摘要：目的观察半乳糖凝集素-3（galectin-3）表达与肝星状细胞增殖和凋亡的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）和Western blot检测大鼠肝星状细胞中galectin-3 mRNA和蛋白的表达；设计合成galectin-3小干扰片段，筛选有效片段构建质粒；转染大鼠肝星状细胞系rHSC-99，并设立对照组和空质粒转染组，RTPCR及Western blot检测RNA干扰后galectin-3的表达。活细胞计数法观察干扰后24、48、72h各组细胞增殖情况；Annexin-V／PI染色，流式细胞仪检测转染72h后各组细胞凋亡情况。组间比较用LSD法t检验进行统计学分析。结果rHSC-99细胞表达galectin-3；成功构建pGCsilencer U6／Neo／GFP／shRNA，并经测序验证正确。转染效率为40％～50％，RT-PCR结果显示：RNA干扰组galectin-3 mRNA表达量较对照组下降了52．4％（F=136．432，P〈0．01），Western blot显示RNA干扰组galectin-3蛋白表达量较对照组下降了69．2％（F=144．842，P〈0．01）。干扰后48h和72h时，galectin-3 RNA干扰组细胞增殖较对照组分别下降38．1％（F=4．425，P=0．010）和37．5％（F=4．415，P=0．018）；干扰72h时，galectin-3 RNA干扰组细胞凋亡率显著高于对照组：早期凋亡率增加155．2％，与对照组比较，F=27．588，P〈0．01；晚期凋亡率增加56．9％，与对照组比较，F=12．798，P〈0．01。结论rHSC-99细胞表达galecitn-3；RNA干扰rHSC-99细胞galectin-3的表达能抑制rHSC99的增殖并促进其凋亡。

摘要：目的：观察RNA干扰供体Lewis大鼠库普弗细胞（KC）B7分子表达对受体BN大鼠淋巴细胞增殖和生成IL-2的影响．方法：分离培养供体Lewis大鼠KC，设计大鼠B7分子的干扰片段，构建并鉴定含B7干扰片段的RNA干扰载体Psilencer 3．1H1-Neo-B7，将RNA干扰载体转染供体大鼠的KC，转染后采用RT-PCR方法检测KC上B7分子表达的变化．将转染后的KC分为3组，对照组（A）；空载体组（B）；RNA干扰B7表达组（C）．分离培养受体BN大鼠的淋巴细胞，将以上各组细胞分别与BN大鼠的淋巴细胞进行共培养，采用MTT法检测各组淋巴细胞的增殖情况．采用ELISA方法检测各组培养上清中IL-2的含量．结果：分离培养的供体Lewis大鼠KC得率为5×10^7，活率大于98％．构建的RNA干扰载体经酶切和测序鉴定正确．RNA干扰KC后其B7的表达降低了22％（P〈0．01）．将干扰B7表达的KC与BN大鼠的淋巴细胞进行共培养，与对照组相比，受体BN大鼠的淋巴细胞增殖降低了49％（P〈0．01），细胞培养上清中IL-2的分泌量下降了67％（P〈0．01）．结论：RNA干扰供体Lewis大鼠KC B7分子的表达可明显抑制受体BN大鼠淋巴细胞的增殖和IL-2的产生．

摘要：目的尝试利用质谱技术对肝癌细胞表面自然呈递的MAGE3表位进行检测和分析。方法肝癌细胞和肝细胞取自同1名男性肝癌患者,弱酸洗涤法分离肝癌细胞和癌旁无瘤肝细胞表面所有肽段;利用表位预测法挑选出HLAA2限制的MAGE3理论侯选肽;检测MAGE3mRNA的表达;肽混合物进行高压液相纯化分离和差异比较;筛选出含有肿瘤特异肽的组分进行串联质谱检定和定量分析;最后检测患者体内是否有针对该表位的T细胞反应。结果MAGE3在肝癌细胞样品中表达阳性,在肝细胞中阴性;随后从肝癌细胞样品中检测出自然呈递的MAGE3271279表位抗原肽FLWGPRALV(3839拷贝/细胞),并从患者外周血中检测出针对该表位的特异性T细胞反应。结论本实验从肿瘤组织中检测出自然呈递的MAGE3271279表位,并揭示了该表位的潜在应用价值,同时也初步展示了质谱在肿瘤相关表位检测中快捷、准确的特点,而这些特点对于肿瘤相关表位的鉴定和肽疫苗的设计是非常重要的。

