摘要：目的:联合应用RNAdraw和Sfold软件设计并筛选低毒且高效抑制Hela细胞Ku70 mRNA表达的反义寡核苷酸。方法:从GenBank获得人Ku70 mRNA全序列,联合应用RNAdraw与Sfold软件,根据最小自由能原理设计多条20 nt的反义寡核苷酸,脂质体转染后MTT法检测其非序列特异性细胞毒性,选择毒性最小者并转染Hela细胞,RT-PCR检测转染前后Ku70 mRNA的表达水平并进行比较。结果:靶向Ku70 mRNA设计6条20 nt的反义寡核苷酸,其中NO.1序列非特异性毒性最低,对Hela细胞的生长抑制率(50、100和200 nmol.L-1浓度组分别为4.8%、9.5%和10.2%)与脂质体组比较差异无显著性(P>0.05),用毒性最低序列转染Hela细胞后使Ku70 mRNA表达水平显著降低(P<0.01),条带强度和面积与未转染组比较分别下降81.6%和77.6%。结论:联合应用计算机软件RNAdraw和Sfold对设计反义核酸有较大的指导意义,能实现较高的命中率,设计的反义寡核苷酸能有效抑制Hela细胞Ku70mRNA的表达。

摘要：目的寻找水溶性较好、抗焦虑活性较强的新型化合物。方法设计合成2-芳基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-乙酰胺类化合物,通过体外苯二氮受体竞争结合实验及小鼠高架迷宫行为实验,评价化合物的体内外抗焦虑活性,分析化合物的构效关系。结果与结论共合成28个新型化合物,通过1H-NMR和MS确证其结构,其中I8和I10水溶性良好。苯二氮受体竞争结合实验结果表明,化合物Ⅰ1、Ⅰ8、Ⅰ10、Ⅰ13、Ⅰ19与苯二氮受体的亲和力与阳性对照药物Ro5-4864相当,在浓度为100nmol/L时,其对放射性配体与受体结合的抑制率分别为87%、89%、85%、89%和76%,而Ro5-4864为82%。对水溶性及活性均较好的化合物Ⅰ和Ⅰ进行小鼠抗焦虑活性评价结果表明,其具有明显的体内抗焦虑作用。

摘要：目的　研究端粒酶催化亚基反义寡核苷酸在体内、外对子宫内膜癌增殖的抑制作用 ,探讨反义抑制端粒酶治疗子宫内膜癌的可行性。方法　以端粒酶催化亚单位基因 (hTERT)为靶点设计合成硫代反义寡核苷酸 (AODN) ,评价AODN对子宫内膜癌HEC 1A细胞株的抑制作用。采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检测AODN对细胞增殖能力及细胞生长的影响 ;用逆转录聚合酶链反应技术(RT PCR)、定量端粒酶重复扩增法 (TRAP)检测AODN对hTERT基因转录及细胞端粒酶活性。建立子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型 ,在体内观察AODN的作用特征。结果　不同浓度的AODN转染细胞后 ,均不同程度的影响细胞的生长。AODN作用后细胞的端粒酶活性及hTERTmRNA的表达显著降低 ,且这种抑制作用具有明显的时间和剂量依赖性。低、高剂量AODN两组的对荷瘤鼠肿瘤生长的抑制率分别为 34 2 0 %和 89 2 1% ,顺铂联合AODN抑瘤率达 75 30 %。硫代AODN治疗后端粒酶活性下降 87 32 %。结论　hTERT AODN能够有效地抑制子宫内膜癌细胞生长 ,且与细胞毒性药物顺铂有很好的协同增效作用 ,hTERT基因的反义治疗有望成为内膜癌预防和治疗的新型药物。

摘要：浮游菌是衡量环境洁净度的一项重要指标,然而洁净作业环境与受控实验环境的特殊性往往导致浮游菌的研究比较受限。本文设计并实现了一种微环境实验箱系统,便于在常规实验条件下进行浮游菌研究。Fluent数值模拟表明,浮游菌在实验箱内中上部具备较好的分布状态,并呈现出自下而上的浓度增长分布现象。根据模拟结果,在实验箱内选择不同空间位置的5个测量点进行粒子计数浓度验证实验。实验结果表明金黄色葡萄球菌发菌5 min后各测量点平均粒子浓度均达到了10~7个/m^3数量级,各测量点粒子分布较为一致,且上部浓度略高于中部浓度,中部浓度略高于底部浓度。验证实验结果与数值模拟结果相符,证明该系统能够较好地用于浮游菌研究。

