摘要：为了获得翻译控制肿瘤蛋白 (TCTP)基因 ,提取恶性疟原虫海南株 (FCC1)总RNA ,直接用总RNA反转录成单链DNA ,再用长距PCR方法扩增出双链cDNA .根据小鼠约氏疟原虫TCTP基因序列设计引物 ,以cDNA为模板合成了恶性疟原虫海南株TCTP基因 .以pMD18 T为载体 ,用大肠杆菌XL1 blue对基因克隆 .测序结果表明 ,此基因序列与小鼠约氏疟原虫TCTP基因序列有 85 %同源性 .由此基因序列推导出的TCTP氨基酸序列 ,与小鼠约氏疟原虫TCTP氨基酸序列有 88%同源性 .进入GenBank国际基因库 (美国 )检索 ,所克隆的基因与基因库中恶性疟原虫基因同源性为 97% ;由所克隆的基因序列推导的TCTP氨基酸序列 ,与国际基因库恶性疟原虫TCTP基因推导的TCTP氨基酸序列仅有 1个氨基酸差异 .

摘要：目的对西多福韦凝胶剂的处方组成及工艺进行研究,获得合理处方。方法采用正交设计法,以外观、黏度、p H值、稳定性及释放度为综合指标,优化处方中羟乙基纤维素、丙三醇、聚乙二醇400的用量,制备西多福韦凝胶。结果西多福韦凝胶剂最佳处方为:羟乙基纤维素含量2%,丙三醇含量10%,聚乙二醇400含量10%。结论优选处方制备的西多福韦凝胶剂均匀半透明,黏度适中,稳定性良好,8 h释放度大于95%。

摘要：根据已知的C蛋白基因序列设计一对引物,用PCR法从HBVadw亚型全基因组克隆中扩增出约500bp的DNA片段。将该基因克隆到表达质粒pQE30中,转化大肠杆菌,进一步对重组质粒中的插入片段进行DNA测序,证明是C基因。阳性克隆子经IPTG诱导后,获得了目的蛋白的表达,菌体经超声破碎后,目的蛋白主要存在于上清中,为下一步研究其抗原性和免疫原性奠定了基础。

摘要：目的:建立快速筛查A型肉毒毒素的PCR方法。方法:根据GenBank中报道的肉毒毒素基因序列,综合应用多种生物软件分析设计特异的检测引物,从提取的基因组DNA、热裂解产物和菌液等不同形式的模板中扩增大小为457bp的A型肉毒毒素特异基因片段,以肉毒梭菌其他血清型及破伤风梭菌为对照。结果:检测方法无交叉反应,灵敏度可达10pgDNA,3×103个菌。结论:建立的检测方法特异性强、灵敏度高,可以用于A型肉毒毒素基因的快速筛查。

摘要：目的利用SmartCycler系统建立一种简便、快速的荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,简称SAU)的方法。方法根据SAU特异nuc基因设计引物和探针,建立检测体系,并在体系中加入内质控IAC,通过另一个标记不同荧光基团的TaqMan探针来监测IAC。用SAU6538株污染饮用水和牛奶模拟实际样本,以评价体系的性能。结果以含nuc片段的线性质粒为模板,反应体系的灵敏度为5拷贝/μl;以6538株基因组DNA为模板,最低检测限为10fg/μl;用涂平板法计数并10倍梯度稀释的菌液提取DNA为模板,最低检测限为50cfu/ml。建立的定量标准曲线的循环域值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r2≥0.998),PCR效率E≥96.7%。用SAU6538污染饮用水和牛奶模拟实际样本,灵敏度可达5×102cfu/25ml样本。结论所建立的nuc-IAC荧光定量PCR具有内质控IAC,既能定量检测食物是否被污染,又能监测PCR体系,防止假阴性发生或低估病原菌污染量。

