摘要：根据猪繁殖与咱呼吸综合征病毒JX株编码N蛋白的ORF7基因序列设计特异性引物。采用RT-PCR方法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因片段(367 bp),将其克隆于表达载体pET-32a上。测序验证后将重组质粒pET-32a-JX-N转入宿主菌Rosetta,经0.7 mmol/L IPTG诱导,SDS-PAGE显示外源基因编码的重组N蛋白在宿主菌中表达效率较高。Western-Blot试验结果显示,重组N蛋白具有反应原性。将纯化的重组N蛋白包被酶标板,建立并优化了能够用于PRRSV抗体检测的间接ELISA方法。

摘要：目的：建立食品过敏原牛奶成分LAMP(loop-mediated isothermal amplification)检测方法，并与实时荧光PCR(real-time PCR)检测方法比对。方法针对牛线粒体细胞色素b(cyt-b)基因设计LAMP引物并建立反应体系，在特异性和灵敏度方面与real-time PCR检测方法比对。结果本研究建立的LAMP方法检测9份不同品牌的牛奶和羊奶及其加工制品，没有出现交叉反应，具有良好的特异性。该方法的检测灵敏度为0.5%，与real-time PCR方法检测灵敏度相当。检测了69份实际样品，检测结果与real-time PCR检测结果一致。结论本研究建立的食品过敏原牛奶成分LAMP检测方法简单经济，检测结果可靠，可有效缩短检测时间，适用于过敏原牛奶成分的检测，具有良好的应用前景。

摘要：利用热分解法和表面4-羧基苯硼酸修饰,制备了用于转基因大豆提取基因组DNA的纳米粒子。制备的纳米粒子分散性好,磁响应性高。对比磁性纳米粒子和植物基因组DNA提取试剂盒提取转基因大豆基因组DNA的提取效果,结果表明,磁性纳米粒子提取转基因大豆基因组DNA的浓度明显高于试剂盒,实时荧光PCR检测转基因大豆的Ct值低于植物基因组提取试剂盒。

摘要：选取东部马脑脊髓炎病毒代表株进行序列比对分析,选择高度保守的区域,设计合成引物和Taq Man探针。对引物、探针浓度和反应条件进行优化,建立了东部马脑脊髓炎病毒荧光定量RT-PCR检测技术,实现了对东部马脑脊髓炎病毒的快速检测和鉴别。通过体外转录,制备了含有扩增区域核酸片段的东部马脑脊髓炎病毒核酸标准质控品cRNA,经稀释、分装定量、均匀性和稳定性检验后,作为方法的质控品对建立的方法进行评价,结果表明,应用建立的方法对阳性标准品的检测其灵敏度可达10eopies,对197份临床样品检测,表明建立的东部马脑脊髓炎荧光定量RT-PCR检测技术快速、敏感、特异。该方法的建立对该病的快速检测,及时采取相应防治措施、减少疫情散播有重要意义,也为动物及其产品的进出口检疫提供了一种可靠方法。

摘要：为考核实验室检测甲型H1N1流感病毒的能力,设计和实施了"CNAS T0459甲型H1N1流感病毒核酸检测能力验证计划"。利用甲型H1N1流感病毒(2009)和经典H1N1猪流感病毒核酸标准物质制备6组能力验证阳性样品,经实验室检测分析,所制备的样品均匀性和稳定性均达到中国合格评定国家认可委员会对能力验证样品的要求。将6组阳性样品和1组阴性样品编号后下发54家参试实验室,共有50家实验室报送了有效数据,其中完全达到能力验证要求的实验室共34家,满意率达68%,其余16家为不满意实验室,包括8家实验室检测经典H1N1猪流感病毒满意,但甲型H1N1流感病毒(2009)特异性检测不满意。本次能力验证为整体提升我国甲型H1N1流感病毒的检测水平和评估各级实验室检测能力具有重要意义。

