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)、信号转导和转录激活因子5(STAT5)的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),诱导型氧化氮合酶(iNOS)活性、活性氧(ROS)和NO含量显著升高(P<0.05)。与NO组相比,NA0.2~NA4组TrxR、CAT、GPx活性与T-AOC显著升高(P<0.05);NA0.2~NA1组CSN1S1的mRNA相对表达量显著上调(P<0.05);NA1组S6K1活性和GPx1、CSN2和酪氨酸激酶2(JAK2)的mRNA相对表达量显著上调(P<0.05),NO和ROS含量显著下降(P<0.05);NA4组mTOR、S6K1、4EBP1和eIF4E的mRNA相对表达量显著上调(P<0.05),iNOS活性显著下降(P<0.05);NA2、NA4组mTOR含量、TrxR和STAT5的mRNA相对表达量显著上调(P<0.05)。综上可知,NO诱导损伤BMECs后导致其细胞活力、抗氧化能力和乳蛋白合成相关酶活性及基因表达的下降;维生素A对NO诱导损伤的BMEC内乳蛋白合成下降有缓解作用,其效果以0.20~2.00μg/mL较好,尤以1.00μg/mL最好。

摘要：试验旨在研究乙酸与蛋氨酸(Met)互作效应对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)内乳蛋白合成相关基因及蛋白表达的影响。采用2×6双因素完全随机试验设计,因素一为乙酸的浓度,设6个水平,分别为0、4、6、8、10和12 mmol/L;因素二为Met浓度,设2个水平,分别为0.13 mmol/L、0.52 mmol/L。将第三代BMECs随机分为12个处理组,每组6个重复,按试验要求培养48 h,测定各项指标。结果显示:Met浓度为0.13 mmol/L或0.52 mmol/L时,随乙酸浓度的增加,BMECs内CSN3、JACK2、STAT5的表达均有上调,CSN1S1明显下降。Met浓度为0.52 mmol/L时,8、10、12 mmol/L乙酸组CSN3、JACK2、STAT5、CSN1S1的表达明显提高,乙酸为8 mmol/L时,CSN3和JACK2、STAT5表达明显提高,乙酸浓度为0时,CSN1S1表达明显提高,乙酸浓度为6、8、10、12 mmol/L时,mTOR和4EBP1表达明显提高。在Met浓度为0.13 mmol/L或0.52 mmol/L时,随着乙酸浓度升高JACK2/STAT5信号通路基因表达、mTOR及其下游相关因子的磷酸化水平先提高后降低。研究表明,Met与乙酸互作效应对BMECs内乳蛋白合成具有显著影响,以Met浓度为0.52 mmol/L、乙酸浓度为6 mmol/L组合促进效果较好。

摘要：试验采用高锰酸钾滴定法,比较不同浓硝酸添加量对钙测定过程及结果的影响。采用3×4试验设计,选择3种典型饲料(钙含量高、中、低)作为试验样品,每种样品设计4种(高、中、低)硝酸添加量溶解灰分,测定过程中统计甲基红指示剂调节pH值所使用的盐酸及氨水的量,比较钙的测定结果,探讨浓硝酸添加量对后续钙测定过程及结果的影响。结果显示:不同浓硝酸添加量对钙含量测定过程及结果无显著影响(P>0.05)。研究表明,实际生产检测中选用较少量的浓硝酸便可溶好样品中的灰分,降低生产成本。

摘要：试验采用体外三步法(胃蛋白酶-胰酶-盲肠液法)研究了6种常用驴粗饲料原料体外营养物质降解率。采用单因素完全随机试验设计,比较研究全株玉米青贮、玉米秸秆、谷草、苜蓿、燕麦草、羊草6种粗饲料的体外营养物质降解率,每种粗饲料作为一个处理,每个处理6个重复。饲料原料在模拟胃内环境消化1 h,模拟小肠内环境消化24 h,在体外盲肠环境连续培养48 h。结果显示,全株玉米青贮和苜蓿在驴胃-小肠体外干物质(DM)、有机质(OM)、粗蛋白(CP)营养物质降解率显著高于玉米秸秆、燕麦草、谷草和羊草(P<0.05)。全株玉米青贮和苜蓿在驴胃-小肠-盲肠体外DM、OM、中性洗涤纤维(NDF)、和半纤维素(HCL)降解率与消化能(DE)均显著高于其他4种粗饲料(P<0.05),苜蓿在驴胃-小肠-盲肠体外CP降解率最高,显著高于其他粗饲料(P<0.05),全株玉米青贮与燕麦草次之。研究表明,6种粗饲料中苜蓿和全株玉米青贮体外营养物质降解率较高,表明其营养价值高于谷草、玉米秸秆、燕麦草和羊草。