摘要：设计随机对照临床试验（挪威结直肠癌预防试验[NORCCAP]1）NCT00119912。分组 隐匿分配。盲法 设盲的（对结局评价者设盲）。

摘要：目的:利用质谱检测技术和差异比较方法,对肝癌组织中自然呈递的黑色素瘤抗原基因(melanomaantigengene,MAGE)表位进行鉴定分析.方法:肝癌细胞和癌旁无瘤肝细胞取自同1例肝癌患者,弱酸洗涤法分离肝癌细胞和肝细胞表面所有肽段;利用表位预测法挑选出HLA—A2限制的MAGE-1,MAGE-3理论侯选肽作为质谱筛选目标;利用弱酸洗涤法从肝癌细胞和肝细胞表面分离肽段,这些肝癌细胞和肝细胞都来自同1例肝癌患者.然后用HPLC分离纯化这些肽段,并将二种细胞的各峰段(fractions)进行差异比较,挑选出肿瘤特异性的峰段进行质谱分析.结果:经表位预测,共选出80条目标肽.从肝癌细胞样品中检测出2条自然呈递的MAGE抗原肽:FLWGPRALV(MAGE-3271-279)和FPSLREAAL(MAGE-1294-302),他们分别来自HCC的峰45.246和峰34.801,m/z分别为1058.49和1003.62.结论:这是首次从肿瘤组织中分离、鉴定出自然呈递的MAGE抗原表位.本实验证实质谱检测法可以对组织中自然呈递的肿瘤相关抗原表位进行快速准确检测,而检测的准确性和高效性对于表位的鉴定和肿瘤疫苗的设计部是非常重要的.

摘要：目的评价基于CD4立体构型设计的新型免疫抑制物J2对小鼠胰岛移植后急性排斥反应的影响。方法将900～1000个DBA/2（H-2^d）小鼠的胰岛移植在糖尿病模型C57BL/6（H-2^b）小鼠肾被膜下。移植前用台盼蓝和双硫腙染色检测胰岛细胞活性和纯度。将C57BL/6小鼠随机分为5组,每组10只,在胰岛移植后第1～10天腹腔内注射J2,每天一次。对照组注射生理盐水、CsA组注射环孢素A（10 mg/kg）;实验组J2A组（1mg/kg）、J2B组（4 mg/kg）、J2C组（8 mg/kg）。术后监测不同时间各组小鼠的血糖变化及移植胰岛的存活时间,并观察移植胰岛在术后第三天及发生急性排斥反应时的组织病理学及免疫组化表现。结果获得的胰岛细胞的活性＞95%,纯度＞85%。胰岛移植术前各组糖尿病小鼠的血糖平均高于20.0mmol/L,术后前四天各组小鼠的血糖下降明显,均低于11.1 mmol/L,且各组之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。移植第7天以后,对照组、J2A组小鼠的血糖较术后前四天明显升高（P＜0.05）。术后第八天开始,对照组、J2A组小鼠血糖升高平均高于11.1 mmol/L;CsA组、J2B组、J2C组的血糖仍低于11.1 mmol/L,三组之间无明显差异,但明显低于对照组和J2A组（P＜0.05）。病理学检查示移植后第三天各组移植的胰岛细胞轻度水肿,形态大致正常;移植后第八天对照组、J2A组的移植胰岛出现急性排斥反应病理改变,其他组病理未见排斥表现,小鼠胰岛素抗体免疫组化结果显示胰岛素阳性。CsA组（21.6±2.1 d）、J2B组（19.0±2.7d）、J2C组（18.7±2.3d）的移植胰岛存活时间比较差异无统计学意义,但分别较对照组（8.1±0.56d）、J2A组（8.3±0.48d）显著延长（P＜0.01）。结论一定剂量的J2具有和CsA相似的免疫抑制作用,可明显抑制小鼠胰岛移植后排斥反应的发生,显著延长移植物的存活时间。

摘要：目的探讨基于CD4立体构型设计的新型免疫抑制剂(J2)在小鼠体内的免疫抑制作用以及其作用机制。方法将羧基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记的C57BL/6(H-2b)小鼠的淋巴细胞4×10~6～6×10~6经尾静脉注入经^(60)钴照射(900拉德)后的DBA/2(H-2d)小鼠体内构建模型。将DBA/2小鼠随机分为5组,每组5只,模型建立后即刻腹腔注射J2,每天1次。对照组注射生理盐水、CsA组注射环孢素A(10mg/kg体重);实验组J2A组(1mg/kg体重)、J2B组(4 mg/kg体重)、J2C组(8mg/kg体重)。给药3d后分组处死DBA/2小鼠取脾制备淋巴细胞,用CD3、CD4、CD8单抗分别标记受检T细胞,FACS流式细胞仪检测CD4^+T细胞和CD8^+T细胞在小鼠体内分裂增殖的情况,并检测CD4^+T细胞的凋亡情况。结果CFSE标记C57BL/6小鼠的脾淋巴细胞着染率大于99%。对照组分裂的CD4^+ T细胞(75.4±1.58)%、分裂的CD8^+ T细胞(83.48±1.25)%明显多于CsA组和实验组(P0.05),但J2A组多于CsA组(P<0.05)。对照组CD4^+ T细胞早期凋亡的比例(41.1±3.4)%明显高于其他各组(P<0.01)。J2A组(35.6±4.1)%、J2B组(24.0±3.7)%和J2C组(13.6±2.3)%CD4^+ T细胞早期凋亡的比例显著高于CsA组(7.4±1.9)%(P<0.05)。结论J2可能抑制T细胞亚群CD4^+ T细胞的活化,从而进一步抑制CD8^+ T细胞的分裂增殖而具有免疫抑制作用。

