摘要：非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)引起猪的烈性传染病。2018年8月我国首次暴发ASF疫情,由于没有有效的商品化疫苗,导致疫情蔓延至我国各省份。随着疫情的发展,准确、快速的诊断技术成为疫情防控的关键。本文梳理总结了我国ASFV诊断检测技术专利现状,包括ELISA、免疫层析技术等免疫学检测方法和PCR、等温扩增技术、基于CRISPR/Cas系统开发的多种分子生物学检测方法,以期为我国ASF疫病防控及诊断产品的研发提供有价值的参考。

摘要：为了建立一种基于固相合成多肽技术的猪塞内卡病毒A型抗体血清学检测方法。本研究对猪塞内卡病毒A型VP1、VP2和VP3三种重要结构蛋白的B细胞表位进行设计并筛选到SVA1601、SVA1602、SVA1603和SVA1605共四条表位多肽,进而建立了一种用于检测猪塞内卡病毒A型抗体的间接ELISA方法,并验证该方法的检测敏感性、特异性、重复性以及与血清中和试验的符合率。试验结果显示,建立的间接ELISA方法对6份感染血清的最高稀释倍数为1:640,特异性为99.1%,批内和批间变异系数分别为2.4%~6.5%和4.4%~10.3%。与血清中和试验比较,符合率为97.7%。结果显示采用SVA1601、SVA1602、SVA1603和SVA1605建立的间接ELISA方法的敏感性较高,且重复性较好,可用于临床血清中猪塞内卡病毒A型特异性抗体的检测。

摘要：为建立一种快速、高效、便捷的非洲猪瘟病毒抗体检测方法,本试验采用生物信息学方法筛选得到了性能优异的非洲猪瘟病毒抗原表位多肽P54t,利用P54t多肽作为检测抗体的特异性抗原,建立了一种特异性、敏感性好的胶体金免疫层析抗体检测方法,用于检测待测样品中是否含有非洲猪瘟病毒抗体。结果显示,该方法的敏感性为100%,特异性为100%,最低检测限度可达1:12800,与商品化试剂盒比较,符合率为94.3%。结果表明,该方法敏感性好、特异性强,检测结果准确,可用于非洲猪瘟病毒特异性抗体检测。

摘要：【目的】筛选更安全高效的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)合成肽疫苗佐剂。【方法】将IMS 251C VG、GEL 02 PR、ISA 15A VG、ISA 206 VG、ISA 61 VG、台湾细菌鞭毛、卡波姆、多糖共8种佐剂与适量PCV2多肽抗原按照特定方法配制成不同疫苗,并验证其物理性状,采用小鼠试验初步检验疫苗安全性及免疫效果,筛选出较优的佐剂进行仔猪免疫攻毒保护试验,进一步评估各疫苗的免疫保护效果。【结果】物理性状显示,所有疫苗稳定性均较好,4℃保存期均超过12个月。ISA 61 VG油佐剂黏度较高且乳滴粒径较大,ISA 15A VG、ISA 206 VG双相佐剂次之,其余水佐剂均较低较小。小鼠试验结果显示,除台湾细菌鞭毛佐剂外其他佐剂安全性均良好;小鼠ELISA抗体水平检测结果显示,ISA 61 VG、GEL 02 PR、ISA 206 VG组免疫效果明显高于其余疫苗组;综合评定安全性和免疫效果,筛选ISA 61 VG、GEL 02 PR、卡波姆、多糖、ISA 206 VG共5个佐剂组进行仔猪免疫攻毒保护试验。仔猪免疫攻毒保护试验结果显示,免疫后,ISA 61 VG和GEL 02 PR组保护效果明显优于其他佐剂,其制备的疫苗产生的ELISA抗体和中和抗体水平均明显高于其他组,同时还可刺激产生更高水平的细胞因子γ-干扰素(IFN-γ);攻毒后,ISA 61 VG、GEL 02 PR、ISA 206 VG组疫苗的仔猪相对日增重显著高于其他佐剂组(P<0.05),且实时荧光定量PCR和免疫组化结果显示,上述疫苗组可显著降低仔猪体内病毒载量(P<0.05)。临床症状观察显示,ISA 61 VG和GEL 02 PR疫苗组无体温升高或被毛粗乱等现象,病理切片表明这2个疫苗组组织病变较轻。【结论】油佐剂ISA 61 VG佐剂和水佐剂GEL 02 PR制备的PCV2合成肽疫苗对预防PCV2感染具有较好的免疫保护作用,试验结果为PCV2合成肽疫苗的研究提供了数据基础。

