摘要：目的评价2种格列吡嗪片的生物等效性。方法用双周期、自身交叉试验设计,24名健康男性受试者分别单次口服受试药物和参比药物格列吡嗪片5mg,于给药前及给药后不同时间点采集静脉血。血样经预处理后用高效液相色谱-质谱(HPLC-MS/MS)法测定血浆中格列吡嗪的浓度,用WinNonlin 6.1计算主要药代动力学参数及相对生物利用度。结果受试药物与参比药物格列吡嗪的tmax分别为(3.40±1.54),(3.71±1.30)h,Cmax分别为(471.88±108.10),(480.58±132.63)μg·L-1,t1/2分别为(5.15±1.31),(5.32±1.27)h;AUC0-t分别为(2805.71±592.61),(2873.40±697.57)μg·L-1·h,受试药物的相对生物利用度F0-t、F0-∞分别为(105.77±27.84)%和(105.28±27.63)%。结论受试药物和参比药物格列吡嗪具有生物等效性。

摘要：目的建立快速检测L2型头孢菌素β内酰胺酶的方法。方法利用DNA环介导恒温核酸扩增法(loopmediated isothermal amplification of DNA,LAMP)针对L2型头孢菌素β内酰胺酶基因设计的5条特异性引物,通过引物特异性识别特定Bla L2基因上的7个独立区域实现耐碳青霉烯类嗜麦芽寡养单胞菌的检测。实时浊度仪监测反应结果表明,LAMP反应在65℃恒温条件下50 min内完成;钙黄绿素可视化检测表明阳性结果呈绿色,与阴性结果差异显著。结果 LAMP法最低检出基因的浓度为2.58 pg/μl,其灵敏度为PCR法的100倍,且具有良好的特异性。结论 LAMP法具有过程简单、实验装置简便、结果肉眼可辨别、灵敏度高、特异性强等特点,对非L2型头孢菌素β内酰胺酶基因的结果呈阴性,适用于临床L2型头孢菌素β内酰胺酶基因的快速检测。

摘要：背景：肺脏含有多种内源性干细胞，分别为来源于内胚层或中胚层的前体细胞，阐明肺组织间充质干细胞的特性有助于了解其在肺损伤中的生物学作用。目的：观察体外分离培养的小鼠肺组织间充质干细胞生长状态、表面标志、分化功能等生物学特性，探讨其对肺损伤鼠的干预效果。设计、时间及地点：细胞学体外观察与随机对照动物体内实验，于2005-10／2007-08在解放军军事医学科学院基础医学研究所细胞生物学实验室完成。材料：清洁级三四周龄C57BL/6雄鼠，用于分离培养肺组织间充质干细胞：清洁级6-8周龄C57BL/6雌鼠20只，分为细胞移植组、模型对照组，10只／组。方法：分离雄鼠肺组织，II型胶原酶消化后，Ficoll法离心，收集界面层细胞，贴壁法分离培养肺组织间充质干细胞，当细胞接近70％～80％汇合时消化传代。细胞移植组、模型对照组小鼠按20mg／kg腔注射马利兰抑制骨髓干细胞的迁移后，均建立博莱霉素诱导的肺纤维化模型，造模后细胞移植组尾静脉注入5×10^5个肺间充质干细胞，模型对照组气管内注射100μL PBS。14d后取材，制备肺组织石蜡切片。主要观察指标：体外培养的肺组织间充质干细胞的生长状态、免疫表型、基因表达、分化潜能、集落形成能力以及静脉移植减轻肺损伤效果。结果：小鼠肺组织来源的间充质干细胞为成纤维样细胞，在体外能够长期培养和快速扩增：其细胞免疫表型为Sca-1^＋，CD44^＋，CD29^＋，CD105^＋，CD54^＋，CD34^-，CD45^-，CD11b^-，c-kit^-，CD31^-；不表达肺泡上皮细胞标志表面活性蛋白C、水通道蛋白5、clara细胞分泌蛋白，胚胎干细胞标志Oct-4和Nanog基因在培养扩增的细胞中持续表达；能够破诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞和表达表面活性蛋白C的肺泡2型上皮样细胞：集落形成率约3％；经静脉输注后，细胞移植组肺损伤和纤维化程度较模型对照组减轻，Masson染色显示只有少量血管周围呈阳性，且经骨髓抑制处理后已接近正常肺组织。结论：体外培养的小鼠肺间充质干细胞能够快速扩增，可向脂肪细胞、成骨细胞和肺泡上皮细胞方向分化：静脉移植后有助于肺组织修复、减轻肺损伤和纤维化程度，且骨髓抑制不影响肺间充质干细胞的保护作用。

