摘要：目的 将环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）方法应用于食品中单核细胞增生李斯特菌的检验,并在检测方法特异性、灵敏度等方面与实时荧光PCR和传统方法进行比较.方法 针对单核细胞增生李斯特菌hly溶血素基因设计LAMP引物,应用LAMP方法对88株单核细胞增生李斯特菌、1株单核细胞增生李斯特菌参考菌株ATCC 15313、33株非目标菌进行检测；并进行食品基质添加实验及对样品进行检测,同时应用实时荧光PCR方法和ISO 11290-1方法进行平行检测.对3种检测方法的特异性、灵敏度、检测低限及实际样品检验的结果进行比较.结果 LAMP和荧光PCR对89株单核细胞增生李斯特菌的检验结果均为阳性（100％,89/89）,33株非目标菌的检测结果均为阴性（100％,33/33）.LAMP方法的检测灵敏度为2×102 CFU/ml,与实时荧光PCR方法（2×102 CFU/ml）相同,且优于ISO 11290-1方法（2×104 CFU/ml）.食品基质添加实验结果显示,3种检测方法的检测低限均为3 CFU/25 g样品.实际食品样品检测结果显示,3种方法单核细胞增生李斯特菌的检出率均为4％（2/45）.结论 本研究建立的单核细胞增生李斯特菌LAMP检测方法具有良好的特异性,检测灵敏度与实时荧光PCR相当,适用于单核细胞增生李斯特菌的快速筛选.

摘要：为明确毒莴苣EST序列中SSR的特点,并开发EST-SSR分子标记用于毒莴苣及其近似种的分类鉴定及遗传多样性分析,以筛选的7 438条毒莴苣EST序列为基础,利用SSRIT软件结合人工搜索查找SSR位点,并采用Primer Premier 5.0软件设计EST-SSR引物,以毒莴苣及其近似种为材料对所合成引物进行多态性检测,应用UPGMA法构建11个毒莴苣及其近似种的系统发育树。结果表明,共搜索到SSR位点1 465个,发现重复基元598种,其中二、三、六核苷酸重复是主要的重复类型。合成的24对引物中有9对表现出多态性,利用这9对EST-SSR引物分析毒莴苣等11份材料的亲缘关系,其相似性系数在0.432~1.000之间;于0.513处可被划分为3大类：Ⅰ类包括翅果菊和北山莴苣,Ⅱ类只有宿根莴苣1种,Ⅲ类包括毒莴苣和莴苣。

摘要：为建立一种快速、灵敏、特异的定量检测啤酒花矮化类病毒(Hop stunt viroid,HSVd)的实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)方法,设计了2对引物及特异探针,体外转录制备了RNA标准品,绘制标准曲线,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行评估。建立的定量标准曲线C t值与模板拷贝数对数之间呈良好的线性关系,相关系数R2为0.9988,扩增效率为95%;该方法的特异性好,与啤酒花潜隐类病毒(HLVd)、葡萄黄斑类病毒1(GYSVd-1)、葡萄黄斑类病毒2(GYSVd-2)和桃潜隐花叶类病毒(PLMVd)均无交叉反应;灵敏度为1.0×102拷贝/μL,比普通RT-PCR高10倍;试验内及试验间重复性试验的变异系数均小于3%。研究表明该方法适用于实际样品中HSVd的快速定量检测。

摘要：为了进一步研究风力灭火机的灭火性能,并防止灭完火的区域死灰复燃,在风筒进口增加了超细干粉灭火剂进行喷射灭火。喷射式风力灭火机的性能主要体现在出口风速、射程和喷射的稳定性上,而后两者分别主要由灭火剂颗粒的喷出的速度和风筒内滞留灭火剂的量决定的。该文采用6MF-30型风力灭火机使用的风筒为原型验证仿真模型的可靠性,采用CFD-DEM耦合的方法对喷射式风力灭火机的工作过程进行仿真模拟。以风筒收缩角、灭火剂添加位置、风筒长度作为因素,按照二次正交旋转组合设计进行仿真试验,进行显著性检验和方差分析,建立了回归方程。结果表明:3个因素相对颗粒喷出速度和风筒内颗粒数都具有显著相关性,显著水平分别为P<0.0001和P<0.001,而这3个参考因素与出口风速无明显相关性;3个参考因素中风筒长度是对机械性能影响最大的因素。采用响应面法、加权法综合对最佳参数组寻优,发现喷射式风力灭火机收缩角取20°,灭火剂添加孔道距进风口140 mm,风筒长度700 mm时喷射式灭火机性能得以提高。采用该参数组的虚拟试验结果显示,颗粒喷出速度提高至41.24 m/s,同时风筒内颗粒数降低至209个。实体样机验证试验表明:采用该参数组设计的风筒可以有效提高喷射式风力灭火机的喷粉射程2.15 m,缩短灭火时间1.7 s且无复燃。该研究为风力灭火机风筒优化模拟提供了参考。

