摘要：目的研究雌激素雌二醇的共晶现象,筛选其共晶化合物并进行初步评价,以改善药物的理化性质。方法经过结构设计选取能与雌二醇形成共晶体的配合物;通过蒸发结晶法、降温析晶法、研磨法、混悬液法等制备新共晶;共晶的鉴别表征采用单晶X射线衍射分析法、粉末X射线衍射分析法(PXRD)、热重-差示扫描量热法(TG-DSC)、红外光谱法等;并对共晶样品的稳定性、溶解性进行分析。结果用蒸发结晶方法获得雌二醇-尿素共晶(共晶Ⅰ),雌二醇-乙酰胺共晶(共晶Ⅱ)并制备成单晶,表征分析结果显示PXRD、磁共振(NMR)、TG-DSC、熔点法均可表征共晶和药物活性成分(API)以及两种共晶之间的不同,单晶X射线衍射结果显示两种共晶分子比例分别为1:1,4:4。两种共晶在高温、高湿、光照条件下稳定。两种共晶在6种溶出介质中溶出行为一致。在pH值1.2盐酸缓冲溶液中,共晶Ⅱ的累计溶出度比原料药的大近2倍,比共晶Ⅰ大1.2倍,且共晶Ⅱ的溶出速率高于共晶Ⅰ。结论以雌二醇为API进行共晶筛选,共获得共晶Ⅰ和共晶Ⅱ两种药物共晶,其中共晶Ⅱ为首次发现的雌二醇新的共晶。新获得的共晶样品与雌二醇原料药晶型比较同样稳定,但溶出速率增加。共晶Ⅱ为优势晶型。

摘要：临床检验旨在提供准确的检验结果以支持临床决策和患者医疗。实验室内统计质量控制(SQC)可帮助实验室检出检测系统的不稳定性,防止实验室报告有医学重要误差的患者检验结果,对保证检验结果的质量以及患者安全至关重要。设计室内SQC策略的传统方法是基于质控程序的误差检出概率(Ped)和假失控概率(Pfr)性能特征。随着风险管理概念的引入,设计室内SQC策略开始逐渐基于Parvin提出的患者风险参数MaxE(Nuf),即存在未检出的失控状态时,最终报告的不可接受患者结果的数量相较于在控状态下的最大增加量。MaxE(Nuf)与SQC频率和患者风险均相关,对于优化SQC频率以及设计基于风险的SQC策略具有非常重要的意义。

摘要：目的探讨我国当前检验后阶段的质量指标及其质量规范,为临床实验室建立QI体系提供参考。方法采用卫生部临床检验中心和北京科临易检信息技术有限公司共同设计开发的网络平台,向参加中心2015年全国临床检验专业质量指标调查的所有实验室发放调查表按照不同专业和不同医院等级进行分组,采用Kolmogorov-Smirnov检验判断数据正态性,Kruskal-Wallis检验和Mann-Whitney检验分别进行多组和两组间的比较。结果分别有5 229家、4 643家和4 421家实验室上报了检验报告不正确率、危急值通报率和危急值通报及时率的相关数据。各指标均有超过95%的实验室、σ水平≥3σ和≥6σ的实验室则分别占47.87%、91.17%、85.95%。各指标在不同专业之间存在显著差异;除危急值通报率以外,其余2项指标在不同等级医院之间也存在显著差异。结论我国临床实验室检验后阶段3项QI的差错率相对较低,多数实验室危急值通报率和危急值通报及时率达到了100%。临床实验室应基于此调查,进一步监测3项指标,同时正确有效地识别检验后阶段的薄弱环节,建立更多合适的QI并基于当前技术水平确定相应的质量规范。

