摘要：本研究的目的是采用荧光定量PCR扩增技术，建立快速检测淡色库蚊CulexpipienspaUens钠离子通道L1014位点击倒抗性（Knockdownresistance，kdr）相关点突变方法，该方法的原理是以突变位点为3’端设计两条特异性上游引物，和一条非特异下游引物组成两对引物平行双管法，用荧光定量PCR扩增快速检测淡色库蚊钠通道L1014F突变的SS，SR，RR3种基因型。用此方法对48个北京淡色库蚊样本进行基因分型，42个样本检测结果与等位基因特异性PCR（AS—PCR）检测结果完全一致，得到ss（TTA／TTA）基因型21个。占50．0％，SR（TTA／TTT）基因型16个，占38．1％，RR（TTT／1W）基因型5个，占11．9％，与测序结果完全一致；另外6个样本检测结果与AS—PCR检测结果不一致，测序显示：TCA（L1014S）、TTC（L1014F）突变备l株，另4株为敏感纯合子。因此，PCRSYBRGREEN扩增灵敏度（93．75％）低于***法（100％），但特异性较高，达100％；分析原因可能是被检测样本引物结合部位多态性较高，影响了引物的结合，而AS—PCR凭经验能完成部分结果的判断。综上所述，用PCRSYBRGREEN扩增技术快速检测淡色库蚊的L1014F基因突变仍是一种值得采纳的等位基因分型方法。

摘要：目的:利用甲醇酵母表达系统,构建重组人骨形成蛋白-7(rhBMP-7)成熟肽的基因工程菌,并实现其分泌表达。方法:采用PCR方法,依据GenBank数据库中hBMP-7成熟肽序列(***_001719)设计并合成一对引物,从已构建的含hBMP-7的克隆载体中扩增获得人骨形成蛋白-7成熟肽基因片段,并以pPIC9K为表达载体构建重组表达质粒,电转化巴斯德毕氏酵母SMD1168,于30℃进行甲醇诱导分泌表达,经筛选获得rhBMP-7成熟肽表达株,并进行了表达产物的活性测定。结果:表达产物存在于培养上清中,约占分泌蛋白总量的8%。经Western印迹分析可以检测到重组表达产物,ELISA检测其具有特异性结合活性。结论:构建了重组人骨形成蛋白-7成熟肽的基因工程菌并在甲醇酵母中实现了分泌表达,为进一步的活性及功能研究奠定了基础。

摘要：结合国家标准GB19489-2004《实验室生物安全通用要求》的修订工作,参考了相关国外实验室生物安全指南和动物生物安全实验室的建设经验,在对ABSL-3实验室的危害评估及平面布局、围护结构、气流组织、压力梯度、高效空气过滤单元、过滤器检漏、室外风口的布置、自动控制与报警系统等进行综合分析的基础上,提出了我国ABSL-3实验室分类和设计要求的建议,以期为标准GB19489-2004的修订和我国ABSL-3实验室的建设提供参考。

摘要：目的：研究雷诺嗪缓释片在比格犬体内的药物代谢动力学，并与参照制剂比较，为其是否具有缓释特征提供依据。方法：首先建立血浆中雷诺嗪浓度的液相色谱一串联质谱联用检测方法，并考察方法的专属性、准确度、日内日间精密度、回收率、线性范围等。采用随机对照试验设计，将12只比格犬随机分为A、B组，每组6只，分别服用1片雷诺嗪缓释片（500mg/片）和1片参比制剂雷诺嗪片（500mg/片），均于给药前和给药后不同时间点采集血样，用已建立的液质联用方法检测血样中雷诺嗪的血药浓度，计算2组比格犬的药代动力学参数。结果：受试组和参照组半衰期￡。分别为13．3±8．3和2．36±0．92h，峰浓度Cmax分别为923．9±340．5和3205±1314ng/mL，达峰时间Tomax分别为1．6±0．38和0．88±0．14h，曲线下面积AUC0-∞分别为6252．1±2860．3和9916±4305（ng·h）/mL，清除率GZ分别为11．3±9．8和6．39±3．95L/（kg·h）。受试制剂雷诺嗪缓释片和参比制剂雷诺嗪片的药代特征和血药浓度一时间变化趋势明显不同，受试组血药浓度缓慢上升和下降，峰值较低；而参照组血药浓度峰值显著高于受试组，有明显的突释效应。结论：液质联用检测方法准确可靠，适合体内药代动力学研究；与参比制剂雷诺嗪片相比，受试制剂雷诺嗪缓释片符合缓释片的基本药代动力学特点。

摘要：目前已发展的定点突变方法主要有盒式突变、寡核苷酸引物突变及ＰＣＲ突变等[1]。常用的ＰＣＲ定点突变法,需要四种扩增引物,共进行三轮ＰＣＲ反应,操作步骤繁琐。近来出现的ｍｅｇａｐｒｉｍｅｒＰＣＲ方法[2]克服了这一缺点。我们设计了三条引物,建立了ｍｅｇａｐｒｉｖ...

