摘要：近年研究发现,嘌呤能受体P2X4对生物体内的多种重要生命活动起到调节作用。ATP-门控阳离子通道受体P2X4是P2X受体家族中的一员,其主要表达在哺乳动物组织中。P2X4受体的结构分为3个部分,即胞外结构域、跨膜区和胞内N,C端。目前已经解出分辨率高达2.8的担尼鱼(斑马鱼)P2X4(zfP2X4)受体的晶体结构,为后续P2X4结构的研究奠定了基础,也为P2X4受体机制的研究提供了理论依据。本文对P2X4受体的结构进行综述,希望能够为新药的设计与发现提供理论依据。

摘要：目的构建靶向ErbB4的miRNA慢病毒载体,包装产生高滴度慢病毒并观察其感染小鼠海马齿状回基因的表达。方法将靶向ErbB4基因的miRNA干扰质粒利用Gateway重组技术构建慢病毒表达质粒,并与慢病毒包装系统共转染HEK293T包装细胞,收获上清并浓缩得到慢病毒浓缩液,通过测定绿色荧光蛋白(GFP)表达水平测定其滴度。所得慢病毒浓缩液经立体定位微量注射感染小鼠海马齿状回。观察鼠脑冰冻切片基因表达情况,并用神经元标志物神经元核抗原(NeuN)和星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)特异性抗体行免疫染色分析转导的细胞类型。结果阳性克隆测序结果与设计序列一致,说明靶向ErbB4基因的miRNA慢病毒干扰载体构建成功。包装收获慢病毒。浓缩的慢病毒包装上清感染HEK293T细胞后,流式细胞术检测GFP阳性率,计算得慢病毒活性滴度为1.0×1012转导单位(TU).L-1。小鼠海马齿状回立体定位微量注射1.0×1012TU.L-1慢病毒6个月后,观察到注射部位外源基因的显著表达。免疫荧光染色显示,慢病毒转导的细胞多呈NeuN标记阳性,并与GFAP的表达不重叠。结论靶向ErbB4的miRNA慢病毒载体构建成功,获得了靶向ErbB4基因的高滴度miRNA慢病毒颗粒,并实现了脑实质的局部长期稳定转导,慢病毒转导的主要细胞类型为神经元。

摘要：目的：研究胍丁胺单独给药及联合α2-肾上腺素受体特异性拮抗剂育亨宾用药对吗啡致小鼠行为敏化的影响。方法1.观察药物处理对小鼠基础活动性的影响。将雄性C57BL/6J小鼠分为盐水对照组、胍丁胺（1、10、20、40和80 mg/kg）组、育亨宾（0.3、1、2和8 mg/kg）组和育亨宾（2 mg/kg）＋胍丁胺（80 mg/kg）组，给予胍丁胺（sc）或育亨宾（ip）后测试小鼠60 min的水平移动距离；2.观察药物处理对吗啡诱发小鼠高活动性的影响。小鼠分为盐水对照组、吗啡（10 mg/kg）组、胍丁胺（1、20和80 mg/kg）＋吗啡（10 mg/kg）组、育亨宾（2 mg/kg）＋吗啡（10 mg/kg）组和育亨宾（2 mg/kg）＋胍丁胺（80 mg/kg）＋吗啡（10 mg/kg）组，单独给予胍丁胺（sc）或育亨宾（ip）以及两药联合使用后给予吗啡（sc），测试药物处理后小鼠60 min的移动距离；3.观察药物处理对吗啡诱发小鼠行为敏化精神依赖行为的影响。采用连续间断给药方式建立敏化模型，在预适应分组后分别在第1天、第4天和第7天给予吗啡（10 mg/kg），同时检测小鼠60 min的移动距离。实验设计中分为盐水对照组、吗啡（10 mg/kg）组、胍丁胺（1、20和80 mg/kg）＋吗啡（10 mg/kg）组和育亨宾（2 mg/kg）＋胍丁胺（80 mg/kg）＋吗啡（10 mg/kg）组，单独给予胍丁胺（sc）或联合育亨宾（ip）用药后给予吗啡（sc），并在给药当天测试小鼠60 min的移动距离，比较给药组与吗啡模型组的差异。结果1.单独给予胍丁胺（1~80 mg/kg）或育亨宾（0.3~2 mg/kg）的系列剂量后，与盐水对照组比较，小鼠的移动距离无明显差异；2.急性吗啡诱发高活性实验中，伴随给予胍丁胺（1~80 mg/kg）或育亨宾（2 mg/kg）后，与吗啡组比较，小鼠的移动距离均无明显差异，而胍丁胺（80 mg/kg）与育亨宾（2 mg/kg）联合用药后小鼠的移动距离为（22581.6±11694.0）cm，显著低于吗啡组（37577.9±9657.4）cm （P＜0.05）；3.在吗啡诱导小鼠行为敏化模型中，伴随给予胍丁胺（1~80 mg/kg），其测试当天的移动距离与吗啡模型组比较均无明显差异；当胍丁胺（80 mg/kg）与育亨宾（2 mg/kg）联合用药后小鼠在敏化实验第1天、第4天和第7天的移动距离分别为（21112.7±5586.7）cm、（37672.7±10518.8）cm和（47681.0±15845.3）cm，均显著低于吗啡组（31156.4±8010.5）cm（P＜0.01）、（51724.9±11364.51）cm（P＜0.05）和（63572.2±12151.2）cm（P＜0.05），提示胍丁胺和育亨宾联合用药显著抑制吗啡诱导小鼠行为敏化的形成。结论在C57BL/6J小鼠中，胍丁胺与α2-肾上腺素受体拮抗剂育亨宾联合应用具有抗吗啡行为敏化的作用，为吗啡精神依赖的治疗提供可能的新策略。