摘要：目的探讨胃瘫外敷方治疗消化系统肿瘤患者术后胃瘫（寒证）患者的疗效。方法采用多中心、随机、双盲、安慰剂平行对照临床试验，以优效性设计，收集北京4家三级甲等医院确诊的消化系统肿瘤术后胃瘫、且腹部症状中医局部辨证为寒证的患者入组。区组随机化将患者按1∶1比例分组，在常规治疗（营养支持、胃肠减压、促胃动力药）的基础上，治疗组和对照组患者分别给予胃瘫外敷方或安慰剂穴位（中脘、神阙穴）贴敷，治疗14 d或达到有效标准。结果2013年7月15日至2015年6月3日，共招募患者128例，最终120例患者入组进入全分析集（FAS），其中治疗组60例，对照组60例。88例患者进入符合方案数据分析集（PPS），其中治疗组45例，对照组43例。FAS中治疗组患者的临床有效率为68.3%，明显优于对照组（41.7%，P=0.003）。治疗组达到治疗有效所需的中位时间为8 d，明显短于对照组（10 d，P=0.017）。FAS中治疗组有3例患者出现不良事件，发生率为5.0%（3/60），分别为轻中度脱皮、瘙痒、恶心，停药后自行缓解；对照组患者未出现不良反应，两组差异无统计学意义（P=0.244）。结论胃瘫外敷方是消化系统肿瘤术后胃瘫（寒证）患者的一种新的治疗选择。临床试验注册英国国际标准随机对照试验号注册库，ISRCTN18291857。

摘要：我们设计了一种小型猪部分肝切除后自体残余肝脏灌注模型，模拟活体肝脏移植的再灌注过程，观察切除不同比例肝脏再灌注后的肝功能和生存情况。一、材料与方法体质量为20～25奴小型猪。静脉吸入复合全身麻醉后，经上腹部横形切口，分离肝动脉、门静脉主干及供应各肝叶的血管分支和肝上、肝下下腔静脉；按实验设计切除部分肝脏后，从供应肝左叶的门静脉分支插管作为灌注液流人道，经肝下下腔静脉插管作为灌注液流出道，阻断第一、第二肝门，经门静脉插管注入低温保存液灌洗肝脏，肝周置冰屑辅助降温，灌注总量约1500ml；灌注完成后，将门静脉分支插管向下插入门静脉主干，与肝下下腔静脉插管用Y型管连接，经体外转流泵将血液自颈外静脉插管回流，维持转流时间在45～55min，以此模拟无肝期；转流结束后，血液回输并开放阻断，缝合肝下下腔静脉和门静脉分支插管处。术后监测猪心率及血压，及时复温及预防感染。

摘要：目的 探讨慢病毒介导的RNA干扰技术诱导小鼠树突状细胞OX40L基因沉默对调节性T细胞的影响. 方法 设计针对小鼠OX40L基因的RNA于扰序列,通过外源筛靶筛选出干扰效果最佳的序列.以293T为包装细胞,制备含OX40L的siRNA序列的慢病毒载体OX40L-RNAi-LV和阴性对照载体NC-GFP-LV.采用磁式分选器分离培养骨髓来源的小鼠树突状细胞（DCs）,以MOI为25进行转染,分别将转染OX40L-RNAi-LV（实验组）、转染NC-GFP-LV（阴性对照组）和未转染（空白对照组）的DCs与磁式分选器分选得到的CD4^＋CD25^＋T调节细胞共培养,6 d后通过流式细胞仪检测T调节细胞的增殖和凋亡情况. 结果外源筛靶筛选出干扰效果最佳的RNA干扰序列（靶序列为GCTCATACAAGAATGAGTA）,OX40L蛋白表达的抑制率为73.1%.感染复数为25时,慢病毒载体感染DCs的效率为86.4%.DCs与CD4^＋CD25^＋T调节细胞共培养后,实验组的凋亡细胞比例为8.7%,显著低于阴性对照组（20.1%）和空白对照组（19.8%）,F=244.22,P=0.000;而增殖细胞前体频率为38.3%,明显高于阴性对照组（24.5%）和空白对照组（22.9%）,F=95.40,P=0.000.结论 小鼠OX40L的siRNA慢病毒载体可以有效降低树突状细胞OX40L的表达,对体外培养的CD4＋CD25＋T调节细胞具有显著地促进增殖、减少凋亡的作用.