摘要：目前SARS的流行特点和规律还不明确,传播途径和致病机理也不十分清楚.为了更好地诊治和预防SARS,我们对某医院爆发的病例进行了个案和血清流行病学调查.1.对象与方法:选取北京某部医院临床确诊的103例SARS患者作为研究对象,诊断标准采用卫生部颁发.自患者入院后每隔 1～2周采集一次标本,直至出院.个案调查采用统一设计调查表,主要内容包括患者的一般情况(年龄、职业、发病时间、诊断时间等)、临床表现(发热、咳嗽、头痛、呼吸困难等)、实验室检查结果(白细胞计数、肝功、肾功等)、X线检查结果和有无外出史、接触史、住宅类型和环境卫生等.试验方法采用中国军事医学科学院微生物流行病研究所和中科院北京基因组研究所共同研制的SARS冠状病毒抗体(IgG)酶联免疫法诊断试剂盒进行酶联免疫吸附试验(ELISA).由Excel 2000软件录入数据,利用SPSS 10.0统计软件进行数据分析.计量资料采用均值±标准差(±s)表示,计数资料采用百分比表示.

摘要：目的:在大肠杆菌中表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)毒力岛上的毒力因子Z1444并纯化,对其丝/苏氨酸激酶活性进行初步检测。方法:根据GenBank中Z1444基因序列及pET-28a(+)载体的多克隆位点设计引物,以EHECO157∶H7全菌裂解液为模板,经PCR钓取1047 bp的目的片段,与表达载体pET-28a(+)连接,构建重组表达质粒pET-28a(+)-Z1444,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导蛋白表达并经SDS-PAGE鉴定,利用体外反应体系鉴定重组蛋白的丝/苏氨酸激酶活性。结果:双酶切和测序鉴定表明,pET-28a(+)-Z1444原核表达质粒构建正确;诱导表达后经纯化,获得纯度在90%以上的可溶性重组Z1444,相对分子量约为38×103;体外酶活实验验证了Z1444的丝/苏氨酸激酶活性。结论:Z1444在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,为后续功能验证奠定了基础。

摘要：目的了解我国东北部分地区宿主动物携带汉坦病毒状况及其型别。方法采用夹夜法捕鼠，针对不同型别汉坦病毒M片段设计引物，应用RT—PCR检测带毒状况，阳性标本测序，对M片段变异大的标本再进行S片段的扩增测序，获得序列用clustalX（1．83）和Phylip3．63进行分析。结果共捕获鼠类宿主220只，平均阳性率为3．64％，不同鼠种间阳性率差别有统计学意义。其中从棕背鼠平鼠Jilin-54、Jilin-59检测到汉滩型汉坦病毒，从褐家鼠Jilin-99、Ji—lin-106标本中检测到汉城型汉坦病毒。而从大林姬鼠HU-32、Jilin—AP10和HLJ-47中得到的汉坦病毒M片段均与HTNV原型株76-118同源性最高（95．35％～97．42％）；来源吉林（毗邻俄罗斯远东地区）大林姬鼠的Jilin-AP06的汉坦病毒M片段与我国病人分离株B78、H5同源性最高（97.25％～95.33％），与来源俄罗斯远东地区大林姬鼠的Amur类汉坦病毒AP111株同源性为93．48％，与来自吉林大林姬鼠的Jilin93同源性为80．80％，与76-118同源性为80.80％，与朝鲜大林姬鼠分离株Soochong-1同源性为88.24％。Jilin-AP06S片段同其他株的同源性与M片段的结果一致。结论我国东北部分地区宿主动物携带汉坦病毒的型别多样，我国大林姬鼠中存在Amur类病毒感染。

