摘要：携带污染是生化检测误差的明确来源之一,其带来的错误结果可能给患者医疗结局带来不良影响。几十年来,自动生化分析仪制造商通过改进系统设计、更新材料,不断尝试降低携带污染,但是挑战依然存在。中华医学会检验医学分会生化学组组织专家,制定了《生化分析仪携带污染的分析评估及处理方法专家共识》,总结了生化分析仪携带污染的来源和特点,提供了携带污染的评估程序和方法,并重点介绍了常用的携带污染的解决方案,用以指导实验室工作人员正确识别、评估携带污染,有效降低由于携带污染带来的结果偏差对患者诊疗的影响。

摘要：目的　建立复合PCR用于快速检测白念珠菌和非白念珠菌医学真菌。方法　设计白念珠菌特异引物用于扩增白念珠菌DNA ;11种医学真菌 (白念珠菌、热带念珠菌、假热带念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、解脂念珠菌、克鲁斯念珠菌、季也蒙念珠菌、新型隐球菌、烟曲霉和黄曲霉 )的DNA用医学真菌通用引物扩增 ;建立由上述两组引物组成的复合PCR ,在一次试验中区分白念珠菌和非白念珠菌真菌。结果　白念珠菌引物只特异扩增白念珠菌DNA ,扩增产物为 779bp ;通用引物扩增上述 11种医学真菌DNA ,扩增产物为 2 6 0bp左右。 12种常见致病细菌、乙肝病毒及人血液白细胞和组织细胞DNA均不被这两种引物扩增。复合PCR扩增白念珠菌DNA产生两条DNA片段 ,其长度分别为 779bp和 2 5 8bp ;非白念珠菌DNA只产生一条 2 6 0bp左右的片段。结论　复合PCR可在一次试验中检出白念珠菌和非白念珠菌 ,因此 ,复合PCR对于医学真菌的检测是一种较快速、敏感和特异的方法。

摘要：目的用计算机辅助分子设计技术,设计河豚毒素(TTX)小分子拮抗肽,分别用免疫学方法和动物实验进行验证。方法利用计算机辅助分子设计技术,对TTX的空间结构进行了优化;用分子对接确定了TTX关键位点;用分子模建设计了3个能与TTX结合的小分子拮抗肽;分别用竞争ELISA进行免疫学筛选;用动物实验进行中和活性测定。结果成功设计了3个针对TTX的小分子拮抗肽并进行了多肽合成,用竞争ELISA筛选到针对TTX的小分子拮抗肽P2,拮抗肽P2浓度与TTX的结合能力成正比。动物实验中,针对TTX的小分子拮抗肽P2对注射2.5倍半数致死剂量TTX昆明小鼠的保护率为25%,起到了一定解毒效果。结论获得了能与TTX特异性结合的中和性小分子拮抗肽,TTX浓度达到4.05μg/mL(LD50的2.5倍),TTX拮抗肽P2对实验组小鼠的保护率为25%。

摘要：目的将逆转录(RT)、多重交叉置换扩增(MCDA)以及基于纳米颗粒的测流生物传感器(LFB)结合在一起,建立一种快速检测H5N1禽流感病毒的新方法。方法根据H5N1禽流感病毒中血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的特异性基因序列分别设计一套MCDA引物组。实现在一个反应体系中对目的基因HA和NA的逆转录和MCDA扩增,最终检测结果通过LFB显示。此方法被命名为H5N1-RT-MCDA-LFB。优化H5N1-RT-MCDA-LFB方法的最佳反应条件,同时评价此方法的敏感度和特异性。结果H5N1-RT-MCDA-LFB方法在恒温65℃下孵育40 min便可实现良好的扩增效果。该方法的检测下限为100 fg/反应,检测敏感度比实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)(检测下限为10 pg/反应)高100倍。该方法在对除H5N1禽流感病毒以外的其他28种常见病毒、支原体、衣原体、细菌和真菌的检测中均为阴性。除此之外,H5N1-RT-MCDA-LFB方法在模拟临床样本中得到较好的验证,其检测下限为1×10^(2)拷贝/ml。结论H5N1-RT-MCDA-LFB方法具有简便、快速、敏感度和特异性高等特点,是一种有效检测H5N1型禽流感病毒的分子诊断技术。