摘要：为明确全沟硬蜱涎腺Salp15蛋白家族的基因表达情况，本文根据已知的Salp15序列设计引物对全沟硬蜱幼蜱的总RNA进行RT—PCR，克隆到可与莱姆病螺旋体外膜蛋白OspC互作的涎腺蛋白Salp15CDS序列，命名为***5。对该蛋白做生物信息学预测，其肽链在N端含有信号肽，在c端含有与CD4分子的结合位点。与其他蜱种Salp15蛋白的相似性分别为：62．3％（北美的肩突硬蜱Ixodesscapularis）、74．5％（欧洲的篦子硬蜱Lricinusiric3）、59．4％（西伯利亚全沟硬蜱Lpersulcatus）、67．6％（日本地区的全沟硬蜱iperl）。将该cDNA序列分别加上EcoRI，SalI酶切位点，插入pMAL．c4X表达载体上，经IPTG诱导。在Transetta（DE3）上融合蛋白成功表达。此工作为研究全沟硬蜱的Salp15与莱姆病螺旋体，以及与宿主动物的相互关系奠定了基础。

摘要：为了建立一种含扩增内标的沙门氏菌PCR检测方法,以细菌16S r RNA为扩增内标对照,以沙门氏菌inv A基因为靶基因设计了一对引物,并优化了PCR反应体系。通过对20种细菌进行PCR检测显示,该方法对沙门氏菌具有良好的特异性。灵敏度实验表明,该检测方法对沙门氏菌纯DNA模板的检测灵敏度为61.1 fg/μL,对沙门氏菌纯培养物的检测灵敏度为2×102 cfu/m L。对人工污染蛋清的检测实验显示,沙门氏菌接种量为2 cfu/25 m L的鸡蛋清样品经过8 h增菌培养后,可被该方法检出。结果表明,该检测方法特异性强、灵敏度高,能排除沙门氏菌PCR检测方法中可能出现的假阴性现象,适用于鸡蛋等食品中沙门氏菌的快速检测。

摘要：目的研究部队人员肺结核发病的危险因素。方法采用病例对照研究设计，通过问卷调查获得相关环境因素的信息，采用SPSS软件进行非条件单因素Logistic回归分析，计算OR值及95％CI。结果共152名病例和259名对照纳入分析，单因素分析发现卡介苗接种史及与结核病人密切接触史在病例和对照组中的分布有显著性差异，前者是肺结核发病的保护因素，OR值（95％CI）为0．44（0．29-0．68），后者是肺结核发病的危险因素，OR值（95％CI）为2．12（1．04～4．32）。而抽烟、饮酒情况、肉类摄入量、蔬菜摄入量、健身状况等其他因素在两组中分布差异无显著性。结论卡介苗接种对部队人员结核病发生有显著保护作用，而肺结核病例接触史是一个潜在的危险因素。

摘要：目的 :构建人重组CD80 Linker SEA毒素的真核表达载体并预测Linker的合理性和可行性。方法 :应用核酸和蛋白质序列分析软件GolgKey对融合基因及Linker部位翻译后在二级结构水平上的一些生物学特性 ,诸如柔性、抗原性、亲水性及表位等加以预测。结果 :CD80 Linker SEA融合基因的氨基酸序列经软件分析 ,并分别与CD80和SEA单独的分析结果相比较 ,发现在二级结构的水平未出现新的抗原性 ,同时在Linker部位具有很低的抗原性 ,亲水性没有改变 ,Linker部位呈中性 ,CD80和SEA具有原来各自的表位特征 ,无新的表位出现。结论 :本研究通过计算机软件对CD80 Linker SEA融合蛋白的预测 ,并与CD80、SEA各加以对比分析和比较 ,以利于在重组过程中有一个合理的设计 。

摘要：目的比较双层叠帐法、人帐诱法和人诱停落法对白纹伊蚊成蚊密度监测的效果,为白纹伊蚊成蚊监测及登革热等伊蚊传播疾病的防控提供参考。方法 2016年8-9月,于江苏省宜兴市太华镇内选择成蚊密度较高的3处生境,分别采用3种监测方法开展白纹伊蚊成蚊密度监测,根据拉丁方试验设计,依次轮换监测生境与方法,共进行3轮试验。组间两两比较采用LSD检验;气象资料中不同生境间比较采用方差分析,组间两两比较采用LSD检验;成蚊密度与气象数据间的相关关系采用Pearson相关分析。结果人诱停落法测得白纹伊蚊成蚊平均密度为(30.44±8.70)只/(人·h),高于双层叠帐法[(10.67±7.42)只/(帐·h)]和人帐诱法[(12.89±2.53)只/(帐·h)],差异均有统计学意义(LSD-t双层叠帐法=6.865,P=0.021;LSD-t人帐诱法=6.093,P=0.026);双层叠帐法与人帐诱法监测效果之间差异无统计学意义(LSD-t=-0.772,P=0.521)。平均温度、平均相对湿度和平均风速与白纹伊蚊密度之间均无相关关系(r温度=-0.019,P=0.961;r湿度=-0.031,P=0.938;r风速=-0.332,P=0.383)。结论双层叠帐法与人帐诱法监测效果相当,但二者诱蚊效率均不及人诱停落法。双层叠帐法在保护诱集者方面优势明显,在蚊媒疾病流行区域及暴发期间,仍然是一种行之有效的监测方法。