摘要：根据碱基互补原理 ,反义寡核苷酸可与特定病毒基因结合从而选择性地抑制该病毒的复制 ,这是病毒性疾病治疗的新途径 .基于上述原理设计并合成了D2 0 4RNA特异的 6个 5′末端脂肪链修饰的硫代反义寡核苷酸 .体外抗病毒活性评价显示互补于 5′端起始密码、 3′端重复序列和末端序列的

摘要：目的　对我国登革 2型病毒 0 4株 (D2 0 4)基因组进行全序测定及分析 ,为了解其基因组结构与生物功能的关系及研究开发登革病毒新型疫苗奠定基础。方法　根据登革 2型国际标准株NGC的序列 ,设计 13对重叠引物 ,通过RT PCR扩增出D2 0 4株不同的cDNA片段 ,分别克隆到pGEM T载体 ,转化受体菌DH5α ,挑取阳性克隆进行PCR、酶切鉴定及序列测定。结果　D2 0 4株的基因组全长 10 72 3个碱基 ,从 97到 10 2 6 9位为一个长的开放读码框 ,编码 3391个氨基酸。将它与其它登革 2型病毒株NGC、JAM、PR15 9(S1)、16 6 81及它的候选疫苗株PDK 5 3进行比较 ,其核酸序列同源性分别为 95 .0 %、97.6 %、89.8%、93.8%和 93.7% ,氨基酸序列的类似性分别为 97.8%、98.6 %、96 .7%、97.6 %和 97.5 %。结论　我国D2 0 4株的基因组全序列基本类似于已发表的其它登革 2型病毒株。在比较的 5株登革 2型病毒株中 ,D2 0 4株更类似于JAM株 ,其次是NGC株 ,与S1株的类似性略低。比较的结果表明 ,D2 0 4株与JAM株紧密相关 ,它们可能属于同一拓扑型。D2 0 4株全序的测定 ,对分析我国毒株来源及研制适于我国人群的登革疫苗具有一定意义。

摘要：二硫键抗体（ｄｓＦｖ）的概念最早出现于１９９０年，它是将抗体重链可变区（ＶＨ）和轻链可变区（ＶＬ）的各一个氨基酸残基突变为半胱氨酸，通过链间二硫键连接抗体可变区（Ｆｖ）的片段抗体．通用的突变位点是重链的４４位和轻链的１００位或重链的１０５位和轻链的４３位．ｄｓＦｖ最显著的优点是生化性质稳定，能够耐受环境条件的剧烈作用，在血液中的半衰期长达１４ｄ以上，符合临床给药要求．动物实验显示，ｄｓＦｖ毒素在不对动物造成毒副作用的情况下，可完全抑制肿瘤生长．

摘要：设计了一种新的病原体蛋白质B细胞抗原表位的筛选和重组表达方法。不须使用抗原 ,而通过交替用病人血清IgG抗体“淘洗”(biopanning)随机肽库和用正常人血清IgG反向吸附 ,来获得特异抗原表位资料。用HIV病人血清的IgG抗体淘洗噬菌体递呈随机十二肽库 ,再以正常人IgG抗体吸附 ,筛选到了能和HIV病人血清发生特异反应的噬菌体克隆 ,经ELISA、DNA测序等 ,成功地筛选出了位于HIVgp41外膜蛋白、高亲和力、构型特异的优势B细胞抗原表位 ( 60 2 GCSGKLICTTNV61 3)。用大肠杆菌硫氧还蛋白作为骨架 ,在其活性部位以“内融合”形式重组表达了该抗原表位 ,纯化的重组蛋白具有良好的抗原性 ,能与HIV( + )IgG抗体及艾滋病人血清呈特异反应 ,表明本技术路线可以有效地进行HIV蛋白质的B细胞抗原表位筛选和重组表达。此方法也可移植于其它病原微生物抗原或自身抗原的表位研究 ,继而为基于抗原表位水平的特异诊断试剂的研制、疫苗的设计提供依据。

摘要：肉毒神经毒素分为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ和Ｇ七个血清型，其中Ａ、Ｂ、Ｅ和Ｆ型引起人类肉毒中毒。为此，选取肉毒神经毒素的保守序列设计了一对简并引物，对１８株肉毒梭菌和８株相关梭菌进行了检测，表明该引物可特异扩增Ａ、Ｂ、Ｅ、Ｆ和Ｇ型肉毒梭菌及产Ｅ型肉毒神经毒素的丁酸梭菌，产物为２６４ｂｐ，敏感性达１０ｐｇ细菌ＤＮＡ。采有酚－氯仿抽提法、固相载体捕获法和热裂解法处理产毒菌株，结果表明热裂解法安全、简便、快速，所制模板扩增效果明显。因此，此ＰＣＲ方法可用于快速敏感地检测引起人类肉毒中毒的梭菌。

