摘要：建立FKBP12 /Fas双聚体可诱导细胞凋亡生物效应的细胞模型 ,为FK5 0 6类小分子化合药物的初步筛选提供一个可应用的技术平台 .首先利用RT PCR方法钓取人源性Fas胞浆区基因 ,测序鉴定正确后 ,插入到载体pC4M FV2E中 ,构建 pC4M FV2E/Fas表达质粒 .然后将Myr FKBP12 Fas融合基因从pC4M FV2E/Fas质粒克隆进 pEGFP N1中 .最后将重组质粒pEGFP N1/FKBP12 Fas转染进HEK2 93细胞 ,并利用G4 18筛选融合基因FKBP12 Fas稳定表达的细胞株 .实验结果显示 ,阳性化合物AP2 0 187作用 4～ 6h后 ,稳定转染的靶细胞发生凋亡 ,基因组呈现典型的“DNALadder” ,而FKBP12的天然结合蛋白FK5 0 6可竞争性地阻断这种阳性药物诱导的细胞凋亡 .研究提示 :所构建的细胞模型 ,可用于以FKBP12为靶标、基于FK5 0 6空间构型设计合成的FK5 0 6类小分子化合药物的初步筛选 .

摘要：IL 6是一种多功能的细胞因子 ,同时IL 6的过度表达与一些疾病的发生和发展有密切关系 .IL 6通过一个双链受体系统作用于靶细胞 .实验结果表明 ,IL 6与 80ku的配基结合链IL 6R和信号转导子 gp1 30构成一个相互作用的异六聚体模式 ,通过 gp1 30的二聚体化引发胞内的信号转导 .IL 6胞内的信号转导途径有两种 :Jak STATs路径和Ras MAPK级联反应路径 .靶向IL 6信号转导的药物设计和筛选研究将为IL

摘要：目的设计多型别HCV—E1表位复合免疫原，通过免疫小鼠，探讨其在丙型肝炎治疗性疫苗与诊断试剂研究中的应用。方法分析比较HCV—E1包膜糖蛋白B细胞表位序列，选取几个代表性基因型的中和性优势抗原表位，再结合泛DR辅助性T细胞表位（PADRE），构建含有不同HCV型别E1表位抗原基因和通用T辅助细胞表位基因的原核表达质粒。结果成功构建了含有HCV1a、1b、2a、3a、4a和6a等基因型E1中和性表位以及通用T辅助细胞表位的质粒pBVIL1／E1SPADRE，该质粒转化大肠杆菌后获得的工程菌，通过诱导培养可以高效表达重组多型别HCV—E1表位复合抗原，所获得的多型别HCV—E1表位复合免疫原可在BALB／c小鼠体内诱发强烈的体液免疫反应，ELISA检测抗体水平可达到1：12800。结论新构建的HCV-E1表位复合免疫原具有很好的免疫原性，为进一步研究HCV疫苗奠定了基础。

摘要：研究了GDNF结构与功能的关系 .基于鼠源GDNF的晶体结构 ,利用计算机SGIIndigo2(R4 4 0 0 )工作站和InsightⅡ (95.5)蛋白质分析软件模拟了人GDNF三维结构 ,设计了GDNF分子的两个缺失突变体ΔN1 2 8和ΔN78 90 .以野生型GDNFcDNA作为模板 ,用PCR法得到编码缺失突变体的DNA片段 .将大肠杆菌作为表达系统 ,使缺失突变体GDNF在大肠杆菌中表达 ,对表达产物纯化和复性后进行生物活性测定 .两株突变体在大肠肝菌中获得了高效表达 ,纯化后的GDNF突变体ΔN1 2 8可以与存在于KG 1a细胞表面的受体结合 ,但不能促进 8日龄鸡胚背根节突起的生长 .突变体ΔN78 90既不能与受体结合 ,同时也失去了促背根节突起生长的功能 .说明GDNF分子的N端氨基酸对分子的生物学活性很重要 ,但对分子与受体GDNFR α的结合并不是必需的 ,而分子中的螺旋区对分子与受体的结合以及生物学活性都必不可少 .