摘要：为了给医护、实验室及现场操作人员提供对SARS等传染病有效的呼吸道防护装置 ,研制了一种高效生物防护口罩并对其生物防护效果进行了评价。该口罩根据中国人脸形特征设计 ,口罩主体为 3层无纺布复合的腔式结构 ,鼻梁部采用双层反向锯齿形密封结构。采用直接生物气溶胶过滤采样方法 ,对该口罩防护效果进行检测。结果 ,测得气溶胶的质量中值直径 (MMD)分别为 2 .2 7和 1.35 μm ,几何标准差分别为 (σg) 1.2 2和 1.17,气溶胶粒谱分布均匀 ,接近于单分散气溶胶。该口罩对粘质沙雷菌和大肠杆菌F2 噬菌体的滤除率分别为 99.99%和 99.5 4 %。结果提示 ,该口罩可以有效地防止生物气溶胶的危害。

摘要：目的　建立一种快速、准确、特异的定量检测鼠疫耶尔森菌的方法。方法　针对鼠疫耶尔森菌特异的染色体标识序列设计引物和TaqMan探针,进行实时定量聚合酶链反应(polymerasechainreaction ,PCR)分析,优化反应体系,检测其灵敏度、特异性和重复性。结果　以EV76灭活培养物为对象,检测灵敏度可达每反应体系0 .0 8CfU ;30株非鼠疫菌株的检测结果表明,对照菌株均为阴性,检测特异性良好;对同一样品进行17次重复检测,其循环阈值的标准偏差为0 .35。结论　TaqMan探针法能够灵敏、特异、稳定地对鼠疫耶尔森氏菌进行定量检测,为鼠疫监控。

摘要：为了建立能对25种重要人兽共患病病毒进行筛查及鉴定用的基因芯片技术,本实验首先设计针对每种病毒的寡核苷酸探针并进行探针特异性的生物信息学验证.然后探索病毒核酸随机扩增方法,优化杂交动力学条件,建立本芯片标准的数据处理分析方法.最后用细胞培养的病毒和模拟临床标本验证芯片的敏感性与特异性.结果表明,锚定随机PCR扩增法适合于本芯片病毒核酸的扩增;芯片杂交前用0.25%NaBH4进行封闭,最优杂交条件为51℃,2h及50%甲酰胺浓度;芯片具有较好的敏感性及检测特异性.初步结果表明,本实验所建立的基因芯片技术可应用于对25种重要人兽共患病病毒进行筛查及鉴定.

摘要：目的构建带His标签的2型猪链球菌H因子结合蛋白(Fhb)截短表达片段Fhb-N(45-344aa)和Fhb-C(345-664aa)的重组质粒,并在大肠杆菌中表达,获得高纯度的重组蛋白,鉴定其与人血清IgG(hIgG)结合的活性。方法以05ZYH33基因组为模板并设计引物扩增目的片段,构建His-Fhb-N和His-Fhb-C重组表达质粒,利用亲和层析纯化目的蛋白并用Western blot法进行验证。蛋白G亲和层析柱从健康人血清中纯化人IgG(hIgG),Western blot法和生物膜干涉(BLI)鉴定和分析His-Fhb与hIgG结合的活性。结果成功构建了带His标签的原核表达质粒并获得了His-Fhb-N和His-Fhb-C截短表达蛋白,验证出Fhb特异性地与hIgG结合,且结合区域位于Fhb-N(45-344aa)。结论 Fhb能够结合hIgG,结合区域位于Fhb-N。

摘要：目的扩增埃及伊蚊电压依赖性钠离子通道基因3′末端,并对其核苷酸序列进行分析。方法提取埃及伊蚊雌蚊总RNA,以Trsa为反转录引物反转录成单链cDNA,继而设计阳性与阴性对照,采用巢式聚合酶链反应(PCR)和快速扩增cDNA3′末端(3′RACE)技术,对埃及伊蚊电压依赖性钠离子通道基因3′末端进行PCR扩增、克隆与测序。结果获得钠离子通道基因的3′端核苷酸序列共809bp,包括编码区和非编码区poly(A)尾,编码区共编码208个氨基酸。相似性分析结果显示编码区氨基酸序列与家蝇钠离子通道基因3′端氨基酸序列相似性为65%左右。结论成功获得埃及伊蚊钠离子通道基因3′端,为进一步研究该基因的分子生物学特性奠定了基础。