摘要：目的：拟在大肠杆菌中高效表达纯化乙型脑炎病毒EDⅢ蛋白，希望能为乙型脑炎（乙脑）病毒（ JEV）感染血清的诊断试剂盒提供候选抗原。方法针对乙脑病毒的EDⅢ蛋白设计特异的PCR扩增引物，对提取的乙脑病毒RNA进行RT-PCR扩增，获取目的基因并构建重组质粒，将重组质粒转入*** BL21中并在IPTG作用下表达目的蛋白。将表达的乙型脑炎病毒EDⅢ抗原系列稀释后与对照抗原同时点制在ELISA微孔板中，采用Array-ELISA技术同时检测临床JEV感染患者及正常人血清，并与间接免疫荧光方法的检测结果进行比较。结果成功克隆了JEV EDⅢ蛋白基因段，并在*** BL21中表达，成功获得EDⅢ蛋白。该重组蛋白可用于Array-ELISA方法，进行JEV感染血清的检测，并且与传统免疫学检测方法---间接免疫荧光法结果一致。结论该重组抗原可作为JEV感染血清检测的候选抗原。

摘要：以获得的抗A型肉毒毒素人源单链抗体ScFvB17为模板 ,PCR扩增抗体ScFv基因的重链可变区 (VH)和轻链可变区 (Vκ) ,以重链恒定区 1(CH1) 5′端 12个氨基酸的序列作为连接肽 ,构建成三结构域抗体分子 :VH_连接肽_Vκ(VH Vκ)。重组VH Vκ抗体分子在大肠杆菌中得到高效表达 ,其表达量占菌体总蛋白质的 34%以上。表达的蛋白质在菌内形成包含体 ,采用镍柱金属鏊合层析法对该包含体进行纯化 ,得到了纯度高达 95 %的VH Vκ。ELISA等实验结果显示 ,重组设计并制备的三结构域抗体蛋白VH Vκ不但可以特异识别毒素抗原 ,具有与原母本单链抗体ScFv相同的抗原特异性 ,而且具有了更高的相对亲和力和稳定性。

摘要：目的：设计了抗疟药本芴醇（Ｉ）的５ 步合成新路线。方法：该合成路线是以工业芴（ＩＩ） 为原料，经氯化制得２，７二氯芴（ＩＩＩ），ＩＩＩ经氯乙酰化得到２，７二氯４氯乙酰芴（ＩＶ），ＩＶ 再经环氧化反应，依次与二正丁胺和对氯苯甲醛缩合制得Ｉ。结果：本文用化学方法及光谱分析证明，ＩＩＩ进行酰化反应时，乙酰基和氯乙酰基主要进入芴环的４位，从而确立了本路线的可信性。结论：用新路线合成的Ｉ与老路线合成的本芴醇相比，二者的理化性质完全一致，生物效价也一致。

摘要：在A型肉毒毒素保护性抗原基因初步表达的基础上 ,为提高表达水平 ,依据EMBL的DNA数据库中A型肉毒毒素基因全序列 ,重新设计上游引物 ,通过修饰基因片段N端 ,保持氨基酸序列不变 ,从已获得的A型肉毒毒素与靶细胞起结合作用的重链C端基因中 ,扩增小的突变基因 ,克隆入pGEM T载体进行测序 ,并以pBV2 2 0为表达载体构建重组表达质粒 ,在大肠杆菌中实现高效表达。结果表明 ,重组表达产物占全菌蛋白的 4 0 % ,酶联检测重组表达产物具有特异结合活性。A型肉毒毒素保护性抗原基因的高效表达 。

摘要：目的 了解医院医务人员感染严重急性呼吸综合征(SARS)的相关危险因素。方法 应用病例对照研究设计,采用统一的调查表,调查接触和诊治SARS患者的医务人员造成感染SARS的可疑危险因素,以SARS患者为病例.未被感染者为对照,用SPSS 10.0软件进行单因素分析,SAS6.12进行多因素非条件logistic回归分析。结果 在所调查的49种因素中,27种与SARS感染显著关联,其中22种因素为保护性因素,5种为危险性因素。多因素非条件logistic回归分析结果显示:戴眼镜、受分泌物喷溅污染、穿防护服、从事现职时间、与患者接触方式和口罩类型等6种因素在SARS院内感染中起到重要作用。结论 医务人员在诊治SARS患者中,其医疗活动所涉及诸多因素与促使或造成感染有关,建议医务人员在临床诊治SARS患者时,防护重点应放在口罩、眼罩和防护服的穿戴上。