摘要：为了探讨在人永生化支气管上皮细胞BEP2D细胞中,Smad4分子对ERK/MAPK通路的作用,我们用RNA干扰的方法分别设计了两对Smad4-siRNA,并使BEP2D细胞中Smad4靶向沉默,用Western印迹分析了细胞内ERK激酶和MEK激酶磷酸化水平的变化.结果发现,当Smad4表达沉默后,ERK激酶磷酸化水平未变,MEK激酶磷酸化水平有所降低;再加TGF-β1诱导后ERK激酶和MEK激酶磷酸化水平均显著降低至基础水平以下.结果表明在BEP2D细胞中,Smad4的缺失抑制TGF-β1对ERK/MAPK通路的活化,故提出TGF-β活化ERK/MAPK通路需要Smad4存在的假设.

摘要：恶性肿瘤已经成为威胁人类健康第1位的死亡原因，目前全球每年约有1200万人被确诊为恶性肿瘤，760万人死于恶性肿瘤。因此，抗肿瘤药物早已成为各大制药企业研究与开发的重点。据美国药品研究和生产商协会（ the pharmaceutical research and manufacturers of America，PhRMA）2011年的报告，目前，世界生物制药企业正在开发的治疗恶性肿瘤的药物或疫苗接近900个。近期检索美国临床试验网上登记的约15万项临床试验中，约4万项临床试验与肿瘤有关（约占26％）。以世界前两大制药巨头辉瑞公司和葛兰素史克公司为例，与肿瘤有关的临床试验占其总临床试验的17％左右。不仅有关抗肿瘤药物的临床试验增多，而且其试验规模也越来越大。如对现有药物治疗效果较好的乳腺癌，新药要在现有的对照药物临床研究中得出差异有统计学意义，试验招募受试者人数从原来的600～1000例，增加至3000乃至近万例［1］。随着生命科学技术的发展，大量不同于传统细胞毒药物的靶向药物、免疫治疗制剂和基因治疗制剂等新型药物有待在临床进行科学和客观的评价。为节约资源，降低成本，并尽早客观评价新药的效果和安全性，国内、外各制药企业和监管部门都在抗肿瘤药物临床研究（尤其是在早期阶段的临床研究）的设计与路径方面进行了不少创新性的探索。

摘要：目的:进一步证实人格拉利素(hGlyrichin)抗菌肽的抗菌功能。方法:根据人格拉利素的氨基酸序列,设计并合成了19个氨基酸长度的多肽(pCM-19),采用试管法和菌落生成法分析该肽对靶细菌生长的影响。结果与结论:pCM-19溶液与不同靶细菌共孵育后,明显抑制了细菌的生长,对实验室常用的BL-21工程菌和多种致病菌(包括杆菌、球菌)的生长都有抑制作用。更为有趣的是对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的生长有明显抑制作用,显示了其在抗耐药菌感染中的良好前景。

