摘要：1952年新中国为加强高等院校建设进行院系调整,于1953年在北京大学生物学系人体及动物生理专业内设生物化学专业课,并成立生物化学教研室。1956年在北京大学设立了综合性大学中的首个生物化学专业,教学计划兼顾生物学和化学两个学科的基础,并以重基础、重实践、启发式为主要原则。科研计划则有三个重点:蛋白质结构与功能、神经生化、核酸在遗传信息表达中的作用。张龙翔的蛋白质课题组最早在国内合成八肽,并测定胰蛋白酶自溶过程中化学结构与性质的变化,测定了大熊猫乳酸脱氢酶M链序列以此提出分类新依据。后期进行分子设计,在此基础上建立蛋白质工程国家重点实验室。徐长法和茹炳根通过生物工程技术构建了新型导向溶栓剂。沈同和王镜岩研究大脑在低温和缺氧条件下的代谢,王镜岩进而研究神经肽。沈同和朱圣庚发展了多种分离纯化核酸的方法,朱圣庚通过逆转座子整合遗传信息,并借助噬菌体展示芯片分离到多种特异抗原,并制得相应抗体。陈同度研究蛋白质变性过程化学结构和性质的变化,以及营养学和生物氧化还原反应。王志美协助陈同度继续吴宪的蛋白质变性理论研究。生化教研室十分重视社会服务,做好帮助兄弟院校培训师资的工作,中美生物化学联合招生项目(CUSBEA)以及出版生物化学教材等。改革开放以来大量引进人才,充分发挥课题组作用,生物化学教学和科研取得一系列新的成果。然而生物化学正面临一些概念上的巨大转变,以及大科学工程的需要,因此我们仍坚持教研室的组织形式,以便对教学和科研工作中遇到的问题及时展开研讨和协调。

摘要：该研究旨在建立和优化一种针对实验动物肺炎克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae,KP)的TaqMan实时荧光定量PCR(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测方法,以提高检测的灵敏度、特异性和准确性。通过文献调研和序列比对,选取了KP的phoE基因作为目标序列,设计并合成一对特异性引物和探针,对qPCR反应体系和退火温度进行了系统优化,采用梯度稀释法测定了该方法的线性范围、灵敏度和检测限。通过分析不同浓度标准品的qPCR曲线,评估了该方法的特异性和方法再现性。最后将该方法用于各种临床样品检测。优化后的qPCR方法显示出良好的线性关系,线性范围为2.7×10^(4)~8.64 copies/μL,线性回归方程为y=–3.83x+42.865,相关系数(R^(2))为0.992。检测限达到8.64 copies/μL,表明该方法具有较高的灵敏度。特异性实验结果表明,该方法仅对KP产生特异性扩增,与其他常见病原体无交叉反应。统计不同操作人员对检测极限样品的10个平行Ct值,结果显示,Ct值的相对标准偏差均低于2%,说明方法具有良好的再现性。共检测26份临床样本,有3份临床样本为阳性,其他均为阴性。本研究成功建立了一种高灵敏度、高特异性的KP qPCR检测方法,为实验动物中的KP感染提供了一种快速、准确的分子诊断工具。

摘要：通过对水蛭素及一些含有精氨酸 甘氨酸 天冬氨酸 (RGD)序列的多肽类血小板聚集抑制剂结构与功能的分析 ,设计并构建了两个在水蛭素C端融合RGD序列的嵌合分子。嵌合体基因分别重组到表达载体pET 2 1a(+ )中并转化大肠杆菌BL2 1(DE3)。经限制酶消化和DNA序列分析 ,证明两种重组质粒与设计完全一致。由于RGD 水蛭素嵌合基因上游连接了金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)的信号肽序列 ,在IPTG诱导下两种嵌合分子都获得了分泌表达 ,表达产物主要集中在细胞周质空间。通过离子交换层析和凝胶过滤层析分别对两种嵌合体蛋白进行纯化 ,纯化产物在Tricine SDS PAGE中都显示为单一条带。活性分析结果表明两种嵌合体蛋白在保留水蛭素抗凝血酶活力的同时 ,还呈现抗血小板聚集活性。

