摘要：目的用大肠埃希菌表达布鲁氏菌S2株L7/L12蛋白,制备其多克隆抗体。方法设计引物,以S2弱毒株DNA基因组为模板扩增目的基因片段L7/L12,构建pET28a-L7/L12质粒并转化入*** BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达,SDS-PAGE检测表达蛋白的可溶性及其分子质量;金属亲和层析法纯化目的蛋白,BCA法对纯化蛋白定量。将rL7/L12蛋白与弗氏完全佐剂混合(终浓度为0.5mg/ml),每次1ml分两次间隔21d免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。免疫结束后12d,颈静脉采血,分离血清,采用间接ELISA法检测血清抗体效价。以免疫血清1∶200倍稀释作为一抗,采用Western blot分析其与r-L7/L12、布鲁氏菌S2株全菌体蛋白及大肠埃希菌DH5α全菌体蛋白结合的特异性。结果经测序与酶切鉴定,成功构建表达载体pET28a-L7/L12,SDS-PAGA分析表达产物部分为可溶性,分子质量单位约为14ku;SDS-PAGE分析亲和纯化蛋白为单一条带,蛋白质含量为0.8mg/ml。间接ELISA检测免疫血清抗体效价为1∶12 800,该抗体能够与r-L7/L12、布鲁氏菌S2株全菌体蛋白结合,而不与大肠埃希菌DH5α菌体蛋白结合。结论成功克隆L7/L12基因并表达出目的蛋白,制备的抗布鲁氏菌S2株r-L7/L12多克隆抗体能特异识别该表达蛋白。