摘要：[目的]建立北京市卫生学流行病学信息系统,为北京市卫生防病工作提供基础信息支持和辅助决策工具。[方法]全面收集近十年北京市卫生学流行病学的资料,整理分析后,建立相应的数据库,采用PowerBuilder和MapX多平台联合开发技术,采用模块化设计,实现系统结构和功能的集成。[结果]建立的北京市卫生学流行病学信息系统,由卫生学流行病学综合信息数据库、电子地图和地理信息系统平台三部分组成。综合信息数据库包括地理环境、水源水质、传染病、医学动物和卫生防疫资源等基础数据库、综合评估数据库和专家咨询支持库,基本涵盖了卫生学流行病学的主要内容。系统采用地图和菜单双重驱动,可方便地实现信息查询、专家咨询、空间分析及数据维护和系统维护等功能。[结论]建立的北京市卫生学流行病学信息系统,内容全面,操作简单,不仅能为卫生防病工作提供信息支持和决策依据,而且对北京市公共卫生信息标准化建设以及其他类似研究均有参考价值。

摘要：目的:构建蜱传脑炎病毒TBE-E-D3抗原的融合蛋白原核表达质粒GSTpET-30a(+)/TBE-E-D3,在大肠杆菌中诱导表达并用亲和层析法纯化,以获得特异性诊断抗原。方法:根据目的基因序列设计PCR引物,利用基因克隆技术构建重组质粒,转入大肠杆菌DH5α后经酶切鉴定,将测序正确的重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后进行亲和层析法纯化,SDS-PAGE分析其表达情况和纯度,间接ELISA法鉴定重组蛋白的特异性和灵敏度。结果:TBE-E-D3基因目的片段以正确的读框插入载体GSTpET-30a(+),通过IPTG诱导在大肠杆菌中正确表达,亲和纯化得到较高纯度的蛋白质;间接ELISA法证明抗原特异性和灵敏度良好,送检的15份阳性患者血清样本中检出10份阳性结果,40份健康人血清样本中检出1份假阳性结果。结论:获得的His-TBE-E-D3融合蛋白具有良好的抗原性,可作为森林脑炎病毒特异性血清学诊断的备选抗原之一。

摘要：目的筛选解脲脲原体（ＵＵ）尿素酶基因上的不同引物及扩增模板区，使扩增敏感性达到最佳。方法以ＵＵ尿素酶基因为靶序列，设计５对引物，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＵＵ１～１４个血清型和系列稀释的ＵＵ８ＤＮＡ，用ＯＬＩＧＯ程序分析引物序列与ＰＣＲ敏感性间的关系。结果不同种的引物对１４个血清型的扩增结果有差异。引物Ｕ１＋Ｂ、Ｕ１＋２、ＵＡ＋Ｂ、Ｕ２＋Ａ及Ｕ１＋Ｃ对１４个血清型的检出率分别为１００％、８６％、７８％、６４％及６４％。结论引物自由能谱之差影响着ＰＣＲ扩增的敏感性。

摘要：我们对80例非甲～非庚型肝炎患者、血清ALT升高以及长期维持性血透患者(部分患者有输血史)进行检测，对二十余例 TTV分离株进行测序研究，结果如下：　　提取患者血清DNA，巢式PCR扩增TTV。参照Okamoto等报道的N22分离株 TTV基因序列设计套式引物:n 5＇-ACA GAC AGA GGA GAA GGC AAC- 3＇(1892 ～ 1913),T2 5＇ - GGA TAC CTA TTAGCT C TC AT- 3＇(2187 - 2207), T3 5＇ -GGC AAC ATG TTA TGG ATA GAC- 3＇(1914- 1935) ,T4 5＇ - CCT C GC ATT TTACCA T TT CCA - 3＇(2165 - 2186)。

