摘要：目的 :利用新兴的生物芯片技术 ,以细菌 2 3SrDNA基因为靶序列 ,实现常见病原细菌的通用检测。方法 :从核酸数据库中调用一些病原细菌的 2 3SrDNA基因序列 ,在指定的片段内设计目的细菌的种特异性寡核苷酸探针 ,用适当的方法固定在玻片上 ,制备寡核苷酸芯片 ;扩增实验细菌 2 3SrDNA基因片段 ,并同时完成荧光素的掺入标记 ,标记扩增产物纯化后 ,与芯片进行杂交 ,根据杂交结果进行条件优化及芯片评价。结果 :通过对探针、固定化、标记、杂交等条件进行优化 ,本实验中所使用的多种实验细菌可以在 4h左右通过杂交得到准确鉴定 ;以奇异变形杆菌为对象 ,本系统最低检出菌液浓度为 10 0个 ml,即反应体系中含 10个菌体即可检出。结论 :本研究建立的寡核苷酸芯片系统可以稳定而特异地实现多种细菌的通用检测 ,具有良好的应用前景。

摘要：建立了一种可快速、同时检测流行性乙型脑炎病毒(JEV)、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)、西尼罗病毒(WNV)、森林脑炎病毒(TBEV)和圣路易脑炎病毒(StLEV)等6种虫媒病毒的PCR-Mass检测方法。根据GenBank登录的上述6种病毒的序列信息,经过分析比对,设计6组扩增引物和延伸探针,初步建立针对上述6种病毒的PCR-Mass检测体系。采用上述6种虫媒病毒和其他常见致病性病毒为检测对象,确定PCR-Mass体系的特异性;通过对重组质粒的定量检测,确定该体系的检测灵敏度;并利用该体系对12份TBE阳性和10份JEV阳性脑脊液样本进行检测,评价检测方法的实用性和临床应用价值。结果表明:PCR-Mass检测方法可同时检测上述6种虫媒病毒,而对其他病毒检测均为阴性,无交叉反应现象;6种虫媒病毒的最低检出浓度均为***-1;对22份阳性样本的检测结果均呈阳性。本研究建立的PCR-Mass检测方法可实现对6种虫媒病毒的快速、同时检测,具有良好的特异性和较高的灵敏度。

摘要：本文叙述了微波杀菌多因素影响的研究。采用定量载体方法,以枯草杆菌黑色变种芽胞ATCC9372株作指标菌。用L_(27)(3^(13))正交表设计试验,统计学进行分析。结果表明:微波杀菌的主要影响因素是输出功率和照射时间,并且两者之间存在明显交互作用。另外,协同剂、包装方法和负载量都影响微波的杀菌作用。

摘要：目的　研制鼠疫耶尔森菌全基因组DNA芯片 ,并将其用于比较基因组分析。方法　挑选出 4 0 0 5条鼠疫耶尔森菌基因 ,PCR扩增各基因 ,以纯化的PCR产物点样制备芯片 ,采用双色荧光杂交策略 ,进行芯片比较基因组杂交。结果　设计了若干质控杂交组合 ,芯片杂交结果与全基因组测序结果完全一致。

摘要：以冷适应、温度敏感、减毒的B/Ann Arbor/1/66流感病毒株作为重配病毒骨架,对其6个内部基因片段进行了全基因合成,同时人工引入9个氨基酸突变.构建了8个基因的拯救载体,经测序获得序列准确的拯救质粒,命名为:pAB121-PB1,pAB122-PB2,pAB123-PA,pAB124-HA,pAB125-NP,pAB126-NA,pAB127-M和pAB128-NS.在成功拯救冷适应A型流感病毒的基础上,利用反向遗传学技术成功获救了具有感染性的重配B型流感病毒株,命名为rMDV-B.该重配病毒株以B/Ann Arbor/1/66为病毒骨架,其中HA和NA来源于2006～2007年当年流行株B/Malaysia/2506/***-B在鸡胚尿囊液和MDCK细胞中的HA效价可达1∶64～1∶512.实验结果暗示:从单一供体病毒株可以产生有效的减毒活B型流感病毒疫苗候选株,能够为将来人用流感疫苗的设计提供可借鉴的模型.