摘要：以采自四川平武县老河沟自然保护区的一份果子狸(Paguma larvata)组织样品为实验材料,通过FIASCO法构建微卫星文库,对250个单克隆进行测序分析,获得147条含微卫星序列的片段,微卫星单元重复次数大于10的序列共有42条。据此设计引物42对,进一步使用21份果子狸样品检测这些引物的扩增能力和扩增序列多态性,最终得到5个多态性微卫星位点。同时,对已发表的13个果子狸微卫星位点进行检测,发现其中5个位点具有多态性。对这10个位点的特性进行分析,结果显示它们具有较高的多态性(等位基因数为2~11,观测杂合度为0.286~0.737,期望杂合度为0.358~0.906);PID和PID-sib值表明,在约10^(9)个没有亲缘关系的个体或10^(4)个有亲缘关系的个体中,可能发现一对基因型相同的个体,由于果子狸野外局域种群规模远低于这个量级,这10个微卫星位点可用于果子狸的个体识别。

摘要：水蛭素是凝血酶最强的特异抑制剂，可望成为预防和治疗各种血栓疾病的有效药物。根据医用水蛭（Ｈｉｒｕｄｏｍｅｄｉｃｉｎａｌｉｓ）头部水蛭素（ＨＶ－２）的氨基酸序列，通过递归ＰＣＲ，合成水蛭素基因，并重组到本实验室改建的大肠杆菌分泌型表达载体ｐＩＮ－ｏｍｐＡ－ＨＩ中，使水蛭素基因的编码序列直接位于大肠杆菌外膜蛋白Ａ信号肽序列的下游。转化大肠杆菌ＤＨ５α，筛选出重组体，经ＰＣＲ，限制酶切图谱和序列分析，结果表明所合成的水蛭素基因与设计完全一致。水蛭素基因在大肠杆菌中得到表达，重组水蛭素（ｒＨＶ－２）被分泌到细胞周质及培养基中，表达量占菌体蛋白的１９．８％，并且有明显抗凝血酶生物活性。经分离纯化，产物在质谱分析中显示基本为单一成分，分子量为６８９３．１Ｄａ，证明重组水蛭素在分泌过程得到正确加工。

摘要：将抗栓肽 ( Decorsin)嫁接到低分子量尿激酶原 ( scu PA-3 2 k)上 ,可以期望获得既具有抗血小板聚集活性 ,又具有溶栓活性的新型基因工程蛋白质分子 .利用计算机辅助分子设计手段模拟了该融合蛋白的分子结构 ,证明其活性区可以正常发挥功能 .根据大肠杆菌偏好密码子合成 Decorsin的基因 ,与 scu PA-3 2 k基因融合在一起 ,构建新的嵌合体基因 dscu PA,并在大肠杆菌中通过 IPTG进行诱导表达 ,该重组蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式存在 .对包涵体进行变性和复性并通过层析纯化得到目的蛋白质 .用纤维蛋白平板法测得重组蛋白的比活为 92 0 0 0 IU/mg.激活纤溶酶原的酶促动力学性质与天然低分子量尿激酶相似 ,且有较强的抑制血小板聚集的功能 .重组蛋白 dscu PA不但具有较强的溶栓功能 ,而且具有抗栓功能 .

摘要：运用RT PCR技术 ,根据玉米粗缩病毒S6的末端序列设计引物 ,从玉米粗缩病感病材料中克隆得到一条 2 2kb长的cDNA片段 ,序列分析表明 ,该片段全长 2 1 93bp ,含两个开放阅读框 ,分别编码 41 0kD和 36 3kD的多肽。序列分析结果表明 ,该cDNA片段及其编码产物与水稻黑条矮缩病毒S7的cDNA序列及编码产物存在最高的相似性 ,推测该cDNA片段为水稻黑条矮缩病毒的S7片段 ,而不是玉米粗缩病毒的S6。分别将该片段的两个阅读框克隆到原核表达载体pET2 1 d及pGEX KG中 ,经IPTG诱导后 ,两种蛋白均得到了高效的表达。表达产物回收后制备并得到了高效价的抗血清。