摘要：目的　探讨产志贺样毒素大肠埃希菌（ Ｓ Ｌ Ｔ Ｅ Ｃ） 在小儿腹泻中的病原学地位。方法　根据肠出血性大肠埃希菌（ Ｅ Ｈ Ｅ Ｃ） Ｏ１５７ ： Ｈ７ 的 Ｓ Ｌ Ｔ１ 、 Ｓ Ｌ Ｔ２ 、ｅａｅ Ａ 基因片段设计了３ 对引物，采用聚合酶链反应检测大肠埃希菌中 Ｓ Ｌ Ｔ１ 、 Ｓ Ｌ Ｔ２ 和ｅａｅ Ａ 毒力基因。结果　２９ 株标准致泻大肠埃希菌（ Ｅ Ｈ Ｅ Ｃ、 Ｅ Ｐ Ｅ Ｃ、 Ｅ Ｔ Ｅ Ｃ） 和１０ 株其他肠道病原菌中，只有１ 株 Ｅ Ｈ Ｅ Ｃ检出 Ｓ Ｌ Ｔ１ 、 Ｓ Ｌ Ｔ２ 、ｅａｅ Ａ 毒力基因，其他均为阴性。从１ ０３２ 例腹泻患儿粪便中分离的４７４ 株未定型大肠埃希菌中，检出 Ｓ Ｌ Ｔ１ ２０ 株（４２ ％ ） ， Ｓ Ｌ Ｔ２ ７ 株（１５ ％ ） ；７４ 株肠产志贺样毒素且具侵袭力的大肠埃希菌（ Ｅ Ｓ Ｉ Ｅ Ｃ） 中检出 Ｓ Ｌ Ｔ１ １５ 株（２０３ ％ ） ， Ｓ Ｌ Ｔ２ ５株（６８ ％ ） 。结论　 Ｓ Ｌ Ｔ Ｅ Ｃ 是太原地区引起小儿腹泻的一种重要的致泻病原菌。

摘要：为了解决常规PCR方法检测阪崎克罗诺杆菌时因检测过程中环境和食品理化因素的影响而导致的假阴性结果的产生,本研究以细菌16S rRNA基因为扩增内标对照,以阪崎克罗诺杆菌特异性基因grx B为靶基因设计了一对特异性引物,并通过优化PCR反应条件,最终建立了一种添加扩增内标的阪崎克罗诺杆菌PCR检测方法,可以指示PCR过程中因存在DNA聚合酶抑制剂而导致的假阴性结果。通过对20种细菌进行PCR检测显示,该方法对阪崎克罗诺杆菌具有良好的特异性。灵敏度实验结果表明,该检测方法对阪崎克罗诺菌纯DNA模板的检测灵敏度为2.15×102fg/μL,对阪崎克罗诺杆菌纯培养物的检测灵敏度为9.4×103CFU/m L。对人工污染婴幼儿奶粉的检测结果显示,阪崎克罗诺杆菌接种量为0.94 CFU/g的婴幼儿奶粉样品经过8 h增菌培养后,即可检出。食品样品检测结果表明,不添加扩增内标的PCR检测方法中出现的假阴性结果可被本方法检出。该检测方法特异性强、灵敏度较高,能消除阪崎克罗诺杆菌常规PCR检测方法中可能出现的假阴性结果,适用于婴幼儿配方乳粉、乳制品等食品中阪崎克罗诺杆菌的快速检测。

摘要：微小按蚊Anophelesminimus是云南省勐腊地区的重要传疟媒介，DDT和拟除虫菊酯类杀虫剂在该地区长期大量使用，研究微小按蚊与kdr抗性密切相关的para型钠通道基因对该地区选择合理的媒介控制方案预防和阻断疟疾的流行提供理依据。本文分别于2010和2011年9～10月在云南省勐腊县龙塘村和东方红村现场采集微小按蚊后，用分子学方法进行分型，根据GenBank发布的微小按蚊para钠通道IIS6段基因组DNA序列设计特异性引物，扩增现场采集的微小按蚊的该段基因，并测序对比。通过对415个个体的检测发现，1014位点编码的TTA氨基酸密码子没有突变，说明截止目前云南勐腊地区微小按蚊对DDT和拟除虫菊酯类杀虫剂抗性的kdr分子机制尚未出现，其击倒抗性较低，对DDT和拟除虫菊酯类杀虫剂仍然保持敏感。