摘要：背景：MRI、CT对骨组织形态学变化评估为客观金标准。目的；基于MRI、CT不同位像影像学客观依据分析双侧股骨头坏死塌陷的危险因素。设计、时间及地点：自身对照，分类汇总分析，试验于2003-04／2007-06在北京协和医学院研究生院完成。参试者：选择本科收治的双侧股骨头坏死并有完整塌陷前，未塌陷资料的患者48例，男21例，年龄21～48岁：女27例，年龄23～46岁。均为激素性股骨头坏死。股骨头坏死按照国际骨循环学会（ARCO）标准分期，ARCOA-C4例，ARCOB-C4例，ARCOB-B12例，ARCOC-C28例。方法：对有单/双侧塌陷的双侧股骨头坏死的患者影像资料进行回顾性分析。根据早期MRI T1中低信号带的形态分为开放型和包含型。根据坏死灶的CT变化类型分为：a：坏死灶形成硬化带，并且在软骨下骨下为连续的硬化带；b：在软骨下骨下为不连续的硬化带：c：软骨下骨下硬化带形成不明显；d：没有明显硬化带形成，坏死灶呈均匀中密度影。主要观察指标：坏死灶大小、位置、MRI形态、CT形态及塌陷。结果：单侧塌陷43例（ARCOA-C4髋．ARCOB-C4髋．ARCOB-B12髋，ARCOC-C23髋），双侧塌陷5例（ARCOC-C10髋）。负重面外侧型（64髋）塌陷49髋（ⅡB12髋．ⅡC37髋）．负重面中央型（21髋）塌陷4髋（ⅡC4髋）负重面内侧型（11髋）无塌陷：早期MRI T1中低信号带的形态开放型塌陷51髋，闭合型塌陷2髋。CT示坏死灶形成硬化带，并且在软骨下骨下为连续的硬化带0／23（type-a）：有不连续硬化带形成但没有延伸到软骨下骨下者塌陷19／30髋（type-b）；CT有硬化带形成，并不连续延伸到软骨下骨下者塌陷28／37髋（type-c）：没有硬化带形成．病灶呈均匀中高密度影者塌陷6／6髋（type-d）。结论：以MRI、CT评估，坏死灶上负重面外侧型更易早塌陷；对于双侧股骨头坏死的病例，MRI显示相似的面积，T1低信号带包含型者，预后相对较好；CT显示软骨下骨均匀增厚或明显的“焊接”现象是延迟塌陷的因素：但是软骨下骨没有或有不均匀不连续性硬化是危险因素。

摘要：目的在大肠杆菌中表达小鼠组氨酰tRNA合成酶（HARS）与麦芽糖结合蛋白（MBP）融合基因，通过亲和层析纯化以获得具有抗原特异性的重组蛋白。方法提取C57BL／6小鼠肌肉组织总RNA，反转录为cDNA，利用软件设计一对特异性引物，扩增HARS基因上游591对碱基序列。对扩增产物和载体质粒pMALc-5e分别进行双酶切，再用T4连接酶连接得到重组质粒。将其转化大肠杆菌感受态细胞，挑取单克隆培养并鉴定质粒序列。异丙基-β-D硫化吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导融合蛋白表达后亲和层析纯化，聚丙烯酰胺凝胶电泳对融合蛋白进行相对分子质量粗鉴定，蛋白印迹法鉴定抗原特异性。结果重组HARS—MBP融合蛋白基因在大肠杆菌胞质中高效表达，亲和层析纯化后的融合蛋白与预测相对分子质量66000相符，与抗体具有良好的特异结合能力。结论小鼠HARS-MBP融合基因能够在大肠杆菌中稳定高效地表达，表达的蛋白具有良好的抗原特异性，为后续炎性肌病的研究提供了基础。

摘要：近年来, CRISPR/Cas9技术被迅速应用于生物学研究的各个领域。miRNA-125a已被证实与生殖密切相关,研究者在自然流产的患者中发现了异常的miRNA-125a。该研究利用CRISPR/Cas9技术在人绒毛膜滋养层细胞HTR8-S/Vneo中对miRNA-125a进行了定点编辑。对于定点敲除,我们首先在pX458表达载体的基础上额外引入一组启动子和sgRNA骨架序列用于片段敲除,此后分别设计用于单点敲除和片段敲除的sgRNA进行表达载体的构建,表达载体转染HTR8细胞后通过流式分选和T7EI酶切鉴定阳性单克隆;对于定点敲入,我们在体外构建供体载体,与CRISPR表达载体共转染HTR8细胞,通过流式分选和PCR鉴定阳性单克隆。DNA测序结果显示,敲除及敲入阳性单克隆细胞系在指定区域的碱基序列发生了改变; RT-qPCR结果显示,阳性单克隆细胞系中mi RNA-125a-5p和mi RNA-125a-3p的表达量较野生型也发生了相应变化;体外实验还显示, miRNA-125a有抑制HTR8-S/Vneo细胞系增殖及迁移的功能。研究证实, CRISPR/Cas9技术在细胞系中编辑mi RNAs是有效可行的,且对于miRNA-125a的定点敲除,片段敲除的效果要好于单点敲除。

