摘要：为了获得富硒黑木耳菌丝体硒多糖的最佳制备工艺并进一步评估抗氧化作用,本研究以黑木耳菌种九丰、黑丰和西藏6号作为原料,采用耐硒及梯度硒浓度富硒筛选、单因素试验、响应面试验设计分析及抗氧化测定的方法对富硒黑木耳筛选、硒多糖的提取优化和抗氧化活性进行研究。结果表明,3个黑木耳菌种中,九丰耐硒能力最强;富硒发酵实验中,黑木耳菌丝体发酵总硒含量在硒浓度为60μg/mL时最大;富硒黑木耳菌丝体硒多糖提取的最佳条件为:超声时间25.4 min,水浴时间56 min,料液比1:49(质量体积比),此条件下硒多糖提取率为(17.49±0.10)%。富硒黑木耳菌丝多糖对DPPH、羟基自由基具有一定的清除能力,并在总还原力试验中表现出较强的还原能力。本试验筛选出最优菌株及最佳富硒发酵硒浓度后,运用响应面的方法对富硒黑木耳菌丝体硒多糖提取条件进行优化,系统地测定出最佳提取条件。研究结果为黑木耳菌株富硒培养及黑木耳硒多糖高效提取及其功能挖掘提供了系统科学的理论依据。

摘要：本研究旨在探究敲除阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)代谢通路上乙醇脱氢酶基因对乙偶姻代谢合成的影响,进一步提高乙偶姻产量。实验基于*** SDM中的乙醇脱氢酶adh基因序列设计特异性引物,并构建adh基因自杀质粒pKR6K-∆adh。利用热激法将自杀质粒转入***∆budCldh,成功得到多基因缺失菌株***∆budC-ldh-adh,并进行发酵性能测试。研究结果显示,与出发菌株相比,新构建的重组菌株在敲除了负责乙醇合成的关键酶乙醇脱氢酶adh基因后,其乙偶姻的生产强度提高了20.6%,产量提高了22.6%,同时乙醇产量提高了92.8%。此外,由于通过基因改造阻断了多条分支代谢路径,流向丁二酸代谢路径的碳通量明显变多,丁二酸产量提高101.3%。本研究成果不仅为构建高效乙偶姻生产菌株提供了有价值的参考,也为乙偶姻的大规模工业生产奠定了基础。

摘要：为了准确测定黑木耳菌包中纤维素酶的酶活性,为黑木耳菌种活力检测、栽培生产提供科学的理论依据,运用3种不同的方法对菌料进行处理,并根据单因素试验,利用响应面Box-Behnken设计方法,以纤维素酶活性为测定指标,选择出黑木耳菌料的最佳处理方法及纤维素酶的最优浸提条件与测定条件。结果表明,将黑木耳菌料经过筛处理后培养3 d纤维素酶有最大的活性;响应面结果显示,黑木耳纤维素酶的最佳浸提条件为:浸提时间2.51 h、料液比1:15.64、浸提温度50.87℃,纤维素酶活性为12.7031 U/mL。纤维素酶的最佳测定条件为反应温度52.31℃,酶量0.92 mL,pH 4.98,纤维素酶活性为14.8565 U/mL。本实验通过对测定中损伤的菌丝进行再培养,使其恢复产酶活性后,运用响应面的方法对纤维素酶的提取条件及测定条件进行优化,系统地测定出黑木耳纤维素酶的最优活性检测条件,为黑木耳菌株的筛选和品种鉴定提供了准确、系统的理论依据。

摘要：聚酮类化合物(polyketides,PKs)是一类来源广泛、数目庞大的天然产物。聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)负责催化PKs的生物合成,是具有模块化结构的多功能复合酶,由一系列对称或非对称的二聚体模块组成。模块按照其功能的不同,可分为加载模块、延伸模块、卸载模块。各个模块中含有多个催化域,不同的催化域在聚酮链延伸过程中扮演着不同角色。模块以首尾相连的方式排列,通过非结构多肽接头或离散的对接结构域彼此连接,形成装配线来生产PKs。PKSs按照结构域和催化机制的不同,可以分为合成大环内酯类抗生素的I型PKSs(由迭代化PKSs和模块化PKSs组成)、合成芳香族聚酮类化合物的II型PKSs(也被叫做迭代类PKSs)和合成类黄酮化合物的III型PKSs。利用组合生物合成方法,如对不同聚酮物质或同一物质的不同结构域或模块进行交换,以及特异性地插入、替代、缺失关键基因,或者通过点突变等操作,可以形成重组PKSs,进而改变聚酮类化合物的结构。选择不同的起始和延伸单元,引入不同类型的PKSs后修饰酶以及对PKSs后修饰酶基因进行改造等方法,均可用于合成非天然PKs。本文概述了3大类型聚酮合酶的结构、催化机制和组合生物合成近期研究进展,为今后合理设计产量高、效价高、化学性质稳定的新型聚酮类化合物提供参考依据。

摘要：针对树干毕赤酵母xyl2基因设计相应引物。以p-AKRX为骨架载体,通过酶切连接的方式构建1个酿酒酵母工业菌株的表达载体p-AKRX2-2。将该表达载体线性转化酿酒酵母后,测定转化子SUN-Ⅰ木糖醇脱氢酶(XDH)及其表达情况。与原始菌株相比,重组酿酒酵母中的XDH活力是原始菌株的3.65倍。该重组质粒载体的构建可有效弥补酿酒酵母缺少代谢木糖关键基因的缺陷,为利用木糖高产乙醇酿酒酵母基因工程菌株的构建奠定基础。

