摘要：目的研究辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)与紫杉醇(paclitaxel,PTX)单独及联合应用对人卵巢癌紫杉醇耐药细胞OC3/P存活及凋亡的影响,初步探讨两种药物联合应用是否具有协同作用。方法采用倒置显微镜观察不同药物处理对细胞形态的影响;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定各组细胞生长抑制情况;流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率,并进行联合用药分析。结果不同药物处理后,倒置显微镜下可见细胞形态发生改变,联合用药组形态变化较单独用药组显著;MTT法检测细胞生长情况,结果显示,联合用药组较单独用药组具有显著抑制OC3/P细胞存活的作用(P<0.05),析因设计方差分析显示,两药物存在正交互作用,并由金式公式计算表明两药物具有协同作用。进一步利用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,结果表明,联合用药组诱导凋亡的比率显著高于单药组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 SAHA联合PTX可有效抑制人卵巢癌紫杉醇耐药细胞OC3/P的存活并诱导其凋亡,两药物联合有协同效应。

摘要：目的探讨基于CD4立体构型设计的新型免疫抑制剂(J2)在小鼠体内的免疫抑制作用以及其作用机制。方法将羧基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记的C57BL/6(H-2b)小鼠的淋巴细胞4×10~6～6×10~6经尾静脉注入经^(60)钴照射(900拉德)后的DBA/2(H-2d)小鼠体内构建模型。将DBA/2小鼠随机分为5组,每组5只,模型建立后即刻腹腔注射J2,每天1次。对照组注射生理盐水、CsA组注射环孢素A(10mg/kg体重);实验组J2A组(1mg/kg体重)、J2B组(4 mg/kg体重)、J2C组(8mg/kg体重)。给药3d后分组处死DBA/2小鼠取脾制备淋巴细胞,用CD3、CD4、CD8单抗分别标记受检T细胞,FACS流式细胞仪检测CD4^+T细胞和CD8^+T细胞在小鼠体内分裂增殖的情况,并检测CD4^+T细胞的凋亡情况。结果CFSE标记C57BL/6小鼠的脾淋巴细胞着染率大于99%。对照组分裂的CD4^+ T细胞(75.4±1.58)%、分裂的CD8^+ T细胞(83.48±1.25)%明显多于CsA组和实验组(P0.05),但J2A组多于CsA组(P<0.05)。对照组CD4^+ T细胞早期凋亡的比例(41.1±3.4)%明显高于其他各组(P<0.01)。J2A组(35.6±4.1)%、J2B组(24.0±3.7)%和J2C组(13.6±2.3)%CD4^+ T细胞早期凋亡的比例显著高于CsA组(7.4±1.9)%(P<0.05)。结论J2可能抑制T细胞亚群CD4^+ T细胞的活化,从而进一步抑制CD8^+ T细胞的分裂增殖而具有免疫抑制作用。

摘要：以ＡｎｇｒａｙＳＫ和自行设计的引物作半套式ＰＣＲ，成功地从人外周血Ｂ淋巴细胞中扩增出Ｉｇ重链可变区基因。扩增产物的分子量为６６０ｂｐ左右。该文结果提示，在建立全套抗体基因文库时，半套式ＰＣＲ法能较好解决Ｉｇ可变区基因多样性的扩增问题。

摘要：目的探讨新式SOEPCR高效组装人单链抗体在高容量人天然噬菌体抗体库中的应用。方法通过引物设计的改变,将6种人VH基因和11种人VL基因利用两步法直接互相两两连接为人scFv基因,并且与传统的SOE法进行对比。scFv基因用于构建噬菌体单链抗体库。结果新式SOEPCR法成功的将6种人VH基因和11种人VL基因连接成66种不同的人scFv基因,与传统的SOEPCR法相比,效率高且方法简便,经过约130次电转化后,抗体库的总库容为5·58×109。结论成功地改进了传统的SOEPCR方法,高效组装了66种不同的人scFv基因,提高了抗体库的多样性。

摘要：根据与人RTN3基因同源的小鼠EST AA237377设计筛库引物,克隆得到小鼠RTN3 cDNA,该cDNA长2814 bp,含1个714 bp的可读框,编码1个具237个氨基酸的蛋白.Northern杂交检测该基因在小鼠不同组织中的表达谱,发现它有3个转录本,分别为1.8,2.8和4.2 kb,其中1.8和 2.8 kb的转录本存在于多种组织中,2.8 kb的转录本在脑中的表达量最高,4.2 kb的转录本仅在脑中存在.用成年小鼠脑和脊髓切片进行原位杂交和免疫组织化学反应,发现该基因在中枢神经系统的非胶质细胞中广泛表达,且在某些区域表达较高,如海马、大脑皮层、下丘脑及一些神经核团.