摘要：提出了一级螺旋区概念，在此基础上研究了基于正多边形的ＲＮＡ二级结构绘图与自由能计算，并设计了程序，可将相容性螺旋区列表表示的ＲＮＡ二级结构转化为分子生物学家熟悉的图形方式，同时计算出基于Ｓａｌｚｅｒ能量积分系统的自由能数值。经多例运行表明方法合理，运行结果可靠。

摘要：目的:以硫氧还蛋白(Trx)为骨架,pB ridge为载体,构建可诱导表达的酵母构象型随机10肽库。方法:利用PCR扩增出trx基因,向trx的突环区引入AscⅠ酶切位点,构建pB ridge-mTrx重组载体。采用(NNK)10的编码方式设计并合成两条寡核苷酸链,经退火、延伸,AscⅠ,RsrⅡ双酶切后,克隆至pB ridge-mTrx载体,电转化***10B感受态细胞。对所构建多肽文库的库容和随机性进行了鉴定,并利用W estern印迹对文库的可诱导性进行分析。结果:获得库容量为8.7×108的随机肽库。随机挑选20个克隆进行测序,4个核苷酸的出现频率与理论值接近。在M et缺陷培养基中,随机肽库可被诱导表达。结论:成功构建可诱导表达的随机肽库,为进一步筛选特异性多肽奠定了基础。

摘要：多项临床研究已证实人IL-6及其受体的异常表达与类风湿性关节炎、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤的发生密切相关。因此对其拮抗剂的研究日益受到人们的关注。目前，国外对人IL-6受体拮抗剂的研究主要集中于单克隆抗体和突变体两个方面，小分子拮抗剂的研究相对较少。小分子药物具有毒性小、无免疫反应、抗代谢等优点，因此，研究小分子人IL-6受体拮抗剂具有重要的临床意义。我们以人生长激素受体的X射线晶体三维结构为模板，同源模建了人IL-6R胞外区配体结合功能域的空间构象，并根据其特定位点的空间结构设计和寻找了一系列的小分子化合物。我们选用R2细胞系(表达人IL-6受体蛋白的大鼠急性白血病细胞)和M1细胞系(小鼠急性髓系白血病细胞)为筛选模型，先对R2细胞和M1细胞对rhIL-6的反应性进行了检测，再用体外液体培养的方法，用MTT检测法检测了22种结构类别113个小分子化合物，筛选出了3个化合物具有部分的人IL-6受体拮抗活性。用直接免疫荧光法检测到这3个化合物可阻断rhIL-6与其受体的结合。

摘要：重组人粒细胞──巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）已经在原核、真核细胞表达并得到纯品，为它的结构与功能研究提供了有利条件．目前国内外对于ｒｈＧＭ－ＣＳＦ的结构与功能研究主要集中在晶体结构、化学修饰、溶液中构象和稳定性以及突变和分子设计方面．分子结构与功能的关系以及与ＧＭ－ＣＳＦ受体作用机理研究也取得了突破性进展．

摘要：通过对大量的分子生物学实验及晶体衍射结果的分析 ,从分子水平揭示人白细胞介素 6(hIL 6 )与其受体相互作用的结构模式及结合表位 .hIL 6属于促红细胞生成素受体超家族 ,首先和hIL 6受体α低亲和力结合 ,两者形成的复合物再与hIL 6受体 β(gp130 )的胞外区相互作用形成高亲和力三聚体 ,但是hIL 6不能单独和gp130结合 ,需要借助于hIL 6受体α的桥梁作用才能将二者联系起来进而促进六聚体的形成 .hIL 6是一种能够介导细胞表面信号转导 ,调节机体免疫及造血干细胞增殖和分化的细胞因子 ,许多疾病的发病机理及发展进程都和hIL 6过表达有关 .基于对hIL 6与其受体相互作用方式的探究 ,为hIL 6小分子拮抗剂的药物设计提供了理论模型 ,在此基础上已研究开发了许多不同种类的hIL 6新型分子拮抗剂 ,其中部分拮抗剂已应用于临床指导 .

摘要：目的通过研究抗体轻、重链间的结合能与其构象特征、理化性质间的内在关系,建立相应的数学模型,合理评价抗体分子的热稳定性,为抗体分子的设计、合理改造及亲和力成熟奠定基础。方法采用生物信息学和计算生物学相关方法对已有晶体结构的抗体结构信息进行分析,通过距离几何学、计算机图形学技术对抗体可变区的构象特征进行研究;基于分子间氢键形成理论、反应自由能理论,从热力学、动力学对抗体分子轻、重链可变区相互作用的动态结构及能量特征进行探讨;借助统计学原理、非线性拟合、回归分析等分析手段对抗体轻、重链作用能与其构象特征、理化性质建立相关性分析。结果通过分子模拟与统计学分析,抗体的轻、重链可变区结合能与其轻、重链间的氢键形成数目、范德华作用均存在线性相关性;与抗体理化性质存在基于多项式的非线性相关性。基于关键位置氨基酸的使用频率以及建立的分析模型,针对无法获得稳定工程细胞株的抗蓖麻毒素人源化功能抗体进行合理的评价及优化,借助理论指导,获得抗蓖麻毒素人源化抗体稳定的工程细胞株。结论抗体可变区的自身结构(构象、理化性质)对其稳定性有很大影响,可以通过抗体结构优化来提高抗体的稳定性。