摘要：为建立同时检测口蹄疫病毒(FMDV)和牛肠道病毒(BEV)的双重RT-PCR方法,本研究根据已发表的FMDV和BEV基因的5'UTR保守区域,分别设计、筛选出一对特异性引物建立了双重RT-PCR方法,并优化了反应体系和条件。采用该方法检测其他几种牛相关病毒结果均为阴性,表明特异性良好。该方法对FMDV的最低检出限为8 TCID50/0.1 mL,对BEV的最低检出限为2 TCID50/0.1 mL,表明其具有良好的敏感性。采用该方法检测了852份临床样品,并与病毒分离方法比较,结果两种方法检测结果完全一致。本研究首次建立了同时检测FMDV和BEV的双重RT-PCR快速检测方法,该方法的建立为FMDV和BEV的检测提供了一种技术手段。

摘要：本研究是为了了解被调查人员对科技成果转化影响因素认知及其重视程度,为科技成果转化决策和实施奠定数据和信息基础。研究步骤为确定调查对象、抽样样本容量、确定调查问卷类型、设计问卷题项、收集整理数据、选择分析方法,采用统计分析软件(SPSS19.0)进行定量分析。使用问卷调查方法构建了对科技成果转化影响因素认知的分析框架。运用研究成果,制定了科技成果管理办法和实施细则。

摘要：为建立快速、准确地检测牛肠道病毒(BEV)及对北京周边地区牛群中BEV感染情况进行检测,本研究通过设计合成扩增BEV 5'UTR序列的引物及探针建立了检测BEV的通用型TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测方法并对反应条件进行了优化。该方法对BEV的最小检测量为0.1 TCID50/0.1 mL,敏感性比病毒分离法高10倍。而且该方法对其他牛相关病毒均无交叉反应。用3批试剂对3个稀释度的BEV培养物进行批内和批间重复性试验,其变异系数均小于1.1%,表明该方法具有良好的重复性。采用该方法对北京周边地区牛群采集的852份临床样品进行检测,并与病毒分离方法比较,两种方法检测结果完全一致。因此,本研究所建立的BEVTaqMan RT-PCR检测方法具有快速、准确、特异性强、敏感性高、重复性好的优点,为国内BEV的检测提供了有力的技术支持。本研究首次通过病毒核酸检测证明了我国部分地区的牛群中存在BEV感染。

摘要：鲑鱼甲病毒(Salmonid alphavirus,SAV)是鲑鱼胰脏病(Salmon pancreas disease,PD)病原,主要感染鲑科鱼类,目前在我国尚未分离到。为提高出入境鱼类中的SAV检测效率,根据SAV nsP1基因片段,设计3对特异性引物,建立了检测SAV的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。该方法使用25μL反应体系,经优化后的反应温度为65℃,反应时间为1 h,检测限可达10个拷贝数的病毒核酸,且不与传染性鲑鱼贫血病毒、病毒性出血性败血症病毒、传染性造血器官坏死病毒、病毒性神经坏死病病毒、草鱼呼肠孤病毒和鲤春病毒血症病毒的RNA产生交叉反应。在反应体系中加入染料后,反应结果肉眼直接可见。本研究建立的RTLAMP方法是一种特异性强、方便快捷的SAV检测方法,适合SAV的现场初筛和核酸检测。

摘要：由葡萄斑点病毒(Grapevine fleck virus,GFkV)引起的葡萄斑点病是世界上普遍发生的葡萄病毒病害。采用RT-PCR从表现明显斑点症状的葡萄样品维多利亚、无核白鸡心和胜宝叶片中检测到预期大小为179 bp的片段。对这些扩增片段进行克隆、序列测定及比对分析,结果表明,来源于这3个样品的GFkV序列间相似性为97.2%～98.9%,与NCBI已登录GFkV序列AJ309022的相似性为96.6%～97.8%。在此基础上,采用纳米磁珠法从以上3个葡萄品种的休眠枝条韧皮部与休眠芽中提取病毒RNA,根据上述已测序列设计合成了TaqMan探针与引物,初步建立了GFkV的MNP Real time-RT-PCR检测体系。结果表明,无核白鸡心中GFkV含量最高,且该病毒在休眠芽中的含量比韧皮部约高出10倍,通过MNP Real time-RT-PCR最低可从100μg葡萄组织中检测到GFkV。