摘要：【目的】为延长大口黑鲈鱼的货架期,以期为大口黑鲈鱼的贮藏保鲜提供理论参考依据。【方法】选取乳酸链球菌素(Nisin,NI)、普鲁兰多糖(Pullulan,LP)和山梨酸钾(Potassium sorbate,PS)进行单因素试验,利用响应面Box-Behnken试验设计对复合生物保鲜剂进行优化,筛选出了0.22%NI、1.61%LP、4.14%PS为最佳配比。使用最佳配比的复合保鲜剂对微冻贮藏期间大口黑鲈鱼肉的pH值、菌落总数(total viable count,TVC)、TVB-N(total volatile base nitrogen,TVB-N)值、肌动球蛋白含量、巯基含量、Ca^(2+)-ATPase活性、持水力(Water holding capacity,WHC)进行测定。【结果】复合生物保鲜剂组(NLP组)在贮藏期结束时(10 d),pH值仍小于7.0;TVB-N值未超过12 mg/100g;菌落总数未超过5.0 lg(CFU/g);鱼肉持水力、肌动球蛋白含量、巯基含量和Ca^(2+)-ATPase活性下降了7.08%、11.01%、22.07%和28.33%。对照组(CK组)在贮藏期结束时,pH值大于7.0;TVB-N值已达到12.55 mg/100g;菌落总数已超过5.0 lg(CFU/g);持水力、肌动球蛋白含量、巯基含量和Ca^(2+)-ATPase活性分别下降了10.75%、22.62%、34.78%和40.48%。【结论】复合生物保鲜剂能有效减缓大口黑鲈鱼肉微生物指标及各项理化指标的变化,对延缓鱼肉腐败变质、延长货架期具有较好的效果。

摘要：目的建立沙门菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌三重PCR检测方法。方法3株菌在本实验室自行研制的共增菌培养基(SSV培养基)混合培养16h,分别对沙门菌invA基因、金黄色葡萄球菌nuc基因、副溶血性弧菌collagenase基因设计特异性引物,建立三重PCR体系,通过对引物浓度、退火温度及循环次数进行优化,从而建立最优体系,并从特异性、重复性、灵敏性3个方面对体系进行评价。结果三重PCR体系中,invA、nuc、collagenase引物浓度分别为10、12.5和12.5 nmol/L;最佳退火温度为55.6℃;目标菌的引物特异性好,且体系的检测灵敏度高,3株菌在三重PCR体系中的灵敏度都在10^(2) CFU/mL以上。结论建立的三重PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好。

摘要：【目的】研究对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)囊膜蛋白sVP53B克隆、表达、纯化及抗血清制备。【方法】根据WSSV囊膜蛋白基因序列,设计引物,PCR扩增出功能序列(Svp53B),构建到pET-16b载体后,转化至大肠杆菌Rosetta 2诱导表达,用SDS-PAGE、Western blotting检测优化表达。表达产物采用Ni-NTA琼脂糖磁珠进行纯化、割胶回收融合蛋白,以纯化的Svp53B-his为抗原,免疫兔子获得多克隆抗体,通过间接ELISA检测抗体的效价。【结果】构建重组质粒p ET-16b-Svp53B,在大肠杆菌Rosetta 2中以1 mmol/L IPTG诱导表达量最高,主要以包涵体形式表达。纯化包涵体蛋白免疫兔子,获得多克隆血清,效价达到1:150 000。【结论】原核表达并纯化得到高纯度的WSSV囊膜蛋白s VP53B,制备的兔源多克隆血清亲和力高、特异性好,这对后期进一步研究VP53B与经口侵染相关功能奠定了基础。

摘要：为改善美国大口胭脂鱼的腥味问题,采用红茶脱腥法对其脱腥,使用响应面软件优化设计美国大口胭脂鱼脱腥工艺,采用整体材料吸附萃取(monolithic material sorptive extraction,MMSE)提取美国大口胭脂鱼肉中的挥发性物质,并利用气相色谱-质谱-嗅闻联用法(gas chromatography-mass spectrometry-olfactometry,GC-MS-O)对胭脂鱼肉中的挥发性成分进行分析。用红茶对美国大口胭脂鱼进行脱腥处理,经响应面软件分析得到胭脂鱼的最优脱腥条件为:红茶用量为15 g/L,脱腥时间为41 min,脱腥温度为43℃。通过比较,脱腥后的挥发性物质相对百分含量都有所减少,鱼肉腥味明显减弱,其中,己醛,1-戊烯-3-醇和1-辛烯-3-醇,辛醛和壬醛等物质相对含量变化明显。

摘要：设计了一种单螺旋通道的聚二甲基硅氧烷（Poly（dimethylsiloxane）,PDMS）微流控芯片,用于副溶血性弧菌气溶胶的快速有效富集。该芯片的特征在于其通道呈螺旋分布,且通道内部含有均匀分布的鱼骨形结构。结果表明,在不同富集时间段内,采用该芯片方法捕获的细菌总数均远高于传统落板法。对于传统落板法无法有效捕获的低浓度样本（10~4CFU/mL）的缺陷,该方法的优势在于：芯片内部的螺旋通道可增大对气溶胶中微生物的离心力;鱼骨形结构的设计增加了待测样品与芯片内壁间的接触几率。此外,以无鱼骨形的螺旋芯片作为对照,验证了鱼骨形结构对于高效富集的意义。此芯片设计巧妙、易于制备、高效便携、富集效果较好,在气溶胶污染严重的水产加工等场所具有较大的应用前景。