摘要：以小鼠胚胎成纤维细胞 (ME)为饲养层 ,以大鼠心脏细胞条件培养基 (RH CM)为ES细胞培养基 ,全面、详尽地对BALB c小鼠ES细胞的建系和培养方法进行了探讨 ,成功地建立了一套建立和培养BALB c小鼠ES细胞系的新方法。这一培养条件不但有效地维持了ES细胞的未分化状态和正常二倍体核型 ,而且维持了其作为多能性胚胎干细胞的一系列特征 ;实验设计了两种离散方法和两种浓度的消化液 ,用来离散增殖的ICM和ICM离散后出现的ES集落。两种离散方法即“一次离散法” ,和“多次离散法” ,两种浓度的消化液即 0 .2 5 %Trypsin 0 .0 4 %EDTA和0 .0 5 %Trypsin 0 .0 0 8%EDTA ;同时对ICM离散时机、RH CM在BALB c小鼠ES细胞建系和培养中作用进行了探讨。结果表明 :在低浓度消化液作用下 ,采用“多次离散法”离散增殖 4天的ICM和ES集落的方法建立BALB c小鼠的ES细胞系是理想的 ;从细胞形态、集落形态、增殖生长能力、核型检测、碱性磷酸酶测定以及体内外分化能力表明 ,所建立的 9个BALB c小鼠ES细胞系符合小鼠胚胎干细胞的一系列特征。

摘要：以 70 %的大鼠心脏细胞条件培养基 (RH CM)为培养液 ,以小鼠胚胎成纤维细胞 (PMEF)为饲养层 ,采用添加 1%鸡血清的消化液和“连续离散法”作为小鼠ES细胞建系的改进方法 ,比较了 5个品系小鼠ES细胞系建立的特点。与常规方法相比 ,3个近交系小鼠 12 9 ter、C5 7BL 6J、BALB c的ES细胞建系率分别由 11 8%、3 7%和 2 9%提高到 33 3%、13 3%和 19 4 % ,差异十分显著 ;直接采用改进的方法建立KM和ICR小鼠ES细胞系 ,建系率分别达 12 %和 4 2 1%。讨论了ICM增殖的时间 ,即离散时机对ES集落形成及建系率的影响 ,结果显示 :12 9 ter、C5 7BL 6J、BALB c、KM和ICR小鼠品系ICM适宜的离散时机分别为增殖 4～ 6d、3～ 3 5d、4d、4～ 5d和 4～ 5d ;同时 ,讨论了不同ES细胞建系所需最适宜的消化液浓度 ,其中BALB c小鼠的ES细胞对高浓度的消化液十分敏感 ,0 0 5 %Trypsin 0 0 0 8%EDTA是其比较理想的离散浓度。设计了两种离散方法 ,即“一次离散法”和“连续离散法” ,用来离散增殖的ICM和ICM离散后出现的ES集落 ,结果表明 :后者在建系过程中的作用明显优于前者。RH CM与添加LIF的常规ES细胞培养基相比 ,不但具有显著抑制小鼠ES细胞分化、维持其二倍体核型的作用 ,而且明显促进ES细胞的贴壁生长。

摘要：利用多时相遥感手段，对东莞市的景观演化特征进行了回顾性分析，重点研究不同景观要素从１９８６～１９９４年的变化情况，探讨景观结构和功能变化与东莞市社会经济发展之间的对应关系。研究表明，高强度土地资源开发利用是东莞市景观变化的直接驱动因素，生物过程在景观动态变化过程中，居于次要地位；景观演化的基本格局是城市要素迅速膨胀，农业和自然要素则不断减少；由于缺乏必要的景观结构和功能的相互适应设计，在东莞市景观演化过程中，存在一些潜在的生态问题。