摘要：本试验旨在探究白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)对二硝基氯苯(DNCB)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)氧化损伤的保护作用,并确定抑制白细胞介素-1(IL-1)活性的最佳IL-1Ra浓度。采用完全随机试验设计,将第3代BMEC随机分为12个组,每组6个重复。1组为对照组,利用不含DNCB及IL-1Ra的培养液培养6 h;2~6组是不同剂量的IL-1Ra处理组,分别利用含有1、5、10、20、50μg/L的IL-1Ra培养液培养6 h;7组为DNCB损伤组,利用含有300μmol/L的DNCB培养液培养6 h;8~12组是不同剂量的IL-1Ra保护组,分别利用含有1、5、10、20、50μg/L的IL-1Ra与300μmol/L DNCB培养液培养6 h。结果表明:与对照组相比,经300μmol/L的DNCB作用6 h后,BMEC的相对增殖率(RGR)以及含硒蛋白[硫氧还蛋白还原酶(TrxR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)]、抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)]活性与总抗氧化能力(T-AOC)均显著降低(P0.05)。综上所述,IL-1Ra竞争性与IL-1R结合,抑制了IL-1的活性,进而抑制了DNCB引起的BMEC氧化损伤及炎症反应,本试验条件下以10μg/L为适宜浓度。

摘要：本试验旨在研究维生素A对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)内乳脂合成的影响。试验采用单因子完全随机试验设计,将第3代BMECs随机分为9个组,每组6个重复。其中,对照组(CON组)用生长培养基培养30 h;H_(2)O_(2)损伤组(H_(2)O_(2)组)用CON组培养基培养24 h后,再加入H_(2)O_(2)继续培养6 h;7个维生素A预保护组则在CON组培养基中添加不同浓度维生素A培养24 h后,再加入H_(2)O_(2)继续培养6 h,维生素A浓度分别为0.05(0.05 VAH组)、0.10(0.1VAH组)、0.20(0.2VAH组)、0.50(0.5VAH组)、1.00(1VAH组)、2.00(2VAH组)和4.00μg/mL(4VAH组)。结果显示:与CON组相比,H_(2)O_(2)组诱导BMECs发生氧化损伤,BMECs的相对增殖率(RGR)、甘油三酯(TG)含量、总抗氧化能力(T-AOC)以及总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、硫氧还蛋白还原酶1(TrxR1)、脂肪酸合成酶(FASN)、脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)、脂蛋白酯酶(LPL)和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)活性显著降低(P≤0.05),ACC、FASN、谷胱甘肽过氧化物酶1(GPx1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)、TrxR1、过氧化酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)相对表达量显著降低(P≤0.05),但活性氧(ROS)活性显著提高(P≤0.05)。与H_(2)O_(2)组相比,0.2VAH~2VAH组BMECs的RGR和GPx1、GPx4、TrxR1、LPL、SCD、FASN、PPARγ和SREBP1相对表达量以及GPx活性和T-AOC显著提高(P≤0.05),并且1VAH组的TG含量、T-SOD和CAT活性显著提高(P≤0.05),且1VAH组的ROS活性显著降低(P≤0.05)。由此可见,维生素A对由H_(2)O_(2)诱导引起的BMECs内抗氧化能力下降、乳脂从头合成和脂肪酸摄取相关酶活性及其基因表达的下调具有剂量依赖性的减缓效果,以0.20~2.00μg/mL维生素A的效果较好,尤以1.00μg/mL维生素A的效果最好。

摘要：本试验旨在通过体外发酵法研究棉籽酶解蛋白对奶牛瘤胃发酵及瘤胃微生物区系的影响。选用体况、泌乳天数相近的4头荷斯坦奶牛作为瘤胃液供体,采用单因子试验设计,将采集的瘤胃液均匀混合后随机分为4组,即对照组(C组)、低浓度组(E组)、中浓度组(F组)和高浓度组(G组),分别添加0(对照)、0.3%、0.5%和0.7%棉籽酶解蛋白(干物质基础)。培养2、4、6、8、12、24、48 h后测定瘤胃发酵参数和瘤胃微生物数量。结果表明:1)与对照组相比,培养2~8 h,各组pH显著降低(P<0.05),但均处于正常范围之内;在整个培养过程中,各组氨态氮(NH 3-N)浓度显著降低,菌体蛋白(MCP)浓度显著升高(P<0.05);C组和G组的总挥发性脂肪酸(TVFA)、乙酸、丙酸、丁酸浓度均显著高于E组和F组(P<0.05),而E组和F组的乙酸/丙酸显著低于C组和G组(P<0.05)。2)与对照组相比,各时间点F组白色瘤胃球菌和黄色瘤胃球菌数量显著增加(P<0.05)。在整个培养过程中,G组反刍兽新月形单胞菌数量显著低于其他组(P<0.05),F组布氏普雷沃氏菌数量显著高于其他组(P<0.05)。培养2~6 h,F组反刍兽新月形单胞菌数量显著高于对照组(P<0.05)。综上所述,棉籽酶解蛋白的添加可改善瘤胃发酵模式,显著提高瘤胃纤维分解菌数量。在本试验条件下,棉籽酶解蛋白的最适添加剂量为0.5%。