摘要：为了制备具有肝细胞特异靶向性和pH敏感性的脂质体 ,设计并合成了四种带有半乳糖残基的导向分子 ,与具有 pH敏感性的DC chol/DOPE混合制备脂质体 ,通过质粒转染实验、受体竞争抑制实验和红细胞溶血等实验选出最佳转染活性的十八醇 半乳糖甙 (18 gal)脂质体 ,并证明其具有肝细胞特异受体介导的靶向性和 pH敏感性 ,且细胞毒性较小 ,可以作为一种潜在的肝细胞靶向转运系统得到进一步发展 .

摘要：研究辐射诱导的基因表达调控对于认识细胞对辐射损伤的应激反应有重要意义 .在低剂量辐射诱导新基因RIG1表达序列标签 (expressionsequencetag ,EST)片段的基础上 ,通过非克隆cDNA文库和RACE (rapidamplificationofcDNAend)技术获得了其 3′末端 .依据实验得到的这两段EST序列所提供的信息 ,通过生物信息学分析将RIG1基因初步定位在 2 0号染色体 .对 2 0号染色体RIG1区基因组序列进行外显子扫描 ,发现预测的外显子正好与实验得到的EST相吻合 .利用预测的外显子设计特异引物 ,成功地克隆了RIG1基因全长序列 .同时 ,对 2 0号染色体RIG1区的生物信息学分析表明 ,在RIG1基因的上游存在启动子区 ,从而确定了RIG1基因的基因组序列 .因此 ,通过生物信息学辅助设计实验 ,快捷地定位及延伸了未知EST片段RIG1,基本完成了RIG1的全基因、基因组序列及染色体定位研究 .

摘要：以胰岛素样生长因子受体 - 1基因为靶筛选抗肿瘤药物 .根据IGF1RmRNA的二级结构设计了 9条反义寡核苷酸药物 ,以脂质体介导进行转染 ,MTT染色计算细胞生长抑制率 ,从中筛选出一条序列并对之进行优化 ,最后以最佳序列进行体外作用持续时间及体内细胞生长抑制率分析 .结果表明该序列在体内外具有良好的抗肿瘤活性 ,具有剂量依赖性关系 ,且对荷瘤裸鼠无明显的毒性 .

摘要：根据碱基互补原理 ,反义寡核苷酸可与特定病毒基因结合从而选择性地抑制该病毒的复制 ,这是病毒性疾病治疗的新途径 .基于上述原理设计并合成了D2 0 4RNA特异的 6个 5′末端脂肪链修饰的硫代反义寡核苷酸 .体外抗病毒活性评价显示互补于 5′端起始密码、 3′端重复序列和末端序列的

摘要：为了获得具有抗流感病毒活性的反义寡核苷酸 ,针对A型流感病毒基因组 3′和 5′端保守序列 ,设计并合成了多条硫代寡核苷酸 (ODN) :3′端反义ODN(IV3#)与 3′端正义ODN(IV3S) ;5′端反义ODN(IV4#)与 5′端正义ODN(IV4S)以及由 5′和 3′端正义 /反义保守序列组成的复合序列ODN(IV6#和IV7#)。测定了PS ODN的体外细胞毒性和在MDCK细胞中对流感病毒复制的影响。结果表明 :( 1 )PS ODN浓度高达 50 μmol/L时对MDCK细胞末表现有毒性作用 ;( 2 )与流感病毒基因组 5′端互补的ODNIV4#以及由 5′和 3′端保守序列构成的IV6#ODN和IV7#ODN均具有较高的抗病毒活性 ;如IV4#ODN浓度为 1 μmol/L时对流感病毒A/京防 /86 1 (H1 N1 )抑制率近 50 % ,浓度为 1 0 μmol/L或更高时抑制率超过70 % ,且IV4#抑制病毒活性呈现明显的序列和剂量依赖性 ;( 3)IV4#ODN不仅对A型流感病毒H1 N1 亚型有抑制作用 ,对H3N2 亚型也表现较高的抑制活性 ;( 4 )病毒感染复数 (MOI)对IV4#ODN抗病毒活性有一定影响 ,当MOI较低时 ,IV4#ODN表现的剂量效应关系更加明显。抗流感病毒反义寡核苷核IV4#ODN的发现为进一步研究流感新型药物奠定了实验基础。

