摘要：目的　针对SARS冠状病毒 (SARS CoV)M、N、S和E蛋白 ,构建 4种重组真核表达质粒pVAX1 M、pVAX1 N、pVAX1 S和pVAX1 E ,为研制SARSDNA疫苗奠定基础。方法　根据GenBank中SARS病毒基因序列分别设计M、N、S和E引物 ,用RT PCR方法从感染SARS病毒的Vero E6细胞中扩增得到M、N、S和E片段 ,构建重组质粒pVAX1 M、pVAX1 N、pVAX1 S和pVAX1 E。并以重组质粒转染COS 7细胞 ,用免疫细胞化学和Westernblot方法鉴定重组质粒体外的表达。结果　经酶切鉴定及DNA序列测定证实重组质粒构建正确 ,细胞转染实验表明 ,构建的 4种重组质粒均能在COS 7细胞内表达。结论　成功构建 4种SARS CoV 4种蛋白抗原真核表达质粒 ,并能在真核细胞内获得表达。

摘要：目的　建立鼠疫耶尔森氏菌多重PCR鉴定系统 ,用于鼠疫耶尔森氏菌的快速鉴定。方法　针对分别存在于pFra、pRst质粒上毒力基因caf1和pla ,以及一段 2 76bp染色体序列 3a分别设计引物。采用多重PCR技术 ,同时检测caf1、pla、3a三个靶序列。结果　应用该多重PCR反应体系 ,对我国鼠疫耶尔森氏菌 17个生态型及新发现的青海田鼠鼠疫疫源地菌株的多重PCR扩增结果表明 ,实验菌株中除 2株分别缺失pFra、pPst质粒而扩增出 2条产物带外 ,其余 5 2株均扩增出预期的 3条产物带 ,相关菌株均阴性 ,其检测灵敏度为 1× 10 -4ngDNA。 结论　该方法用于鼠疫耶尔森氏菌的鉴定简便、快捷 ,具有很高的特异性和敏感性 。

摘要：面对后埃博拉时代公共卫生的巨大需求,非洲联盟正着手建立非洲疾病预防控制中心(非洲疾控中心,ACDC),并通过总部与5个区域分支的建设,建立覆盖非洲大陆一体化的疾控体系,引领提升非洲各国公共卫生水平。该文系统分析ACDC建设现状与不足,总结其未来建设计划与发展战略,为中非卫生合作以及我国未来生物安全与传染病防控的全球化战略提供决策参考。

摘要：设计了一种新的病原体蛋白质B细胞抗原表位的筛选和重组表达方法。不须使用抗原 ,而通过交替用病人血清IgG抗体“淘洗”(biopanning)随机肽库和用正常人血清IgG反向吸附 ,来获得特异抗原表位资料。用HIV病人血清的IgG抗体淘洗噬菌体递呈随机十二肽库 ,再以正常人IgG抗体吸附 ,筛选到了能和HIV病人血清发生特异反应的噬菌体克隆 ,经ELISA、DNA测序等 ,成功地筛选出了位于HIVgp41外膜蛋白、高亲和力、构型特异的优势B细胞抗原表位 ( 60 2 GCSGKLICTTNV61 3)。用大肠杆菌硫氧还蛋白作为骨架 ,在其活性部位以“内融合”形式重组表达了该抗原表位 ,纯化的重组蛋白具有良好的抗原性 ,能与HIV( + )IgG抗体及艾滋病人血清呈特异反应 ,表明本技术路线可以有效地进行HIV蛋白质的B细胞抗原表位筛选和重组表达。此方法也可移植于其它病原微生物抗原或自身抗原的表位研究 ,继而为基于抗原表位水平的特异诊断试剂的研制、疫苗的设计提供依据。

摘要：目的采用TaqMan- MGB探针建立检测五日热巴通体的实时荧光定量PCR(real- timequantitativePCR)方法。方法根据五日热巴通体特异的16-23SrRNA间隔区序列设计引物和探针,以克隆的1623SrRNA间隔区基因片段作DNA模板,建立了检测五日热巴通体实时荧光定量检测方法。结果建立的定量标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.996);与普通PCR相比较,荧光定量PCR检测的灵敏度约为它的200倍。用荧光定量PCR检测其它相关立克次体和细菌,检出结果为阴性。实时荧光定量PCR检测五日热巴通体实验感染小鼠血、脾脏、肝脏和肺组织DNA样本,脾脏和肝脏样本中检出较高水平五日热巴通体DNA,血和肺部检出的目的DNA的水平较低。结论本研究建立的检测五日热巴通体的实时荧光定量PCR法具有很高的检测灵敏度和特异性,可用于临床患者血样本的检测,作五日热的早期诊断。