摘要：目的探讨增龄对冠心病、2型糖尿病、冠心病合并2型糖尿病的患病风险的影响。方法本研究采用了病例对照设计和单病例设计，比较不同年龄组老年人与中年组增龄增加上述疾病患病风险的影响。结果增龄增加了2型糖尿病和冠心病合并2型糖尿病的患病风险（P〈0.05）。与2型糖尿病〈60岁组比较，2型糖尿病≥70岁组（OR＝3.80，95%CI：2.39～6.04，P＝0.000），患病风险增高；与冠心病合并2型糖尿病〈60岁组比较，冠心病合并2型糖尿病60～69岁（OR＝4.14，95%CI：2.60～6.60，P＝0.000）、≥70岁组（OR＝11.50，95%CI：7.18～18.42，P＝0.000）患病风险增高，其中冠心病合并2型糖尿病患者随年龄增长发病风险增加了2.78倍。结论老年人增龄对冠心病、2型糖尿病、冠心病合并2型糖尿病患者患病风险影响和临床特点具有重要的临床意义。

摘要：背景体检儿童中甲状腺B超发现的多囊性甲状腺疾病(PCTD)检出率较高,目前有关儿童PCTD的发生率及相关研究报道不多,且多发囊肿的随访值得重视。目的对生长发育评估需要干预的儿童行甲状腺B超筛查PCTD。设计横断面调查。方法纳入生长发育门诊主诉或为身高偏矮、或为身高生长速度减慢、或为青春期发育评估,行甲状腺功能检查FT3、FT4正常和3项抗体(Tg⁃Ab、TR⁃Ab和TPO⁃Ab)检测阴性,临床评估后需要采取药物干预且行甲状腺B超筛查的儿童,采集就诊和随访当天病历和超声结果,以B超图像观察分析指标分为正常组、PCTD组(囊肿≥4个,甲状腺自身抗体阴性,排除甲状腺实质网格状回声和甲状腺先天性畸形与异常)和其他组(甲状腺实性结节、多发囊肿伴实性结节和囊肿数量27.0%)。PCTD组甲状腺肿大11例(7.1%),正常组甲状腺肿大14例(4.6%)。PCTD组囊肿均为规则边缘,弥漫分布于双叶及峡部28例,双叶113例,右叶17例,左叶3例;双叶+左叶144例,3例≥5 mm;双叶+右叶158例,4例≥5 mm;74.5%甲状腺实质回声均匀;囊肿内可见点状强回声伴彗星尾征138例(85.7%)。正常组14例和PCTD组9例TSH>5 mIU·L^(-1)处于亚临床甲状腺功能减退。结论儿童PCTD并不少见,女童检出率高于男童,7岁以后儿童的检出率明显升高。PCTD儿童的囊肿多位于双叶,囊肿大小多<5 mm,囊内可见点状强回声,伴彗星尾征。

摘要：目的探讨小分子干扰RNA（siRNA）对人肝癌细胞株MHCC-97HSurvivin基因表达及其增殖和凋亡的影响。方法设计、合成针对Survivin基因序列特异性siRNA，用脂质体包裹转染人肝癌细胞株MHCC-97H，实验分为3组：SurvivinsiRNA转染组（Si-survivin组），无关siRNA转染组（NC组）和无转染组（正常对照组）。采用反转录-聚合酶链反应、Westernblot技术检测SurvivinmRNA及蛋白表达；四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞增殖情况；分别以终浓度为12．5、25．0、50．0nmol／L的siRNA作用于细胞后24h，采用流式细胞仪AnnexinV／PI双染法检测细胞凋亡。结果转染后48h，Si—survivin组、NC组、正常对照组SurvivinmRNA表达水平分别为0．55±0．16、0．85±0．28、0．93±0．40，组间比较差异有统计学意义（F=414，P〈0．01）；Si—survivin组最低，与NC组、正常对照组比较差异均有统计学意义（t=-20．56、-28．37，P均〈0．001）。siRNA转染48h后，Si—survivin组、NC组、正常对照组Survivin蛋白相对表达量分别为0．602±0．005、0．835±0．007、0．993±0．003，组间比较差异有统计学意义（F=238，P〈0．01）；Si—survivin组最低，与NC组、正常对照组比较差异均有统计学意义（t=-40．17、-66．03，P均〈0．001）。转染后72h和96h，Si—survivin组细胞抑制率[（19．5±3．6）％、（12．0±0．9）％]显著高于NC组[（3．6±0．9）％、（-1．3±6．1）％]，差异均有统计学意义（t=36．18、42．53，P均〈0．05）。不同浓度siRNA作用于细胞后24h，12．5、25．0、50．0nmol／LsiRNA组、NC组和正常对照组细胞凋亡率[分别为（22．64±2．54）％、（35．37±3．28）％、（53．28±4．35）％、（8．77±1．25）％、（9．72±1．37）％]比较，组间差异有统计学意义（F=35．93，P〈0．01），不同浓度siRNA间细胞凋亡率两两比较，差异有统计学意义（t=-29．73、-38．57，P均〈0．001）。结论Survivin特异性siRNA能抑制人肝癌细胞株MHCC-97HSurvivin基因表达，抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。