摘要：目的研究以银耳多糖为乳化剂的槲皮素微乳处方和制备工艺。方法通过溶解度考察、配伍试验和伪三元相图的绘制优选微乳处方;采用银耳多糖为天然乳化剂,以油相、混合乳化剂及助乳化剂比例为考察因素,粒径、载药量及多分散指数(PDI)为评价指标,采用星点设计-效应面法优化槲皮素微乳处方并对其性质、溶出度及稳定性进行评价。结果槲皮素微乳处方中油相为三乙酸甘油酯(36%)、乳化剂为银耳多糖(23%)和聚山梨酯80(23%),助乳化剂为PEG400(18%);所得微乳外观均一透明,乳化后平均粒径为(25.04±0.94)nm,Zeta电位为(−13.20±0.68)mV,PDI为0.311±0.030,载药量为(30.17±1.02)mg/g;溶出度实验表明,槲皮素60 min在人工肠液和人工胃液的累积溶出度为87.95%和70.47%;储存稳定性实验、高速离心和高温实验结果表明,微乳的质量稳定。结论槲皮素微乳制备工艺简单,可以增加槲皮素的溶解度和溶出度,为相关制剂的进一步研究与开发提供参考。

摘要：旨在探讨不同的GC夹以及GC夹连接引物的不同位置对3种食源性致病菌的DGGE图谱结果的影响,合成6对RNA聚合酶β亚基编码基因rpo B引物(rpo B 1-6),含3种不同GC夹(GC-1,GC-2,GC-3),且每种GC夹分别连接于正反引物5'端。应用rpo B-PCR-DGGE对副溶血性弧菌(5株),单增李斯特菌(5株)和沙门氏菌(3株)进行分析,并与V3-PCR-DGGE和ERIC-PCR的图谱及聚类分析结果进行比较。结果显示,GC-3夹连接于反引物上的rpo B-PCR-DGGE分辨效果最好,分辨力指数达0.9,与ERIC-PCR相同,高于V3-PCR-DGGE。GC夹序列和连接引物位置均对rpo B-PCR-DGGE图谱结果产生影响。选择或设计无连续鸟嘌呤(G)排列的GC夹序列且将其连接于反引物5'端,均能有效提高rpo B-PCR-DGGE对食源性致病菌检测与分型的效果。

摘要：为快速高效地提高菌株Bacillus cereus B03的产酶能力,采用响应面法对Bacillus cereus B03产β-内酰胺酶的发酵培养基进行优化。首先通过单因素实验研究了不同碳源及浓度、不同氮源及浓度、不同金属离子及浓度、氯化钠、磷酸氢二钾以及温度、pH、接种量、装液量对菌株产酶活力的影响,然后设计Plackett-Burman试验筛选出影响产酶的3个显著性因素:温度、pH、接种量。在此基础上,最后设计Box-Behnken中心组合试验确定最优产酶发酵条件。结果表明,最佳发酵培养基成分为葡萄糖20 g/L、酵母浸粉20 g/L、NaCl 2 g/L、MgSO4·7H2O 0.2 g/L,K2HPO4·3H2O 4 g/L,最佳产酶发酵条件为发酵温度37℃,pH为7.3,接种量3%,装液量50 mL/250 mL。在此优化条件下,该菌株产β-内酰胺酶的酶活力为113278.7 U/mL,为优化之前酶活(88792.7 U/mL)的1.28倍。本研究为进一步工业化开发利用性状稳定且高产β-内酰胺酶的菌株提供借鉴。

摘要：建立了环介导恒温扩增技术检测携带tdh基因的致病性副溶血性弧菌。基于副溶血性弧菌高度保守的tdh基因序列,设计了6条特异性引物,两条外引物F3、B3,两条内引物FIP、BIP及两条环引物LF、LB。在Bst DNA Polymerase作用下,60℃恒温水浴进行扩增。对10种细菌共21株菌进行LAMP扩增,所试6株副溶血性弧菌均为阳性,说明引物具有高度特异性。本LAMP方法对纯培养物的灵敏度可达到9.42cfu/m L。对污染食品中副溶血性弧菌的灵敏度为25.3cfu/25g,40～60min内即可完成检测。本方法操作简便、特异性强、灵敏度高,可以为临床提供简单、快速、高灵敏度和高特异性的检测应用。

摘要：为了开发一种适合于试纸条法快速检测南美白对虾主要过敏原原肌球蛋白(Tropomyosin,Tm)的简单快速的样品前处理方法。本实验设计了8种预处理方法,并通过BCA蛋白定量、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫印迹和层析试纸条检测比较分析了8种方法的可行性。结果发现,采用方法8制备的样品提取液蛋白质浓度适中(2.5mg/mL),杂蛋白较少且对磁性纳米探针标记的免疫层析检测干扰少,较适合于现场快速检测。本研究优化的虾类过敏原Tm的样品前处理方法为:用丙酮抽提虾肉至无色,加入20mMTris-HCl(pH9.2)匀浆30s,超声处理10min,加热5min,冷却后用迷你离心机离心10min,所得上清液即为样品。