摘要：目的:为适应恶性肿瘤免疫治疗中多基因联合应用的需要,在真核表达载体pVAX1的基础上,利用内部核糖体进入位点IRES序列,构建双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES,以增强DNA疫苗的免疫疗效。方法:通过PCR扩增获得目的基因IRES并定向克隆到pVAX1载体中,然后在IRES序列的上下游分别插入红色荧光蛋白基因DsRed1和增强型绿色荧光蛋白基因EGFP,瞬时转染人胚胎肾细胞293T,通过流式细胞术和免疫荧光验证基因表达。结果:pVAX1-IRES经相应酶切和测序鉴定,与预期设计一致,DsRed1基因和EGFP基因在pVAX1-IRES载体中,不仅可以分别表达,而且可以同时表达,显示该双顺反子真核表达载体构建成功。结论:pVAX1-IRES双顺反子表达载体的构建,为基因联合表达和恶性肿瘤的免疫治疗作了必要准备。

摘要：目的分析埃博拉病毒核蛋白（NP）抗原表位,克隆表达埃博拉病毒NP抗原,为免疫学诊断试剂的研究奠定基础。方法采用BioSun生物学软件预测分析埃博拉病毒NP抗原的氨基酸表位区间,采用大肠杆菌优势密码子反向翻译成基因序列,采用PCR退火合成法合成NP优势密码子抗原基因,并利用载体pBVIL1进行克隆表达。采用间接ELISA技术评价获得NP抗原的特异性。结果确定埃博拉病毒NP抗原的氨基酸表位位于360~739 aa,共设计36条引物,扩增合成1140 bp的NP抗原基因,克隆表达后,融合蛋白相对分子质量为58×10^3,测序结果显示插入的NP基因正确。初步结果显示,NP抗原的特异性为99.24%（130/131）。结论获得埃博拉病毒NP抗原,为进一步研制特异的埃博拉病毒快速诊断试剂提供了抗原储备。

摘要：目的 :建立一个模拟脊髓全横断损伤后脊髓组分———原代培养的脊髓神经元损伤的模型。方法 :取Wistar大鼠 (孕 14d)脊髓 ,培养 10～ 12d后 ,采用所设计的标准模板 ,直视下进行损伤。观察损伤前后不同时间神经元的形态及即刻早期基因c_fos的表达变化。结果 :在损伤 8～ 12h后 ,损伤两侧存活的神经元突起便开始朝着损伤部位生长 ,随着时间的延长 ,神经元突起甚至可跨越损伤处而延伸至对侧。c_fos基因在损伤后 10min即有表达 ,2h达到最高峰 ,随后逐渐下降。结论 :此模型可用于模拟体外培养的脊髓神经元受到机械损伤以及观察神经元损伤后进行修复的一些分子事件 ,简便而可靠 ,实用性较强。

摘要：作为一种共受体分子,CD4通过其胞外段与MHCⅡ、TCR相互作用,形成CD4-MHCⅡ-TCR复合物,介导特异性抗原呈递;而其胞质段则通过与酪氨酸激酶P56Lck的相互作用,介导抗原信号传递,最终激活CD4+T细胞,引发一系列的免疫应答。另外,CD4自身的多聚化不仅促进与MHCⅡ、TCR的相互作用,而且增强T细胞抗原识别的特异性和敏感性。因此,通过阻断CD4分子的功能可以达到降低免疫反应性,抑制HIV在机体内复制的目的。随着CD4分子晶体结构的解析,CD4-MHCⅡ、CD4-gp120复合物结构的获得,CD4的功能表位及其结构特征得到合理确认,同时CD4分子与MHCⅡ、gp120作用模式也得到精细分析,以此为理论依据设计的不同类型抗CD4分子的拮抗剂(如抗体、拮抗肽、小分子先导化合物等)越来越得到人们的关注,其中部分拮抗剂已经应用于临床。本综述将对CD4功能表位的确定以及基于其功能表位展开的一系列CD4拮抗分子的研究进行归纳。

摘要：以人生长激素受体（ｈｕｍａｎ ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ， ｈＧＨＲ）胞外区配基结合功能域（Ｋ５２－Ｌ２５１）的晶体结构为模板，同源模建了可信度较高的人白介素－６受体（ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｈＩＬ－６Ｒ）胞外区配基结合功能域（Ｖ１０６－Ｐ３２２）的三维空间结构．通过观察该功能域中影响受体与配基结合的一些重要氨基酸残基的空间定位和分析４个保守的半胱氨酸残基定点突变对该功能域三维空间结构产生的影响，发现在ＩＬ－６受体双桶结构中３０５位谷氨酸残基的羧基侧链的空间构象对整个ＩＬ－６Ｒ的配基结合活性的改变起着关键作用．进一步借助于ＩＬ－６Ｒ和配基（ＩＬ－６）分子对接，确认了活性部位中３０５位谷氨酸残基的羧基侧链的空间构象对受体和配基对接时的静电势互补至关重要．

