摘要：目的构建小鼠组织蛋白酶K(CTSK)基因的敲降重组腺相关病毒(AAV-shCTSK),检测AAV-shCTSK在小鼠体内的敲降效率,及其对脂肪组织脂质储存的影响。方法设计阴性对照组(NC)及CTSK的shRNA引物,退火后插入到骨架载体中,挑选克隆并测序鉴定,重组质粒经纯化后,利用转染试剂PEI将构建好的腺相关病毒载体、包装质粒和辅助质粒共转染到293T细胞中,进行腺相关病毒包装与扩增,得到AAV-shNC以及AAV-shCTSK。利用脂肪组织原位注射将AAV病毒注射入小鼠附睾脂肪组织,2周后免疫印迹实验检测小鼠脂肪组织中CTSK蛋白的表达量及HE染色检测脂肪组织中脂滴大小。结果成功获得AAV-shNC以及AAV-shCTSK腺相关病毒。原位注射AAV-shCTSK的小鼠脂肪组织中CTSK成功敲降,脂肪组织中白色脂肪细胞显著变小。结论小鼠CTSK的敲降腺相关病毒构建成功,脂肪组织CTSK敲降引起脂肪组织中脂质含量减少。

摘要：目的:以大学生基础医学创新研究暨实验设计竞赛为导向,探讨多层次实验教学模式改革的效果。方法:自2013年度起,在某医学院临床医学专业教学班公布实验开放安排,学生自愿报名。将生化实验项目分为开放性实验、综合设计性实验,把创新元素融入到实验的各个环节。在完成2个实验项目后,根据学生完成情况每年度筛选10~20名学生进入下一阶段学习——大学生创新项目实验,最终筛选出适合参赛的学生。对参赛的60名学生进行相关内容的问卷调查。结果:调查结果显示,所有学生均对开放性实验的内容及进度持满意态度,认为能提高解决问题的能力,有助于创新及动手能力的培养,并能激发科研兴趣;学生2017至2023年参加第三届至第九届全国大学生基础医学创新研究暨实验设计大赛,共获22项国家级奖项,14项分区赛奖项。2017年,10人考研,9人被录取;2018年12人考研,11人录取,其中1人在复试阶段逆袭成功;2019年14人考研,14人录取;历届考研率高达94%以上。结论:以大学生基础医学创新研究暨实验设计竞赛为导向建立的创新实验教学体系,能有效培养学生的创新能力,激发学生不断创新的科研兴趣,经过训练的学生能够较为轻松地应对科研及实际应用问题。

摘要：放线菌一直以来都是药物发现的重要来源。学习和掌握放线菌蕴含活性物质的发现、分离等相关专业知识和技能是医科院校生物技术专业的学生的基本要求。鉴于安徽医科大学微生物学实验存在的不足,该校细胞生物学教研室设计开展了以菌株资源为主线、实验技能培训为目的跨学科整合实验项目,以项目中药植物土大黄内生放线菌的分离、鉴定为例,采用线上线下混合式以及PBL教学模式,以学生为主体,并采用了相对细化和量化的考核体系对学生进行综合评价。该改革实践有效提升了学生的学习兴趣、动手操作能力、团队协作能力、逻辑思维能力、科研设计能力以及创新能力,可为相关课程改革提供参考。

摘要：目的:探索新医科背景下如何将思政元素有机融入营养与食品卫生学课程的教学中去。方法:通过查阅文献、教学讨论等方式,筛选合适的思政元素与案例融入营养与食品卫生学课程中去,初步探究可行策略,在我校2018级预防医学专业试点实施并评价。结果:94.65%(124/131)的学生对课程思政内容设计表示满意,97.71%(128/131)的学生认为对拓展专业知识有帮助,93.13%(122/131)认为在立德树人效果方面有作用,整体反馈较好。对课程思政教学普遍持认可态度。结论:专业课程中融入思政元素可行,且能在一定程度上丰富专业课内容,提高学生兴趣,使“立德树人”真正能够在专业素质培养上落到实处。

摘要：加强应激医学科学知识宣传教育,是新时代医学院校高素质人才培养的重要内容,也是全面提升全民健康科学素养的有力抓手。河北医科大学应激医学课程教研团队牢牢把握学科发展迅速、交叉性强的特点,以建构主义理论为指导,坚持“学生中心”“持续改进”的原则,持续强化课程育人功能,在课程设计理念、教学内容设置、思政育人元素挖掘、课程团队建设等方面进行了积极探索,在推动应激医学科学知识普及、引导医学研究生树立正确的应激医学观和大健康观、更好地运用大健康观念指导未来职业发展等方面取得了良好的实践效果,学生总体满意度高。本文就该课程建设具体实践进行了梳理,对面临的问题与举措进行了探讨,以期为相关课程建设提供有益借鉴。