摘要：目的研究北京大学第三医院近年来血流感染的微生物学和流行病学特征。方法回顾性分析2005年1月1日至2007年12月31日的全部血液培养检查中培养阳性的患者的临床资料和微生物学资料。成组设计资料构成比的差异比较采用z。检验。结果3年中共对3795例患者和5138个病程进行了血液普通细菌培养，标本共6488套。按有氧瓶统计，阳性率为9．9％。住院患者3年平均血流感染发生率为40．8／1万。共检出导致感染的菌株593株，其中医院内获得感染病原483株，占81．5％。全部菌株和院内感染菌株构成比：革兰阳性菌分别占38．5％和42．0％，革兰阴性菌分别占54．7％和49．9％，真菌（全部是假丝酵母菌）分别占6．8％和8．1％。全部菌株中，大肠埃希菌占25．3％，血浆凝固酶阴性葡萄球菌占18．8％，金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌分别占7．1％和7．4％，肠球菌属占8．3％，铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌分别占3．2％和2．2％，厌氧菌占0．7％。复数菌感染共10例，占全部感染的1．7％。院内感染中链球菌（χ^2=9．240，P=0．002）和大肠埃希菌（χ^2=23．609，P〈0．01）明显多见于非ICU病房，而假丝酵母菌则明显多见于ICU病房（χ^2=5．498，p=0．019）。人院至标本留取时间差为15．1（大肠埃希菌）～29．7d（鲍曼不动杆菌）。3年中主要菌株的耐药性无明显变化。结论北京大学第三医院住院患者血流感染发生率为40．8／1万。致病菌株以革兰阴性菌为主。

摘要：目的:从自然界中分离鉴定产 3α 羟类固醇脱氢酶(3α hydroxysteroiddehydrogenase, 3α HSD)的睾丸酮丛毛单胞菌,并在大肠杆菌(***.)中克隆表达 3α HSD。方法:将池塘泥浆样品接种到以雄酮为唯一碳源的培养基中,对分离到的菌株根据形态学和生理生化特征进行初步鉴定。为进一步鉴定该菌株,根据睾丸酮丛毛单胞菌中的 3α HSD的基因设计引物,PCR扩增细菌基因组DNA,将扩增片段插入到载体pET15b中,构建重组质粒pET15b,并在***. BL21 (DE3 )pLysS中进行诱导表达,对表达得到的蛋白进行鉴定并测定其酶活力。结果:一系列生化反应和培养特征证实,该菌与睾丸酮丛毛单胞菌的符合率为 85%,最适生长pH值为 7. 0,最佳生长温度为 30℃。在***. BL21 (DE3 )pLysS中经诱导表达得到了相对分子质量约为 29×103具有酶活性的融合蛋白,可催化雄酮(3α 羟类固醇)脱氢。结论:从池塘泥浆中分离到一株产 3α HSD的睾丸酮丛毛单胞菌,并在***.中表达得到了具有酶活性的融合 3α HSD。这为利用金属螯和亲和层析纯化融合 3α HSD,并进一步建立以其为工具酶的血清总胆汁酸酶循环测定方法奠定了基础。

摘要：目的　了解慢性髓细胞白血病(CML)基因表达谱的规律,并对在CML中特异性高表达的一个新基因进行克隆、分析 与鉴定。方法　应用基因表达谱芯片技术,比较CML患者和正常人外周血单个核细胞(PBMC)基因的表达差异。检索核苷酸序列 数据库(GenBank)和蛋白质一级结构序列数据库(SwissProt),对差异表达的基因进行生物信息学分析,与已知功能基因序列进行同源 性比较。根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,确定新基因序列,据此设计并合成该基 因序列的特异性引物,提取CMLPBMC的总RNA,以RT-PCR技术扩增获得该新基因的全长序列,并对克隆的基因及其编码产物的 序列进行分析。结果　在CML患者PBMC中克隆一个新的基因,经测序证实,其编码序列全长为1872个核苷酸(nt),编码产物由 624个氨基酸残基(aa)组成,命名为CMLAP。在GenBank中注册,注册号为AY762229。结论　基因表达谱芯片技术与生物信息学 技术相结合,发现并鉴定、克隆了在CML中高表达的新基因CMLAP,为进一步研究CML发生发展的分子生物学机制奠定基础。