摘要：目的观察人突变型肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)体外诱导人脑胶质瘤细胞的凋亡作用。方法设计90个碱基突变的人TRAIL全长基因,分四段合成,然后拼接获得全长寡核苷酸,插入原核表达载体pGEX-2T,转化***-5α,丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,亲和层析法分离、纯化融合蛋白,凝血酶切得到单纯的TRAIL蛋白。MTT法和流式细胞仪定量分析纯化产物体外对人A172、U87、U251和鼠C6脑恶性胶质瘤细胞的凋亡作用。结果突变型TRAIL原核表达产物为可溶性,体外可明显诱导人A172、U87、U251脑胶质瘤细胞凋亡,而对C6鼠胶质瘤细胞无明确的凋亡诱导作用。结论原核表达突变型TRAIL在体外具有明显诱导脑胶质瘤细胞凋亡的作用。

摘要：目的探讨睡眠剥夺引起情绪紊乱的大脑功能网络机制。方法采用重复测量自身前后对照设计,利用静息态功能磁共振成像技术,比较睡眠剥夺前后大脑杏仁核3个亚区的全脑功能连接模式表征以及与情绪状态变化的关系。结果睡眠剥夺导致背外侧前额叶、背侧前扣带回、背侧后扣带回以及额下回和杏仁核3个亚区功能连接减弱(P<0.05);后扣带回/楔前叶、内侧前额叶、喙部前扣带回以及海马旁回功能连接上升。与睡眠剥夺前相比,剥夺后POMS总分显著升高,与内侧前额叶和杏仁核SFA区的功能连接强度显著正相关(r=0.415,P<0.05)。结论睡眠剥夺对杏仁核功能连接模式的影响存在明显的区域和网络特异性,杏仁核与默认网络脑区之间的功能连接上升,而与执行控制网络脑区之间的功能连接减弱,可能是睡眠剥夺后情绪调控能力下降的重要神经机制。

摘要：我们曾于2004年推出了计算机辅助分子生物学实验设计的软件系统B ioSun 1.0,该系统提供了较为全面的数据处理与分析功能。为了更好地服务于生物医学工作者,我们对该软件系统进行了升级,推出了2.0版本,新增的功能主要有:基于B last的多种形式的序列比对、基于C lustalW的多序列比对与进化树构建、蛋白质三维结构展示、基于RNA fold的RNA二级结构预测和序列格式转换等。通过与商业化综合性的生物信息学软件系统DNA-SIS MAX 2.05、DNAStar 5.0、Vector NTI 9.1和B ioEd it 7.0的比较发现,B ioSun2.0具有操作简便、功能众多和性价比高等特点,能够满足生物医学实验室的常规需求。

摘要：目的建立一种快速、准确、可视化、易开展的B、E型腺病毒检测技术。方法针对B、E型腺病毒壳蛋白保守序列设计通用引物,建立可同时检测出这两种腺病毒型别的重组酶聚合酶扩增结合侧流层析试纸条(recombinase polymerase amplification combined with a lateral flow dipstick,LFD-RPA)检测技术,评价其灵敏度与特异性,并验证最佳反应温度与反应时间,同时利用该法对19例B、E型腺病毒感染患者及10例健康志愿者鼻咽拭子标本进行检测。结果腺病毒LFD-RPA法检测灵敏度可达10拷贝/μl,与q PCR方法相近,且不会与其他亚属腺病毒及其他病毒发生交叉反应。反应可在25~45℃温度范围内高效进行,检测全程仅需15~20 min。利用临床咽拭子标本对检测体系进行评估,其灵敏度及特异性均达100%。结论该检测方法灵敏度高、特异性强、操作简单,反应快速,能脱离对大型仪器、专业操作人员及正规实验室的依赖,在基层卫生部门,尤其在野外及现场检测中具有极大的应用潜力。

摘要：背景:高温环境对生物体造成明显损伤,深入研究热环境损伤的机制、提高机体耐热损伤的能力,可为抗热环境药物研究提供参考。目的:观察预先使用米帕林,对热环境中大鼠损伤的作用,探讨急性热环境致机体脑、肺损伤作用和可能的保护措施。设计:完全随机设计,对照实验研究。地点和材料:地点为军事医学科学院研究所。材料为二级Wistar大鼠,雄性,体质量160～200g,由军事医学科学院实验动物中心提供,饲喂专用,饮用自来水。方法:将大鼠随机分组,根据体质量灌胃给予不同剂量的米帕林,对照组给予相当体积的生理盐水,1h后进入41℃热环境。主要观察指标:检测大鼠体温变化和死亡时间,分析药物剂量与体温变化、存活时间的关系。对死亡大鼠进行主要脏器的病理分析,寻找热环境对机体损伤的主要靶器官。结果:41℃热环境明显影响大鼠的代谢和存活,进入热环境的大鼠体温经过短暂维持后迅速上升,大约在38min后死亡,死亡大鼠解剖发现肺明显出血和脑水肿,病理切片观察发现肺细胞和大脑神经元死亡明显;预先灌胃给予4.5～18.0mg/kg米帕林能够明显减缓大鼠在热环境下体温升高的速率,增加大鼠在热环境中的存活时间。9.0mg/kg剂量组体温上升速率减缓20%左右,存活时间延长超过50%。9.0mg/kg剂量组大鼠在进入热环境38min左右处死后。