摘要：以胰岛素样生长因子受体 - 1基因为靶筛选抗肿瘤药物 .根据IGF1RmRNA的二级结构设计了 9条反义寡核苷酸药物 ,以脂质体介导进行转染 ,MTT染色计算细胞生长抑制率 ,从中筛选出一条序列并对之进行优化 ,最后以最佳序列进行体外作用持续时间及体内细胞生长抑制率分析 .结果表明该序列在体内外具有良好的抗肿瘤活性 ,具有剂量依赖性关系 ,且对荷瘤裸鼠无明显的毒性 .

摘要：人类ＨＬＡ抗原分型在人类学、法医学、疾病易感性及器官组织移植等研究中有重要的意义。在骨髓移植中，进行供者、受者ＨＬＡ配型，选择相合的供体，减少ＧＶＨＤ发生，是移植成功的关键。目前国内主要采用血清学方法进行ＨＬＡ配型。由于方法上的缺点，常有约２０％左右的误差率，因此，基因分型技术的研究与应用势在必行。该研究通过设计合成ＨＬＡ基因序列特异性引物，建立了ＨＬＡ－ＤＲ基因分型的套式扩增和直接扩增ＰＣＲ－ＳＳＰ技术，并在骨髓移植配型中进行了应用。对两种分型技术进行了对比，两种方法各有特点，套式扩增在高度同源的ＤＮＡ序列扩增中有高度的特异性，并具有高度的灵敏性，很少量的ＤＮＡ即可满足ＰＣＲ扩增，但需两次扩增，非同源因素影响增大；直接扩增操作简便，一次扩增完成分型，但结构同源因素对特异性影响大。两种方法经周密设计均有高度的准确性。

摘要：以患者为中心的个体化制剂主要是要考虑患者本身的生理情况及病情,选择适合患者的药物剂型、用量及给药方式。老年及儿童是区别于普通成年人的特殊人群,在药物剂型、剂量、给药方式设计时要考虑其服药及生理情况的特殊性,进行个体化给药。口腔崩解片、复方制剂和多微粒系统等药物新剂型比较适合于老年及儿童用药。肺部给药、鼻腔给药、经皮给药等非肠道给药方式能一定程度上弥补老年及儿童普通口服给药的局限。以3D打印为代表的个体化制剂新技术将是未来发展的研究方向。

摘要：目的:制备盐酸氮斯汀鼻喷雾剂,并进行稳定性考察。方法:以含量为指标,采用正交设计筛选处方;考察3批样品的稳定性。结果:制备的3批样品在市售包装条件下经加速、室温留样试验考察,质量稳定。结论:优化了盐酸氮斯汀鼻喷雾剂的最佳处方,该处方设计合理。

摘要：目的通过比较研究上海天汇化学制药有限公司研制的注射用紫杉醇脂质体和市售紫杉醇注射液的单次静脉滴注人体药动学特征,了解注射用紫杉醇脂质体在人体内的吸收、分布、消除规律,为临床合理用药提供理论依据。方法采用单周期设计与双周期自身交叉设计相结合的单剂量给药方式,分别静脉滴注175 mg.m-2注射用紫杉醇脂质体或市售紫杉醇注射液,采集受试者血样,采用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定其血药浓度。结果患者单次静脉滴注175 mg.m-2剂量注射用紫杉醇脂质体和市售紫杉醇注射液后,平均ρm ax分别为(883.11±353.69)和(6 250.00±1 635.12)μg.L-1,tm ax分别为(1.94±1.01)和(3.00±0)h,t1/2分别为(5.00±1.87)和(3.37±0.61)h,AUC0t-n分别为(2 828.40±1 113.36)和(17 304.28±5 064.30)μg.h.L-1,AUC0-∞分别为(3 077.96±1 195.39)和(17 400.43±5 053.15)μg.h.L-1。4例完成注射用紫杉醇脂质体与市售紫杉醇注射液双周期自身交叉药代试验患者的平均药动学参数如下,mρax分别为(767.75±182.94)和(6 805.00±881.38)μg.L-1,tm ax分别为(2.50±1.0)和(3.00±0)h,t1/2分别为(5.16±2.42)和(3.30±0.88)h,AUC0-tn分别为(2 675.39±385.24)和(18 036.51±5 239.99)μg.h.L-1,AUC0-∞分别为(2 913.80±238.66)和(18 186.84±5187.37)μg.h.L-1。结论在给予相同剂量下,注射用紫杉醇脂质体ρm ax和AUC0t-n明显低于市售紫杉醇注射液,t1/2高于紫杉醇注射液。对比于市售紫杉醇注射液,注射用紫杉醇脂质体具有明显缓释效果。

摘要：目的 :建立一种快速鉴定临床常见真菌菌种的方法。方法 :选取真菌核糖体RNA的ITS区为靶基因 ,设计通用引物和种特异性探针 ,将 3个属的 6种临床常见真菌 (白色念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、新型隐球菌、烟曲霉和黄曲霉 )的种特异性探针加尾后固定于硝酸纤维素膜上 ;用标记生物素的真菌通用引物扩增 11种医学真菌DNA ,产物与固定在膜上的探针杂交。结果 :通用引物可以扩增所试 11种医学重要真菌的DNA ,扩增片段长度约为 5 6 0bp。 6种真菌扩增产物只与其对应的探针杂交。结论 :此方法快速、简便、特异 ,适合常规实验室开展。