摘要：背景：有实验证实人和动物起源的胚胎干细胞或成体干细胞可分化为胰岛素分泌细胞，但其分泌胰岛素的功能及对实验性糖尿病的治疗价值尚需要验证。目的：观察从大鼠的胰腺组织分离纯化干细胞在体外将诱导分化胰岛素分泌细胞后胰岛素mRNA的表达、分泌胰岛素的能力及对1型糖尿病模型鼠的治疗作用。设计：随机对照观察。单位：中日友好医院临床医学研究所。材料：实验于2004-08／2007—12在北京中日友好医院临床医学研究所病理生理研究室完成。选用8—10周龄雄性SD大鼠及雌性裸鼠各10只，均购自北京维通利华实验动物技术有限公司。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。尼克酰胺、链脲菌素均为Sigma公司产品，nestin抗体为BD Biosciences产品。大鼠胰岛素放射免疫检测试剂盒购自Linco research。胰岛素抗体及胰高糖素抗体为Santa Cruz产品。方法：应用nestin结合的免疫磁珠从SD大鼠胰腺导管细胞中分离和纯化干细胞，经体外扩增及诱导分化形成胰岛素分泌细胞。①采用RT-PCR法检测细胞分化过程中胰岛素mRNA的表达。②将干细胞经诱导分化形成的胰岛进行冰冻切片，采用免疫荧光染色观察胰岛素及胰高糖素阳性细胞表达。③对干细胞分化胰岛的胰岛素释放功能进行评价，放射免疫法测定上清中胰岛素检测干细胞分化形成的胰岛分泌胰岛素的能力。④鼠按220mg／kg链脲菌素腹腔注射法制备为1型糖尿病模型，造模后随机摸球分为天然胰岛组及干细胞胰岛组，每组5只。将大鼠天然胰岛（SD大鼠分离）及干细胞分化形成的胰岛分别移植于糖尿病裸鼠左肾包膜下，观察移植后鼠尾静脉血糖变化。主要观察指标：①细胞分化过程胰岛素mRNA表达。②胰岛样结构中胰岛素及胰高糖素阳性细胞表达。③干细胞分化形成的胰岛分泌胰岛素情况。④移植后鼠尾静脉血糖变化。结果：①RT-PCR检测结果表明胰岛素mRNA的表达随诱导时间延长而明显升高。②免疫荧光染色结果显示胰岛结构的中间存在大量胰岛素阳性细胞，胰高糖素阳性细胞主要分布于胰岛样结构的周边。③干细胞分化的胰岛在高浓度葡萄糖刺激后明显缺乏快速相的胰岛素释放，而是表现细胞外上清中胰岛素浓度的缓慢升高。④天然胰岛组移植后3d使血糖降低到10mmol／L以下，至观察到60d仍维持在正常水平；干细胞胰岛在移植后8d使血糖降低至10mmol／L以下，且在移植35d后血糖逐渐升高并恢复到胰岛移植前的水平。结论：大鼠胰腺干细胞经体外扩增和诱导分化后可分化胰岛素分泌细胞，但对葡萄糖的刺激没有快速相的胰岛素分泌。将胰岛素分泌细胞移植到1型糖尿病模型裸鼠后可一定程度地改善糖代谢的紊乱。