摘要：以往研究对 34个针对蛋白激酶 C- α m RNA二级结构设计的反义药物 (AS- ODNs)进行了定量构效关系 (QSAR)分析并得到 QSAR方程 .本研究再次设计 1 0个 AS- ODNs验证 QSAR方程对药物活性预测的可靠性 .结果显示其中 4个 AS- ODNsIC50 值明显低于阳性对照 ISIS352 1 (P<0 .0 5) . 8个AS- ODNs与 ISIS352 1的实测 IC50 与 QSAR方程预测相符 ,实测与预测 IC50 之间相关系数为 0 .76(P<0 .0 5) .两个 AS- ODNs,AP1 2 61 (2 0 )和 AP0 1 86(2 0 )的实测 IC50 与预测不符 .结果提示 QSAR方程一定程度上反映了 AS- ODNs活性与靶结构的关系 ,对预测反义药物生物活性有益 .但

摘要：反义寡核苷酸是一种阴离子大分子物质 ,细胞生物利用度较低且易被细胞溶酶体酶降解 ,为了增强反义药物在病变靶细胞内的有效浓度 ,根据受体介导的内吞作用原理 ,针对肝细胞专一性表达的去唾液酸糖蛋白受体 ,设计及制备了一种肝靶向性脂质体 ,这种脂质体同时具有pH敏性。采用竟争抑制实验及鸡红细胞溶血实验分析了其肝细胞靶向性及pH敏性 ;应用肝靶向pH敏脂质体作为药物运载工具 ,介导反义寡核苷酸HCV3 63作用于转基因细胞HepG2 .970 6细胞 ,通过荧光素酶活性检测 ,观察了硫代反义寡核苷酸对HCV 5′NCR调控功能的抑制活性。结果显示 ,不同浓度半乳糖溶液对 5 % 18 gal脂质体有一定的抑制作用 ,浓度超过 2 0mmol L时 ,达到饱和 ,最大抑制率为 3 8% ;溶血实验显示脂质体与红细胞膜融合作用有显著的pH值依赖性 ,pH <6时 ,血红素释放量明显增加 ;肝靶向pH敏性脂质体介导的HCV3 63对HepG2 .970 6细胞中HCV 5′NCR调控基因具有显著的剂量依赖性抑制作用 ,浓度为 1 0 μmol L时 ,抑制率达 86%。综上 ,所制备的脂质体具有一定的肝细胞靶向性及显著的pH敏感性 ,这种脂质体能够增强HCV特异性硫代反义寡核苷酸的细胞内抑制活性 ,这为针对肝炎病毒的反义寡核苷酸的体内活性评价提供了有用的转运体系。

摘要：介绍了微单元结构位置灵敏气体探测器的发展近况,探讨了其在生物医学中的应用前景及利用模拟计算软件辅助设计和研制气体探测器的方法。

摘要：目的:构建FHL2基因的siRNA真核表达载体,观察其对FHL2蛋白表达的影响。方法:利用RNAi干扰技术,设计并合成了两条针对FHL2基因的siRNA,将其克隆到siR-NA表达载体pSliencer 2.1-U6 neo上。将重组质粒和带FLAG标签的FHL2共转染293T人胚肾细胞,通过Western blot实验检验RNAi干扰效应。结果:经过酶切和测序证明,成功构建了FHL2 siRNA真核表达载体。通过Western blot证明,构建的siRNA能有效抑制FHL2基因的表达。结论:成功地构建了FHL2基因的siRNA真核表达载体,转染细胞后能有效地抑制FHL2基因的表达。

摘要：生物技术药物以人类体细胞的基因组、转录本组和蛋白质组三个层次生物大分子为目标 ,基因药物的研究主要针对致病基因的DNA和基因转录本mRNA两类生物大分子 .mRNA从结构上考虑是研发核酸药物的最理想靶标和策略之一 .反义寡核苷酸、特异水解基因mRNA的核酸酶(ribozyme和DNAzyme)以及具有干扰作用的双链RNA(siRNA)是药物设计的策略之二 .mRNA结构靶点研究是研发反mRNA基因药物的基础 ,mRNA分子具有高度折叠的二级及三级结构 ,阐明其可及性位点 ,筛选其结构靶位点序列是关键 .近年研究报道的靶点筛选有约 7种mRNA的实测新技术 ,以及计算机辅助软件预测分析 .但发展分子生物学实验新技术以分析、确认靶点是药物研发策略之三 .