摘要：目的　用随机PCR技术制备构建靶基因文库的随机基因片段。方法　先扩出靶基因 (HIV1Envgp160 )片段 ,然后设计两条引物 ,1条为锚定随机引物用于扩出靶基因的随机片段 ,另 1条为锚定特异引物用于对随机片段进行扩增 ,得到大量的随机片段 ;优化模板量、dNTP浓度、反应时间、温度和DNA聚合酶等反应条件 ,扩出靶基因的随机片段。结果　得到用于建库的理想靶基因随机片段。结论　随机PCR是制备靶基因文库随机片段的一个简便有效方法。

摘要：目的　建立犬吸入全氟异丁烯 (PFIB)致急性呼吸窘迫综合征 (ARDS)模型 ,动态观察演变过程 ,初步探究其损伤机制。方法　自行设计犬染毒装置 ,控制PFIB浓度在 0 .30～ 0 .32mg L ,摸索合适的染毒时间 ,并动态采集血清标本 ,检测白细胞介素 (IL) 6、IL 8含量 ;观察临床表现和器官病理变化。结果　 (1)染毒过程中PFIB的浓度稳定 ;(2 )染毒后动物血氧分压逐步下降 ,直至ARDS水平 ;(3)犬血清IL 8水平 [(0 .2 3± 0 .0 11)ng ml]较染毒前 [(0 .12± 0 .0 0 2 )ng ml]明显升高 ,差异有显著性 (P 0 .0 5 ) ;(4 )染毒后 6h内犬无异常表现 ,其后症状逐渐出现 ,后期表现为典型的ARDS频速浅快呼吸症状 ;(5 )病理观察发现犬双肺绝大部分有严重充血、水肿和不张 ,其他脏器改变为器官缺氧的表现。结论　 (1)所设计的犬染毒装置实现了染毒可控性 ;(2 )染毒 30min ,犬 2 2h后均达ARDS临床诊断标准 ,模型建立方法成功 ;(3)PFIB特异性损伤肺 ,可引起肺的过度炎症反应。

摘要：目的:使用新型DOTA类螯合剂p-SCN-BZ-DOTA对进口人鼠嵌合型抗CD20单抗美罗华进行90Y标记,确定最佳标记条件。方法:采用先螯合抗体再标记核素的方法制备放免复合物,在固定抗体、螯合剂、核素用量及缓冲液的前提下,采用正交设计考察标记反应中的3个关键因素pH值、温度、标记时间对其比活度的影响,确定最佳标记条件。结果:不同标记条件下,放免复合物的比活度波动在0.122~0.327 mCi/mg之间,统计分析后发现,最佳标记条件为:pH值7.5,4℃反应2 h。结论:使用新型螯合剂p-SCN-BZ-DOTA可成功制备90Y-抗CD20单抗放射免疫药物,其放化纯度可满足临床研究使用。

摘要：一氧化氮(NO)是调节神经、心血管、内分泌和免疫系统非常重要的细胞信使分子.NO的研究不仅可以阐明许多生理现象,而且可能为许多疾病的防治提供新的途径和手段.但是,对生物体系NO的检测,目前所采用的方法均有一定的缺陷,如灵敏度不高、特异性不强等.因此,建立一种快速、简便、灵敏和高专一性的可定量分析生物体系中NO的方法十分重要.Joseph和Hans-Gert等人曾用氮氧自由基和环状化合物与NO作用检测NO,但因反应速度太慢和只有6％的捕捉效率未能付诸应用,我们根据有机化合物结构理论,设计、合成了一系列的咪唑类NO自旋探针Ⅰ,利用电子自旋共振(ESR)波谱方法考察了自旋探针的取代基效应,初步建立了一套测量微量NO的方法.目前,可检测到5×10^(-12)摩尔的NO,而且有很强的专一性,不受超氧自由基和羟基自由基的干扰,亦不受介质的pH和盐浓度的影响.