摘要：目的优化构树叶黄酮类物质的提取工艺,并探讨黄酮类物质对小鼠表皮干细胞的抗氧化作用。方法采用单因素试验优化构树叶黄酮类物质提取工艺中的液料比(15∶1、20∶1、25∶1、30∶1、35∶1)、NaOH浓度(0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%)、pH(2.5、3.0、3.5、4.0、4.5)、浸提温度(60、65、70、75、80℃)。在单因素试验结果的基础上,以黄酮类物质质量分数为评价指标,采用正交试验设计确定最佳提取工艺。免疫磁珠法分选CD49f+/CD71-小鼠表皮干细胞,并检测黄酮类物质对其细胞相对活力及细胞中还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量的影响。结果黄酮类物质提取工艺的最佳条件为:液料比30∶1、NaOH浓度0.6%、pH4.5、浸提温度75℃。最佳条件下提取黄酮类物质平均质量分数为1.47%。与阴性对照组比较,当黄酮类物质终浓度为25及50μg/mL时,细胞相对活力明显增加(F分别为1.427和13.747,P均<0.01);当黄酮类物质终浓度为12.5、25、50μg/mL时,GSH含量明显上升(F分别为0.044、0.291和2.577,P均<0.05),MDA含量明显下降(F分别为3.568、4.909和1.400,P均<0.05)。结论优化后的构树叶黄酮类物质提取工艺稳定可靠,有利于构树叶加工后剩余原液的再利用,提取的黄酮类物质可促进小鼠表皮干细胞增殖,具有抗氧化性。

摘要：基于第三代光敏剂的设计思路,以提高光敏剂的生物相容性等性能,用EDC/NHS催化体系,将羧甲基壳聚糖(CMC)与卟啉结合制得卟啉-壳聚糖共聚物(TAPP-CMC)。通过紫外光谱、红外光谱、X射线粉末衍射和热重量分析表征了相关化合物;通过扫描电镜观察到TAPP-CMC和CMC均为不规则的片状结构;肿瘤细胞形态考察了TAPP-CMC对肝癌细胞的光动力抗肿瘤活性。研究结果表明:EDC/NHS催化体系是一种可行的卟啉-壳聚糖共聚物的合成途径,聚合后可提高其生物相容性,同时对肝癌细胞有一定的光动力抗癌活性。

摘要：目的:基于多重聚合酶链式反应(PCR)技术,建立并评价一种可同时快速特异鉴别熊胆粉生物来源的方法,为鉴别人工模拟混合掺假样品提供依据。方法:利用猪、牛和熊线粒体细胞色素b基因,SDS-蛋白酶K裂解法(SDS-PK)提取胆类DNA,Primer Premier 5.0软件设计可扩增不同大小DNA片段且无交叉反应的物种特异性引物,特异性扩增后,将扩增条带克隆后测序,与GenBank数据库已登记序列比对。建立并优化多重PCR,评价其特异性和灵敏度,并采用该方法鉴别27份模拟混合掺假样品。结果:建立的猪、牛和熊胆粉DNA提取方法可于2 h之内完成操作,DNA纯度分别为2.04、1.69和1.70,浓度分别为158.63、189.34和148.55 mg·L^(-1)。设计可扩增出猪、牛和熊的物种特异性引物。测序结果与GenBank数据库已登记序列同源性达99%以上。PCR体系各物种引物特异性强,无非特异扩增。应用于三重PCR体系中的引物互不干扰,检测灵敏度高,3种靶标样品任意一种DNA浓度降至1 mg·L^(-1)时均可成功检测。27份人工模拟熊胆粉不同物种及不同比例掺假样品的检测结果与预设混合情况相符,盲法随机抽样重复检测5次,结果稳定。结论:成功建立可通过一次实验同时鉴别猪、牛和熊胆粉的方法,具有简便、灵敏及高效的特点,可应用于熊胆粉及其常见动物源性掺伪的鉴别。

摘要：在全面推进高校课程思政建设的背景下,为落实立德树人的根本任务,各高校纷纷开展专业课程思政建设。以成都医学院的《生物化学与分子生物学》课程为例,文章深度挖掘该门课程所蕴含的思政元素,最终确定了7个典型的思政元素,并进行了相应的课程设计,采用案例式教学方法将其在实践中教学。课后,对成都医学院2019级临床医学、麻醉学、儿科学、医学影像学、药学和中药学等6个专业的888名学生发放调查问卷,检测其实施效果。结果表明,所开展的案例式思政教学能够较好地增强学生对该门课程的认可度,帮助学生树立良好的价值观念,初步达到了专业课思政教学的目的。最后,结合实施效果,本文从教学内容和方法的改进、课程思政教学团队的打造和思政教学评价机制的完善等方面展开了积极的探索,以期为专业课程全面实施课程思政提供借鉴。

摘要：利用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除人Huh7肝癌细胞的血管紧张素转化酶2(ACE2)基因,构建ACE2基因敲除细胞株,为研究ACE2在肝细胞癌的作用提供细胞模型。首先,对ACE2结构域进行鉴定,利用在线网站设计两条破坏所有结构域、靶向作用于ACE2外显子的sgRNA。其次,构建重组载体并转染肝癌细胞Huh7,嘌呤霉素筛选出单克隆细胞株。最后,免疫印迹鉴定敲除效果。结构域鉴定结果显示,在340-520号氨基酸位置存在Zn结合位点和激活位点,根据sgRNA靶点设计原则,采用片段敲除的方式,针对ACE2的第9、第10外显子设计两对sgRNA,并成功构建PX459-ACE2-sgRNA重组质粒。嘌呤霉素成功筛选出单克隆细胞株,并测序证实了发生片段敲除,ACE2蛋白在敲除细胞株中不表达;成功构建ACE2敲除的Huh7细胞株,为日后研究ACE2在肝细胞癌的发生机制奠定基础。