摘要：目的利用环介导等温扩增技术（LAMP），建立一种快速可靠的儿童急性呼吸道感染标本中腺病毒检测方法。方法根据腺病毒六邻体基因序列设计特异性LAMP引物，使用实时浊度仪对所建立的LAMP方法进行特异性与灵敏度评估后，对3、7、14型腺病毒分离株共11株进行了检测，随后对经直接免疫荧光法（DFA）鉴定为腺病毒阳性的呼吸道标本36例、腺病毒阴性的呼吸道标本72例分别应用巢式多重PCR和LAMP两种方法进行检测。结果所建立的LAMP方法最低检出腺病毒DNA浓度为1．9×10^2拷贝／ml；方法特异性好，与其他病毒间无交叉反应；11株腺病毒分离株应用LAMP方法检测全部为阳性；36例已经过DFA鉴定为腺病毒阳性的标本中，应用LAMP法共检出腺病毒DNA阳性34例；72例DFA鉴定为腺病毒阴性的标本应用LAMP方法检测5例阳性。本研究建立的LAMP方法与DFA的总符合率为93．5％；与巢式多重PCR的总符合率为98．1％。结论本研究建立的LAMP方法耗时短、灵敏度好、特异性高、操作简便，适用于儿童呼吸道标本中腺病毒的宴聆窜懊谏榆测．具右糖好的章际席用前罱．

摘要：目的 了解2008-2009年北京分离的肠道病毒71型（EV71）基因组3＇末端的基因特征（未包括多聚腺苷尾）,探讨是否与病毒的致病性有关.方法 于2008-2009年手足口病流行期间采集来首都儿科研究所附属儿童医院就诊的普通手足口病患儿和合并重症神经系统并发症患儿的咽/鼻拭子或疱疹液标本.将标本接种Vero细胞进行肠道病毒分离,同时设计肠道病毒通用引物、EV71和柯萨奇病毒A组16型（CA16）特异性引物通过巢式RT-PCR对分离到的肠道病毒进行型别鉴定.对引起不同临床类型感染的10株EV71分离株的基因组3＇末端进行序列测定和分析.结果 10株EV71的3＇末端均包含1386 nt的3D、终止密码子TGA和81 nt的3＇UTR,由3D核苷酸序列所推导的3D蛋白含462个氨基酸.10株EV71的3D和3＇UTR核苷酸同源性分别为95.8%～99.6%和96.3%～100%,重症来源的4株毒株中有3株在3Dpol第140位和第263位同时出现了相同的氨基酸变异（R140K和I263V）.10株EV71的3D与C4亚型代表株具有最高的核苷酸和氨基酸同源性,分别为92.7%～94.2%和96.8%～97.6%;在3＇UTR与CA16/G10具有最高的核苷酸同源性（88.9%～91.4%）.3D区的遗传进化分析表明10株EV71在亲缘关系上与C4亚型最密切,与CA16/G10较密切,而与EV71其他基因型和亚型较疏远.结论 基因组3＇末端在EV71进化中可能有一定的作用.

摘要：目的 分析北京地区2010至2016年引起儿童肠道病毒（EV）相关疾病的病原谱变化及其各型别的流行趋势.方法 采用重复横断面研究方法,对2010-2016年收集的首都儿科研究所附属儿童医院感染科门诊疑似EV相关疾病患儿的口咽拭子标本进行EV筛查.使用实时荧光反转录（RT）PCR反应检测EV、肠道病毒71型（EV-A71）和柯萨奇病毒A组16型（CV-A16）.经自行设计引物、改进引物及PCR扩增条件,通过RT-PCR方法对EV阳性而EV-A71和CV-A16阴性标本依次用CV-A6、EV-A和B组特异性引物以及5＇UTR通用引物进行扩增、测序以确定型别.通过计算构成比的方式分析不同EV型别的流行特点以及在不同年龄组的分布情况,使用x2检验对患儿性别的差异进行统计学分析.结果 收集的2 703份口咽拭子标本中EV阳性标本共1 992例,总阳性率为73.7％,其中EV-A71的阳性率为19.1％（516份）,CV-A16为24.3％（658份）,CV-A6为22.2％（600份）,CV-A10为4.5％（122份）,其他型别EV为3.5％（95份）,还有1份标本为EV-A71和CV-A16同时阳性,提示共感染.通过改进EV-A组VP1特异性引物和PCR扩增条件后,EV-A组（除EV-A71、CV-A16、CV-A6和CV-A10）阻性检出率由11.3％（7/62）增加至95.2％（59/62）.2010-2012年,EV阳性标本中CV-A16和EV-A71所占比例最高;然而2013年CV-A6代替CV-A16和EV-A71成为主导病原,所占比例达60.7％（68/112）,远远高于CV-A16（23.2％,26/112）和EV-A71（12.5％,14/112）;2014年,EV型别仍以CV-A16和EV-A71为主;2015和2016年均以CV-A6所占比例最高,分别为68.2％（232/340）和38.6％（151/391）.EV的流行季节多为4至8月份,但每年稍有不同,CV-A6在10和11月份会出现小的流行高峰.EV阳性标本中的男女性别比为1.50∶1,以5岁以下儿童多见.与EV-A71和CV-A16相比,CV-A6更易感染年龄偏小的儿童.结论 2010-2016年北京地区儿童中EV感染的病例中EV病原谱发生了明显变化,自2013年以来,非EV-A71和CV-A16的病原增多,CV-A6逐渐成为EV感染性疾病的主要病原体之一.对PCR引物和扩增条件的改进可以有效地提高检测结果的可靠程度.

摘要：本文旨在建立一种快速、高效的检测肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16)的方法,用于儿童手足口病的病原学监测。通过设计肠道病毒通用引物和CA16、EV71的型特异性引物,建立以不同引物浓度配比及两阶段退火温度提高检测敏感度和特异度的多重反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,并对首都儿科研究所附属儿童医院2010年3～10月收集的371例手足口病患儿381份临床标本同时进行病毒分离和核酸检测。结果显示,本研究建立的多重RT-PCR方法对CA16和EV71的最低模板检测浓度分别为5.32pg/ml和0.64pg/ml,反应特异度为100%。应用该方法检测381份手足口病临床标本的总阳性率为77.4%,其中CA16与EV71的检测阳性率分别为31.8%和35.4%,两者检测阳性比为1∶1.1。以病毒分离为标准,多重RT-PCR对CA16及EV71检测的准确率分别为95.2%和98.6%。因此,本研究新建立的多重RT-PCR方法准确、简便,适用于较大量样本的手足口病病原学监测。2010年引起北京地区儿童手足口病的主要病原为CA16和EV71。