摘要：目的:探讨完全睡眠剥夺(total sleep deprivation,TSD)对大脑执行控制功能的影响。方法:采用自身前后对照设计。以13名健康男性大学生作为被试,进行两次Go/No-go测验,同时进行功能磁共振成像(functional magnetic resonance imaging,fMRI)扫描,第一次在正常睡眠后12小时完成,第2次间隔3周在睡眠剥夺36小时后完成。结果:与睡眠后的Go/No-go测试成绩相比,睡眠剥夺后被试的正确击中率下降[(0.99±0.01)vs.(0.97±0.04).P<0.05)],错误反应率增高[(0.04±0.04)vs.(0.10±0.08),P<0.05]。fMRI结果显示前扣带回皮质活动降低[(-0.391±0.003)vs.0;P<0.05],前额叶皮质活动明显增强[(0.653±0.003)vs.0;P<0.05]。结论:睡眠剥夺36小时导致执行抑制功能的显著下降,前额叶皮质出现功能代偿是维持认知作业的重要特征。

摘要：背景:骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能,与可降解的多孔β-磷酸三钙陶瓷复合后具有修复节段性骨缺损的能力,为临床上修复各种原因导致的骨缺损提供了新的思路。目的:从放射学角度探讨用多孔β-磷酸三钙和自体骨髓间充质干细胞复合植入羊体内修复标准性骨缺损的效果。设计:以骨折愈合不同时期的骨痂生长情况为观察对象的随机对照。单位:武汉大学人民医院骨科,解放军军事医学科学院基础医学研究所组织工程中心。材料:实验于2002-03/2003-09在解放军军事医学科学院基础医学研究所组织工程中心完成。选取健康成年中国绵羊20只,随机分为空白对照组4只,单纯植入组8只,复合植入组8只。方法:全麻无菌条件下,抽取羊骨髓10～15mL,分离并培养出间充质干细胞,与多孔β-磷酸三钙陶瓷复合,构建组织工程化骨。各组动物均在跖骨中段锯取21mm长的跖骨干缺损,复合植入组植入β-磷酸三钙陶瓷与自体间充质干细胞复合体,单纯植入组植入β-磷酸三钙陶瓷,空白对照组缺损区空缺,然后逐层缝合。分别在术后即刻及1,3,6个月摄片观察,进行放射影像学评估(骨缺损区每面骨连接形成即得1分,在缺损区的任一面上均无骨连接为0分,缺损区的前、后、侧面及中央均形成骨连接为4分),图像分析X线阻射密度比较骨缺损的修复情况。主要观察指标:各组绵羊术后一般情况及大体观察、骨缺损区放射学分析结果。结果:实验纳入绵羊20只,全部进入结果分析。①各组绵羊术后一般情况:术后2～6h苏醒,切口无感染,内固定无松动。术后1周精神已逐渐恢复正常,伤肢能落地,但不能负重,2周后可以部分负重,3周有轻微跛行,4周后能自由活动,无跛行。②各组绵羊术后6个月大体观察结果:单纯植入组植入物表面白色的透明软骨样组织逐渐钙化,两端有骨桥与宿主骨相连,但仍可见有陶瓷材料颗粒存在;复合植入组植入物已不见,材料与宿主骨的界面消失,骨缺损部与宿主骨基本一致。空白对照组在术后各时间点均无骨组织形成。③各组绵羊术后不同时间骨缺损区放射学评分比较:复合植入组术后3,6个月均明显高于单纯植入组[(2.3±0.3),(1.8±0.5);(3.3±0.5),(2.6±0.6)分,P均<0.05]。④各组绵羊术后不同时间骨痂厚度与阻射密度相对值测量结果:复合植入组术后6个月骨痂厚度明显低于单纯植入组(4.62,7.64,P<0.05),阻射密度相对值明显高于单纯植入组(70.4±1.5,61.18±1.2,P<0.05)。结论:放射学评估及骨缺损密度测量能够较好地反映骨缺损修复的动态发展过程,多孔β-磷酸三钙陶瓷和自体骨髓间充质干细胞复合植入羊体内,可使大节段骨缺损较快得到修复。