摘要：目的　了解SEN病毒D亚型中国株的流行病学特点及其进化地位。方法　分析已知的基因序列设计引物 ,建立半套式PCR检测方法 ,对 5 8份献血者血清样本和 2 5份non A～E肝炎患者血清样本进行了SENV D亚型的检测 ,并对部分阳性血清的PCR产物进行克隆测序。结果　无偿献血者中SENV D亚型感染率为 4 5 % ,在non A～E肝炎患者中SENV D亚型感染率为 4 8% ,两者间差异无显著性 ;但在无偿献血者中SENV D亚型的阳性检出率大大高于国外报道。测序结果经BLASTP软件在GenBank中检索表明 ,各测序株均与已知的SENV D株序列有很高的同源性 ,并在此基础上用MegAlign软件进行进化树分析。结论　建立的半套式PCR检测方法适用于SEN病毒D亚型检测 ;SENV D亚型中国株之间以及与已发表的国外SENV D株序列之间有变异。与无偿献血者相比 ,non A～E肝炎患者血清SENV D株无进化上的显著倾向性。在测序的部分ORF1序列中存在一个核苷酸高变区。

摘要：目的:考察尼麦角林分散片与尼麦角林片剂的生物等效性。方法:采用双周期自身随机交叉试验设计。24名健康男性志愿者单剂量口服试验制剂或参比制剂,血浆样品采用高效液相色谱-串联质谱测定(HPLC-MS-MS),以内标法计算血药浓度。结果:受试制剂及参比制剂尼麦角林实测平均血药峰浓度Cmax分别为(16.31±13.16),(16.78±14.36)g·L-1;实测平均达峰时间Tmax分别为(0.60±0.21),(0.91±1.12)h;受试制剂及参比制剂t1/2(ke)分别为(4.89±3.67),(4.46±1.88)h;AUC0～tn平均值分别为(68.60±66.25),(63.84±59.71)μg·L-1.h;AUC0～∞平均值分别为(71.08±67.66),(66.25±61.90)μg·L-1·h;试验制剂尼麦角林分散片的相对生物利用度F0～tn,F0～∞分别为(110.05±27.57)%,(111.53±29.84)%。结论:试验制剂和参比制剂具有生物等效性。

摘要：目的:以硫氧还蛋白(Trx)为骨架,pB ridge为载体,构建可诱导表达的酵母构象型随机10肽库。方法:利用PCR扩增出trx基因,向trx的突环区引入AscⅠ酶切位点,构建pB ridge-mTrx重组载体。采用(NNK)10的编码方式设计并合成两条寡核苷酸链,经退火、延伸,AscⅠ,RsrⅡ双酶切后,克隆至pB ridge-mTrx载体,电转化***10B感受态细胞。对所构建多肽文库的库容和随机性进行了鉴定,并利用W estern印迹对文库的可诱导性进行分析。结果:获得库容量为8.7×108的随机肽库。随机挑选20个克隆进行测序,4个核苷酸的出现频率与理论值接近。在M et缺陷培养基中,随机肽库可被诱导表达。结论:成功构建可诱导表达的随机肽库,为进一步筛选特异性多肽奠定了基础。

摘要：本研究旨在构建并制备人硫氧还蛋白(hTRX)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因腺病毒载体Ad-hTRX-EGFP,感染HEK293细胞,为基因治疗提供实验基础。设计含有NotⅠ和EcoRⅤ酶切位点的引物,PCR扩增hTRX,将扩增产物连接到带有EGFP标记的pDC316-mCMV穿梭质粒上,构建重组穿梭质粒pDC316-hTRX-EGFP,利用Lipofectamine2000脂质体的方法将AdMax腺病毒包装系统的骨架质粒pBHG lox_E1,3Cre和穿梭质粒pDC316-hTRX-EGFP共转染入HEK293细胞,进行同源重组,得到腺病毒重组质粒pAd-hTRX-EGFP,并在其中包装扩增病毒,用氯化铯高速梯度离心、纯化病毒,测定病毒颗粒数及滴度。采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,用流式细胞仪测定感染HEK293细胞的效率,Western blot方法验证细胞表达hTRX蛋白。结果显示,重组腺病毒质粒经PCR和NotⅠ、EcoRⅤ酶切鉴定,证实含有hTRX基因,测序结果和设计片段的序列一致。重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度达5.558×1010pfu/ml。病毒成功感染HEK293细胞,MOI=100时,感染效率达92.25%。经Western blot方法验证表明,感染后的HEK293细胞高表达hTRX蛋白。结论:应用细胞内同源重组方法成功构建了含hTRX基因的重组腺病毒载体,制备获得高滴度的病毒,能高效感染HEK293细胞并表达目的蛋白,为后续研究奠定了基础。