摘要：目的　探讨整合子介导的耐药机制在产超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)大肠埃希菌多重耐药性中的作用。方法　设计整合子特异引物 ,采用聚合酶链反应 (PCR)技术检测耐药菌中的整合子基因 ,并应用PCR定位 (mapping)技术和DNA测序研究整合子内携带的耐药基因。 结果　 4 4 4 %的产ESBLs的大肠埃希菌整合子检测阳性 ,发现 5 5 0 ,130 0 ,180 0bp和 2 6 0 0bp等 4种不同大小的整合子结构 ,其中 6 6 6 %的整合子大于 5 5 0bp。整合子中分别携带二氢叶酸还原酶、核苷转移酶和β内酰胺酶等耐药基因。结论　产ESBLs的大肠埃希菌中的整合子机制参与了多重耐药的形成 ,因整合子可以携带多种耐药基因 ,容易引起多重耐药的水平传播 ,应引起高度的重视。

摘要：嵌合抗原受体(CAR)-T细胞免疫治疗是近年来肿瘤治疗领域最瞩目的成就之一,流式细胞术(FCM)在CAR-T细胞的设计构建、患者入组、CAR-T细胞产品的性能检测、治疗后疗效评价、免疫功能评价、复发机制研究与后续治疗方案的选择等各个环节都起到重要的作用。为了进一步推广与规范FCM在CAR-T细胞免疫治疗相关实验室检测中的应用,《中华检验医学杂志》组织了“流式细胞分析在CAR-T细胞免疫治疗中的应用和研究进展”专题报道,多篇文章分别涵盖FCM在CAR-T细胞免疫治疗中应用的多个方面,包括专家共识、继续教育、专家述评、微小残留病检测、免疫功能和细胞因子检测等,以期促进FCM在CAR-T细胞免疫治疗中应用的规范化,为临床应用提供更大的帮助。

摘要：【背景】传统的细菌培养为下呼吸道感染诊断的金标准,但其检验周期长且敏感性低。环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术方法简单、检测快速,可应用于临床呼吸道感染常见细菌的快速检测。【目的】评估环介导恒温扩增技术对呼吸道感染常见7种细菌的检测能力。【方法】设计呼吸道感染常见的7种病原菌肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,SP)、卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis,MC)和流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae,HI)的环介导恒温扩增特异性引物,建立检测7种病原菌的LAMP方法。通过梯度稀释的方法检测敏感性,交叉反应实验检测特异性。回顾性分析2019年11月–2021年3月北京大学人民医院的240例疑似下呼吸道感染患者的呼吸道标本(痰和肺泡灌洗液)。利用自动化核酸提取仪提取DNA后,利用特异性引物进行环介导恒温扩增检测7种病原菌。检测结果与常规细菌培养结果进行比较,分析环介导恒温扩增的灵敏度和特异性,评估优化不同菌种的阳性判断值(Ct值),探讨环介导恒温扩增技术在临床上的应用价值。【结果】LAMP法检测结果与模板浓度具有较好的线性相关性,特异性实验结果表明LAMP体系的特异性较好,与其他菌株无交叉反应。共检测了218例痰和22例肺泡灌洗液样本,其中178例样本培养出7种目标菌,采用环介导恒温扩增法检测出7种目标菌的样本共176例。从提取核酸到环介导恒温扩增结果检出的平均检测时间为2–3 h,可同时检测多个样本。7种常见呼吸道病原菌流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、卡他莫拉菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和肺炎链球菌的最佳Ct值分别为18.5、20.0、20.0、15.0、25.0、19.0和18.0。检测灵敏度和特异性分别为肺炎克雷伯菌90.7%和94.1%,鲍曼不动杆菌84.0%和94.2%,铜绿假单胞菌90.8%和89.1%,卡他莫拉菌75.0%和99.2%,金黄色葡萄球菌81.8%和97.4%,流感嗜血杆菌75.0%和90.3%,肺炎链球菌33.3%和95.4%。肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌的环介导恒温扩增技术检测结果与痰培养半定量检测结果具有较好的符合率,R2值分别是0.8557、0.8044和0.9243。【结论】环介导恒温扩增技术操作简单、检测快速。与培养方法相比,环介导恒温扩增检测具有较高的特异性(89.1%–99.2%),其中针对肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的检测具有较高灵敏度(81.8%−90.8%),可用于临床呼吸道感染病原菌的快速诊断。环介导恒温扩增技术的检测结果与痰培养半定量的检测结果符合率较好。流感嗜血杆菌和肺炎链球菌由于培养阳性标本量较少,有待进一步评估。