摘要：目的：开发基于 TNF 功能表位的新型人源单链抗体。方法利用自主研制的鼠抗 TNF-α中和单抗 Z12能特异性识别 TNF-α的141-146位功能表位特性，通过理论模拟构建 TNF/抗体 Z12相互作用的复合物模型设计获得功能性拮抗肽（PT2、PT3、PT4、PT7）以及单域抗体 PTVH5（以人抗体可变区重链框架 VH5为支架合理展示 PT2、PT3、PT4），利用计算机辅助分子设计以及同源模建、分子对接方法，进一步合理选择人抗体可变区轻链框架（Vκ1）作为展示支架，通过构象判别、作用能比较以及识别区域确认并选择合适的连接肽设计新型单链分子 ScFv_AB1。结果理论分析发现，ScFv_AB1稳定性较好，识别 TNF-α的141-146功能位点（即 Z12识别的位点）。生物学实验证明， ScFv_AB1能与 TNF-α结合、抑制 TNF-α与TNFR 的结合、抑制 TNF-α介导的细胞毒作用。结论初步验证了“借助计算机模建，基于人抗体可变区的框架结构和拮抗肽设计单链抗体分子”的策略是可行的，从而为人源小分子抗体的制备提供了一条可供选择的途径。

摘要：目的基于单线虫两重PCR技术,利用细胞核DNA(nDNA)作为内参研究秀丽隐杆线虫线粒体相对数量的实验条件,进而建立一种相对定量秀丽隐杆线虫线粒体DNA(mtDNA)拷贝数的方法。方法首先以秀丽隐杆线虫nDNA和mtDNA序列为模板,利用多重PCR引物设计软件MPprimer和引物特异性评估软件MFEprimer V2.0设计两重PCR引物;然后针对以单线虫为PCR扩增模板的处理条件进行摸索,包括蛋白酶K的消化浓度及反应时间;最后研究秀丽隐杆线虫nDNA片段和mtDNA片段扩增后到达平台期的时间,进而比较不同循环数扩增下秀丽隐杆线虫线粒体拷贝数相对定量的可行性。结果单线虫经蛋白酶K 60℃消化及95℃灭活处理后,能较特异地扩增出nDNA和mtDNA;单线虫PCR模板的处理条件为50μg/ml蛋白酶K 60℃处理2 min并于95℃灭活10 min;线粒体拷贝数相对nDNA而言,趋于稳定的PCR循环数为26。结论建立了一种以为nDNA内参快速相对定量线粒体拷贝数的方法,为线粒体DNA拷贝数相关的实验研究提供了技术支撑。

摘要：目的:为研究10 kb以上DNA疫苗质粒的体内电穿孔递送,构建萤光素酶报告基因表达质粒p EE14.1-luc,并验证其表达。方法:从质粒p GL3-CMV中通过酶切、补平和纯化的方法获得萤光素酶基因luc,克隆入p EE14.1载体,构建重组表达质粒p EE14.1-luc,瞬时转染293T细胞,采用Western印迹、流式细胞术和免疫荧光等方法对萤光素酶基因在体外的表达情况进行验证,并运用活体成像仪检测萤光素酶基因在小鼠活体内的表达。结果:经菌液PCR鉴定和测序验证,p EE14.1-luc与预期设计完全一致;流式细胞术检测luc阳性表达率为22.41%,免疫荧光检测可见绿色荧光表达,Western印迹检测在相对分子质量为62×103处显现目的蛋白条带;同时,利用活体成像技术也检测到萤光素酶基因在小鼠活体内的表达。结论:p EE14.1-luc表达质粒构建成功,为研究DNA疫苗体内表达机制和体内电穿孔递送条件优化奠定了基础。