摘要：根据水稻细菌性谷枯病ITS和gyrB基因,设计两对特异性PCR检测引物,建立了水稻细菌性谷枯病菌的双重PCR检测方法。用该方法对水稻细菌性谷枯病菌和其它植物源性细菌进行双重PCR扩增及灵敏度测试,并对采自不同地区的水稻样本进行水稻细菌性谷枯病菌的检测。结果显示,双重PCR方法能特异性地检测出8株水稻细菌性谷枯病菌,可从含水稻细菌性谷枯病菌浓度为102cfu/mL的菌液中检测出该病菌;采用该方法对我国不同地区的水稻材料进行检测,并未发现水稻细菌性谷枯病菌。

摘要：本研究发现对奶粉中低含量阴沟肠杆菌的检测,可以采用灭菌蒸馏水36℃增菌24h后,选用自主设计的阴沟肠杆菌分离琼脂进行选择性分离,再用赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶这一组生化实验进行进一步筛选,最后选择ID32E或VITEK GNI+进行生化鉴定。

摘要：财政专项资金绩效评估是一个理论性和实务性都很强的工作,也是预算绩效管理的重点和难点,本文从进行绩效评估的关注点出发,研究绩效评估模型,设计评估指标,并通过质检系统大通关专项资金绩效评估实例证明体系的合理性和科学性,最后提出结果应用的几种方法。

摘要：目的为建立肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）的DPO-PCR快速检测方法。方法本研究以EIECipaH基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸（DPO）引物,建立了EIEC DPO-PCR检测方法。结果退火温度范围在47℃~67℃内都能有效地扩增出目的基因,表明该检测方法对退火温度不敏感;该DPO引物仅与EIEC的扩增反应呈阳性,而与其他菌株无非特异性扩增反应,表明该方法特异性强;该方法的灵敏度为1.17×102 cfu/mL。利用该检测方法对采集的230份样品进行检测,共计检出3份EIEC阳性样品,与国标法（GB 4789.6-2003）检测结果一致,显示了良好的实用性。结论该DPO-PCR方法设计简单、特异性强,具有良好的实用性。

摘要：为了达到进境原木检疫除害处理安全、环保、高效的目的,本研究在日照岚山港进境木材检疫处理区设计建造了一种大型原木检疫熏蒸库,该熏蒸库包括熏蒸库体、密闭顶棚、密闭门、支架及多个支撑柱,密闭顶棚通过涡轮升降机组实现升降,密闭门采用整体斜拉开启方式,靠密闭门的自重压实密封条,实现对熏蒸库的密闭,具有良好的密封效果。压力测试法测试结果表明,熏蒸库内压力由200 Pa下降至100 Pa的衰减时间大于30 s,熏蒸库密闭性能良好。

摘要：根据莴苣花叶病毒(Lettuce mosic virus,LMV)的外壳蛋白保守位点设计引物,并构建片段大小为428 bp的内标质粒,利用引物和内标质粒对可侵染莴苣的5种病毒和与LMV同属的3种病毒进行反转录重组酶聚合酶扩增技术(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)检测。结果表明,该方法特异性强,可从阳性样品RNA中扩增出大小为272 bp的目标片段,而其他7种病毒RNA、空白对照以及阴性对照均未扩增出条带;灵敏度高,能检测出稀释100倍的LMV RNA,与常规RT-PCR灵敏度一致;速度快,整个扩增过程只需要40 min,不需要特殊设备。本研究建立的RT-RPA检测方法可应用于LMV的快速检测。