摘要：目的：设计制备非洛地平．美托洛尔复方经皮给药系统，评价其对自发性高血压大鼠的降压作用。方法：50只3月龄自发性高血压大鼠随机分为5组进行长期给药治疗试验：空白贴剂对照组、非洛地平（FEL）-美托洛尔（MET）口服混悬液组（FEL1mg·kg^-1，MET10mg·kg^-1，qd）及FEL-MET透皮贴剂低、中、高剂量组[剂量分别为：FEL1mg·kg^-1，MET10mg·kg^-1；FEL3mg·kg^-1，MET30mg·kg^-1；FEL9mg·kg^-1，MET90mg·kg^-1，每隔2d给药1次]，共持续44d。另设同月龄正常血压Wistar大鼠为正常对照组。以无创性尾套法测定给药后大鼠血压和心率，评价经皮给药系统的降压作用。结果：FEL—MET透皮贴剂降压作用起效快、持续时间长，无耐药趋势，强度具有剂量依赖性。FEL—MET透皮贴剂低、中、高剂量分别使收缩压下降27．3～39．2mmHg（14．78％～21．22％），34．2～49．7mmHg（18．59％～27．01％）和50．8～68．6mmHg（27．34％～36．92％）；使舒张压下降19．8～32．6mmHg（12．90％～21．24％），22．7～34．9mmHg（15．30％～23．52％）和33．7～52．8mmHg（22．74％～35．63％）；降压效果显著优于FEL和MET长期口服联用（P〈0．05）。结论：FEL-MET经皮给药系统降压效果确切，作用平稳，持效时间长，使用方便，安全性高，适于高血压的长期药物治疗。

摘要：目的:使用新型DOTA类螯合剂p-SCN-BZ-DOTA对进口人鼠嵌合型抗CD20单抗美罗华进行90Y标记,确定最佳标记条件。方法:采用先螯合抗体再标记核素的方法制备放免复合物,在固定抗体、螯合剂、核素用量及缓冲液的前提下,采用正交设计考察标记反应中的3个关键因素pH值、温度、标记时间对其比活度的影响,确定最佳标记条件。结果:不同标记条件下,放免复合物的比活度波动在0.122~0.327 mCi/mg之间,统计分析后发现,最佳标记条件为:pH值7.5,4℃反应2 h。结论:使用新型螯合剂p-SCN-BZ-DOTA可成功制备90Y-抗CD20单抗放射免疫药物,其放化纯度可满足临床研究使用。

摘要：目的:获得重组人干细胞因子／血小板生成素(SCF-TPO)融合蛋白的高表达,预测该全新型融合蛋 白的蛋白质结构。方法:设计引物,利用RT-PCR从胎肝细胞中扩增SCF和TPO氨基端功能区片段,采用基因融合 新策略将其融合成SCF-TPO融合基因,构建pET32a／SCF-TPO融合基因重组表达载体,在*** BL21(DE3)plysS 中获得正确高表达,采用生物信息学方法对融合蛋白的结构特征进行模拟分析。结果:首次成功构建了pEF32a／SCF -TPO原核表达载体,并获得了融合蛋白的高表达,表达量高达40％,主要以包涵体形式表达。蛋白结构预测结果 显示,融合蛋白的等电点、抗原性及亲水性无显著改变,接头序列具有高柔性。融合蛋白除一级结构有4个氨基酸发 生改变外,原来的α螺旋和β片层无改变。结论:获得了SCF-TPO融合蛋白的高表达,结构预测融合蛋白的设计符 合要求。为进一步研究SCF-TPO融合蛋白的生物学特性奠定了基础。

摘要：目的 探讨靶向反义硫代寡脱氧核苷酸（asODN）在乙型肝炎（HBV）病毒转基因小鼠体内抗病毒疗效。方法 设计合成针对HBV pre-C/C基因的反义硫代寡脱氧核苷酸:5＇-CATGCCCCAAAGCCAC-3＇,并以半乳糖-多聚赖氨酸（Gal15-PLL）作肝靶向载体。将12只血清HBsAg,HBV DNA阳性的转基因小鼠等分为 Gal15-PLL—asODN治疗组及生理盐水对照组。靶向反义硫代寡脱氧核苷酸以每天每克体重15μg剂量,尾静脉注射给药,共12d;对照组用同样体积生理盐水同样方法给药。结果 注射Gal15-PLL-asODN 6d后,血清HBsAg已有下降（P<0.05）;12d时显著下降（P<0.01）,且血清HBV　DNA转阴率为66.7％（4/6）,肝组织免疫组织化学HBsAg、HBcAg阳性肝细胞数较对照组明显下降（P<0.05）;而生理盐水对照组无明显变化。结论 靶向反义硫代寡脱氧核苷酸在转基因小鼠体内能抑制HBV复制与抗原表达。