摘要：以半知菌属疣孢漆斑菌Myrothecium verrucaria NF-08为供试菌,采用响应面方法优化菌株产漆酶条件,并以其漆酶粗酶进行3种结构类型6种染料的脱色试验,考察了粗酶浓度、温度和p H值对脱色率的影响.两水平析因设计、中心组合设计和验证试验结果表明:葡萄糖浓度为15.4 g·L^(-1)、蛋白胨浓度为43.3 g·L^(-1)和培养基初始p H值为6.68时,漆酶活性达到最大值(25.58±1.60)U·m L^(-1),是单因素试验(16.82 U·m L^(-1))的1.52倍,提高了52.1%.以上述发酵条件获得的*** NF-08漆酶粗酶对3种结构类型染料均有脱色效果,排序为偶氮类优于芳甲烷类优于蒽醌类.脱色率随粗酶浓度增大(2~8 U·m L^(-1))、反应温度升高(15~35℃)而上升,随p H值上升(4~10)而下降.粗酶浓度为5 U·m L^(-1),反应温度为25℃,p H值为4时,偶氮类染料铬黑T和芳甲烷类染料碱性品红即可几乎完全脱色,脱色率分别为99.2%和94.6%.

摘要：随着我国工农业经济不断发展,场地污染问题已成为人们关注的焦点,高效治理场地污染是改善生态环境的重中之重。针对近年来国内外在治理场地污染方面的相关文献进行了整理综述,总结了现有场地污染模拟和修复技术的优缺点和适用范围。结果表明:数值模型可以帮助更好地跟踪污染物迁移过程,从而制定相应的控制措施;修复技术可以为环境治理提供技术支撑,从而降低二次污染,提升修复效率。在此基础上,对场地污染的模拟和修复技术的应用进行了展望:在模拟技术方面,应该灵活运用软件,多种模型耦合模拟,针对不同区域的不同问题精准设计;在修复技术方面,应降低修复产生的次生污染,大力发展植物修复技术,寻找兼顾环保和效率的方法。

摘要：为了研究阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae,***)SDM的2,3-丁二醇脱氢酶(budC)基因对乙偶姻产生的影响,采用自杀质粒同源重组技术敲除该基因。根据*** SDM的budC基因序列设计引物,构建budC基因敲除质粒,然后将质粒转化进*** SDM中,根据表型筛选及PCR验证获得budC基因缺失菌株。进行发酵试验后,利用高效液相色谱检测乙偶姻产量。结果表明,目的基因budC敲除成功,与原始菌株相比,基因缺失菌株2,3-丁二醇的产量降低了76.34%,乙偶姻的产量提高了103.78%。budC基因的敲除阻断了乙偶姻进一步分解代谢产生2,3-丁二醇的途径,提高了乙偶姻的产量。该试验获得了***ΔbudC突变株,为利用微生物法工业化生产乙偶姻奠定了基础。

摘要：为提高发酵刺五加中异嗪皮啶的含量,采用单因素实验及响应面法对其发酵条件进行优化。采用单因素实验,分别测定发酵时间、初始pH、发酵温度、摇床转速、发酵菌株AJ14的菌悬液加入量及底物质量浓度对发酵刺五加中异嗪皮啶含量的影响,以获取单因素实验的最优值,然后采用响应面法中的Box-Behnken设计模块,分析初始pH、发酵温度、发酵菌株AJ14的菌悬液加入量3个自变量及其交互作用对异嗪皮啶得率的影响,确定最佳发酵工艺。结果表明,在初始pH 7.5、发酵温度27℃、发酵菌株AJ14菌悬液(1×10^(7) CFU/mL)加入量6 mL的条件下,异嗪皮啶含量为(0.6629±0.0007)mg/g,与预测值的相对误差较小。研究结果可为采用微生物发酵法高效生产异嗪皮啶奠定基础,也可为其他中药发酵工艺提供数据参考。

摘要：大豆是世界上最重要的油料作物,为研究生物炭与丛枝菌根真菌联合施用对大豆幼苗生长的影响,设计室内盆栽试验,种植大豆幼苗,试验设计接种或不接种根内根孢囊霉(Rhiaophagus intraradices,RI)并施加0%、2%、5%(w/w)的生物炭,共6个处理。结果表明,接种RI并施加生物炭,可显著提高大豆幼苗的菌根侵染率、株高、茎粗和生物量,并显著改善了大豆幼苗的光合气体交换活性和叶绿素荧光特性,促进了大豆幼苗的生长发育,其中以接种RI并施加2%生物炭组合处理促进效应最大,菌根侵染率最高达到76.67%,大豆幼苗的株高、茎粗和总生物量与CK相比分别提高了86.10%、35.69%和80.00%。联合施加RI与2%生物炭的大豆幼苗的光合气体交换参数及叶绿素荧光参数显著优于CK组(P<0.05),说明RI与2%生物炭联合施用能有效增强大豆幼苗的光合能力。因此,RI与2%生物炭配施具有更好的菌根效应,能有效促进大豆幼苗的生长,这对大豆幼苗的生长及可持续农业发展具有重要意义。