摘要：气溶胶暴露设备是进行实验动物感染研究必不可少的条件。考虑到设备性能、造价及实验要求等因素，目前仍以动态感染口鼻或头部暴露最为常见。对自行设行、研制的一套动态暴露装置的设计原理、设备性能及其应用方法进行了概述。

摘要：根据丙型肝炎病毒 (HCV)丝氨酸蛋白酶晶体结构特点 ,设计并构建了一种新的单链型丝氨酸蛋白酶分子 .该分子由辅因子NS4A的核心序列、柔性连接子GSGS和NS3丝氨酸蛋白酶结构域组成 .利用设计的 3条引物 ,通过 2轮PCR获得单链丝氨酸蛋白酶基因 ,插入原核表达载体pQE30中 ,转化大肠杆菌M15 ,获得重组克隆 .经低剂量诱导和低温培养 ,目的基因获得高水平可溶表达 .以金属螯合层析法纯化的重组蛋白纯度达 95 %以上 .间接ELISA法检测 98份血清证实 ,该蛋白具有良好的抗原性和特异性 ;以重组蛋白底物NS5ab和单链丝氨酸蛋白酶建立了简便、实用的丝氨酸蛋白酶体外活性检测系统 ;以该系统观察了PMSF和EDTA对蛋白酶活性的影响 .结果表明 ,PMSF能够抑制蛋白酶的酶切活性 ,而EDTA不能抑制酶的活性 .单链型HCV丝氨酸蛋白酶的成功表达以及体外活性检测系统的建立 ,为丝氨酸蛋白酶抑制剂的研制奠定了物质基础 .

摘要：采用激光诱导荧光光谱方法测量大气中气溶胶颗粒物的散射荧光特性,同时用飞行时间方法测量颗粒物的动力学直径大小。给出了实验系统设计、测量方法、颗粒粒径分布图及散射荧光强度分布谱图的对比,并对多组实验数据进行分析。同时讨论了利用颗粒物散射荧光百分比分析方法判别生物粒子和非生物粒子的可行性。

摘要：目的　探讨HIV 1gp4 1抗原表位串联表达蛋白用于HIV抗体检测的可行性。方法用HIV 1gp4 1蛋白亲和层析柱制备HIV 1感染者血清中的多克隆抗体 ,用噬菌体展示随机十二肽库进行生物淘洗 ,反向吸附非特异性噬菌体。经ELISA鉴定阳性克隆 ,DNA测序 ,确定优势表位。将优势表位与文献报道的另一个优势表位串联 ,克隆入pQE30载体进行蛋白表达。结果　成功筛选到位于HIV 1gp4 1蛋白上的优势抗原表位 (YGPKDAETTAIW ) ,串联表位 (YGPKDAETTAIW GGGS SC SAKFTCTTQI)在pQE30载体中实现可溶性表达。重组蛋白具有良好的抗原性 ,能与不同的HIV 1抗体阳性血清呈特异反应。结论　HIV 1gp4 1抗原表位串联表达设计是可行的 ,串联表位重组蛋白可用于HIV 1抗体检测 ,但检测灵敏性低于常规方法。

摘要：目的　研究 3种致病耶尔森氏菌Hsp6 0基因序列的差异。方法　根据文献和基因库中的Hsp6 0基因序列设计了两对PCR引物 ,获得Hsp6 0基因的部分序列。将扩增产物纯化回收 ,克隆至 pGEM -T载体后进行测序。 结果　用CLUSTALX软件进行序列分析 ,发现 3种耶尔森氏致病菌的Hsp6 0基因序列较为保守 ,其中鼠疫耶尔森氏菌和假结核耶尔森氏菌的该基因序列在所研究范围内仅相差一个碱基。结论　 3种菌的Hsp6 0基因保守 ,不足以在此区间设计种特异性探针。小肠结肠炎耶尔森氏菌与鼠疫耶尔森氏菌和假结核耶尔森氏菌的Hsp6 0基因序列差异较大 。