摘要：根据淋球菌染色体随机克隆片段ＯＲＦ－Ｉ基因序列设计的一对聚合酶链反应引物，能特异地对所有血清型淋球菌扩增出预期的４６１ｂｐ片段。采用两种不同的标本处理方法，检测５７份临床标本的结果表明，标本的ＰＣＲ前处理过程对ＰＣＲ检测结果有重要影响。若以培养的结果为＂金标准＂，ＰＣＲ的敏感性为９７．１％，特异性为９１．３％。ＰＣＲ不但具有简便快速的优点，对已用药的患者及女性宫颈标本的检测可能较培养法更为准确可靠，可推荐作为临床常规诊断方法。

摘要：目的研究青海省鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)基因型分布特征。方法对分离到的青海省148株鼠疫菌,根据已经证实的22个差异区段设计引物,每株鼠疫菌的每个基因差异区段都采用PCR技术进行验证。结果148株青海省鼠疫菌共包括8个基因型,即1、5、7、8、14型、新基因组型和Ype-ancestor型,其中以5型和8型为主。祁连山南麓和青海湖环湖地区的祁连、门源、刚察、海晏、共和、天峻等的菌株绝大多数属于基因型8型,占40．5％(60／148);位于青南高原的格尔木、玉树、扎多、治多、称多、囊谦和曲麻莱等的菌株,其基因型主要为5型,占31．8％(47／148)。青藏高原青海田鼠鼠疫疫源地鼠疫菌基因型全部为14型,占8．1％(12／148)。结论在青海省分离的鼠疫菌中,喜马托雅旱獭鼠疫疫源地鼠疫菌的基因型以5型和8型为主,青海田鼠疫源地鼠疫菌以基因型14型为主。

摘要：噬菌体(bacteriophage,phage)是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的细菌病毒的总称。噬菌体在生态、微生物进化、细菌性疾病预防和治疗、细菌鉴定与疾病诊断等方面扮演重要角色。基因组测序技术和高效合成平台促进了合成基因组学的发展。利用合成基因组学技术,对噬菌体基因组进行设计或者合成出新的噬菌体来服务人类在不久的未来可能成为现实。但与此同时,合成噬菌体带来的风险也必须认真考虑。

摘要：为了实现复杂生物危害现场病原体的快速侦检,需要制备多样化的生物样品,建立多模态生物光谱数据库,最终实现有针对性的危害病原体快速灭活。其中,雾化喷嘴的设计是制备高质量生物样品的关键技术。该技术可以将液体生物样品雾化成细小雾滴,再通过低温冷冻+升华作用形成生物样品颗粒。通过空气辅助雾化喷嘴的优化设计,可以在不损害生物活性的低流量、低压力条件下,获得微小且均匀的雾化液滴。文中采用RANS+DDM方法对喷雾场进行模拟,对空气辅助雾化喷嘴在常温和低温加热条件下的雾化特性进行了分析模拟。同时,采用LES+VOF方法对近喷孔区域气体旋流对液体射流的扰流作用进行了模拟,分析了射流的雾化机理。最后,使用空气动力学粒度仪对空气辅助雾化喷嘴的雾化效果进行了测试,结果证明:喷嘴的雾化效果良好,可实现平均粒子直径约1μm的超细雾化;通过低温喷雾冷冻干燥制备的生物样品质量达到了设计要求,可以有效地实现大批量生物气溶胶样品的制备,提升生物危害现场病原体的侦检及防御能力。

摘要：目的　建立特异敏感的快速检测贝氏柯克斯体的分子生物学方法。方法　采用巢式聚合酶链反应 (PCR)方法 ,进行实验室模拟检测。结果　以贝氏柯克斯体com1基因 (编码 2 70 0 0蛋白 )为靶标设计了 2对引物 ;该引物特异性实验表明仅贝氏柯克斯体特异性片段可以扩增出来 ,其余相关立克次体均扩不出 ;敏感性测试结果可检测出 1.5fg的贝氏柯克斯体DNA ,可检测出 0 .0 0 1个鸡胚半数致死量 (CELD50 )的立克次体 ;以 10 0 0 0个CELD50 立克次体感染小鼠时 ,可于 2 4h在脾脏中检测出贝氏柯克斯体 ,检出率为 83.3% ;对人工模拟的灭菌牛奶、小鼠脏器研磨液、蜱组织研磨液、小鼠血液标本检测发现该法在牛奶和血液标本中的检测敏感性下降 3～ 4个滴度。结论　巢式PCR是快速检验贝氏柯克斯体的敏感特异的方法 ,经过进一步推广应用 ,有望应用于临床检验。