摘要：背景：肺脏含有多种内源性干细胞，分别为来源于内胚层或中胚层的前体细胞，阐明肺组织间充质干细胞的特性有助于了解其在肺损伤中的生物学作用。目的：观察体外分离培养的小鼠肺组织间充质干细胞生长状态、表面标志、分化功能等生物学特性，探讨其对肺损伤鼠的干预效果。设计、时间及地点：细胞学体外观察与随机对照动物体内实验，于2005-10／2007-08在解放军军事医学科学院基础医学研究所细胞生物学实验室完成。材料：清洁级三四周龄C57BL/6雄鼠，用于分离培养肺组织间充质干细胞：清洁级6-8周龄C57BL/6雌鼠20只，分为细胞移植组、模型对照组，10只／组。方法：分离雄鼠肺组织，II型胶原酶消化后，Ficoll法离心，收集界面层细胞，贴壁法分离培养肺组织间充质干细胞，当细胞接近70％～80％汇合时消化传代。细胞移植组、模型对照组小鼠按20mg／kg腔注射马利兰抑制骨髓干细胞的迁移后，均建立博莱霉素诱导的肺纤维化模型，造模后细胞移植组尾静脉注入5×10^5个肺间充质干细胞，模型对照组气管内注射100μL PBS。14d后取材，制备肺组织石蜡切片。主要观察指标：体外培养的肺组织间充质干细胞的生长状态、免疫表型、基因表达、分化潜能、集落形成能力以及静脉移植减轻肺损伤效果。结果：小鼠肺组织来源的间充质干细胞为成纤维样细胞，在体外能够长期培养和快速扩增：其细胞免疫表型为Sca-1^＋，CD44^＋，CD29^＋，CD105^＋，CD54^＋，CD34^-，CD45^-，CD11b^-，c-kit^-，CD31^-；不表达肺泡上皮细胞标志表面活性蛋白C、水通道蛋白5、clara细胞分泌蛋白，胚胎干细胞标志Oct-4和Nanog基因在培养扩增的细胞中持续表达；能够破诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞和表达表面活性蛋白C的肺泡2型上皮样细胞：集落形成率约3％；经静脉输注后，细胞移植组肺损伤和纤维化程度较模型对照组减轻，Masson染色显示只有少量血管周围呈阳性，且经骨髓抑制处理后已接近正常肺组织。结论：体外培养的小鼠肺间充质干细胞能够快速扩增，可向脂肪细胞、成骨细胞和肺泡上皮细胞方向分化：静脉移植后有助于肺组织修复、减轻肺损伤和纤维化程度，且骨髓抑制不影响肺间充质干细胞的保护作用。

摘要：背景:肿瘤患者接受高剂量化疗时,细胞毒药物不仅对肿瘤细胞产生杀伤作用,对正常组织细胞甚至组织干细胞也产生一定损伤。目的:探讨细胞毒药物体外对小鼠肺组织间充质干细胞和骨组织间充质干细胞增殖及分化能力的影响。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-05/2008-08在解放军军事医学科学院基础医学研究所细胞生物学室和解放军北京军区总医院肿瘤科完成。材料:清洁级3～5周龄C57BL/6小鼠3只,由解放军军事医学科学院实验动物中心提供。方法:从胶原酶消化的小鼠肺组织和骨片中分离培养肺组织间充质干细胞和骨组织间充质干细胞,并在含体积分数为10%胎牛血清的α-MEM培养液中培养、传代、扩增。采用MTT法测定马利兰、阿霉素、环磷酰胺、足叶乙甙、甲氨蝶呤、长春新碱、顺铂对两种间充质干细胞生长增殖的影响,参照文献设置药物浓度范围,并设立空白对照,仅加入含体积分数为10%胎牛血清的α-MEM培养液。药物作用后,分别诱导两种间充质干细胞向脂肪和成骨细胞分化。主要观察指标:不同药物作用后,肺组织间充质干细胞和骨组织间充质干细胞的生长抑制、增殖情况及分化能力。结果:①在治疗剂量范围内,肺组织间充质干细胞和骨组织间充质干细胞对环磷酰胺、马利兰和甲氨蝶呤耐受,而对长春新碱、足叶乙甙、顺铂、阿霉素中度敏感。肺组织间充质干细胞和骨组织间充质干细胞对环磷酰胺、马利兰的敏感性相似,但小鼠肺组织间充质干细胞对甲氨蝶呤、长春新碱、足叶乙甙、阿霉素的敏感性均低于骨组织间充质干细胞,对顺铂的敏感性高于骨组织间充质干细胞。②与空白对照比较,环磷酰胺、马利兰和甲氨蝶呤作用后对两种间充质干细胞的增殖能力影响较小。③在环磷酰胺、马利兰、甲氨蝶呤、长春新碱和足叶乙甙等药物作用24h内,两种间充质干细胞仍能被诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞。药物作用72h后,两种间充质干细胞向脂肪和成骨细胞的分化能力减弱甚至消失。环磷酰胺、马利兰和甲氨蝶呤对肺组织间充质干细胞和骨组织间充质干细胞的分化功能影响相对较小。结论:细胞毒药物对小鼠肺组织间充质干细胞和骨组织间充质干细胞具有毒性作用,但不同组织器官来源的间充质干细胞对细胞毒药物的敏感性存在一定差异;药物作用后可影响两种间充质干细胞的增殖和分化能力。