摘要：为了建立一种能够检测非洲猪瘟病毒(ASFV)特异性抗体的单抗阻断ELISA方法,本试验首先构建了非洲猪瘟病毒p30蛋白的原核表达载体,进而制备并筛选出1株能特异性识别p30蛋白的高亲和力单克隆抗体,采用昆虫杆状病毒表达系统Bac-to-Bac进行该单克隆抗体的表达。以p30重组蛋白作为包被抗原,辣根过氧化物酶(HRP)标记的单克隆抗体作为阻断抗体建立了一种非洲猪瘟病毒特异性抗体的检测方法,并验证其敏感性、特异性以及与商品化试剂盒的符合率。结果显示,该方法敏感性为100%,特异性为100%,与商品化试剂盒比较,符合率为98.7%。结果表明,本试验基于非洲猪瘟病毒特异性单克隆抗体建立的阻断ELISA方法敏感性好、特异性强,结果准确可靠,可用于非洲猪瘟病毒抗体检测。

摘要：为了提高活疫苗的稳定性,便于活疫苗的保存和运输,本试验将猪乙型脑炎病毒分别与耐热冻干保护剂和传统冻干保护剂进行配比、冻干,制备活疫苗,分别将疫苗置2~8℃保存,定期测定其病毒含量,同时进行25℃、37℃耐老化试验和小鼠免疫原性试验。结果显示,疫苗在2~8℃条件下保存24个月,使用耐热冻干保护剂制备的疫苗病毒含量下降不超过1.0 Log PFU/mL,使用传统冻干保护剂制备的疫苗病毒含量下降超过3.0 Log PFU/mL;25℃常温保存2个月,使用耐热冻干保护剂制备的疫苗病毒含量下降不超过1.0 Log PFU/mL,而使用传统冻干保护剂制备的疫苗病毒含量下降约2.0 Log PFU/mL;37℃保存10 d,使用耐热冻干保护剂制备的疫苗病毒含量下降不超过1.5 Log PFU/mL,使用传统冻干保护剂制备的疫苗下降超过1.5 Log PFU/mL。使用耐热冻干保护剂制备的活疫苗和使用传统冻干保护剂制备的活疫苗对小鼠的免疫原性相当,半数有效剂量分别为10^(-3.12)/0.1 mL和10^(-3.11)/0.1 mL。试验结果表明,耐热冻干保护剂对病毒的保护效力明显优于传统冻干保护剂,具有良好的热稳定性,使用耐热冻干保护剂制备的活疫苗具有良好的免疫原性。

摘要：病毒中和试验是血清学检测的金标准。为了评估中牧实业股份有限公司试制的牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒的检测效果,本研究用3批牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒与病毒中和试验同时对260份牛结节性皮肤病病毒(LSDV)感染牛血清和200份健康牛血清进行比对检测。结果显示,中牧实业股份有限公司试制的牛结节性皮肤病病毒ELISA试剂盒阳性检出率为86.9%(226/260),病毒中和试验阳性检出率为81.9%(213/260),二者对260份LSDV感染牛血清的检测符合率为85.8%(223/260),对200份健康牛血清的检测符合率为100%(200/200)。结果表明,中牧实业股份有限公司试制的牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒敏感性高、特异性好、检测结果准确度较高。

摘要：盖他病毒(Getah virus,GETV)是一种蚊媒传播病毒,属于披膜病毒科(Togaviridae)甲病毒属(Alphavirus)成员,其感染引起的疾病对我国动物和公共卫生造成的威胁日益严重。本研究在对从江西省某养殖场收集到的兔子脾脏组织进行检测时,经病毒分离、纯化及鉴定,获得一株能够在PK⁃15细胞稳定增殖的GETV分离株,命名为GETV JXNC。全基因组测序结果分析显示,GETV JXNC与GenBank中现有43株GETV参考毒株核苷酸序列相似性为95.3%~99.6%;遗传进化分析结果显示,GETV JXNC与2016年的一株猪源GETV毒株HNNY⁃1(GenBank登录号:MG865966)亲缘关系最近,处于同一进化分支,二者的核苷酸相似性高达99.6%,非结构蛋白编码氨基酸序列相似性为99.7%,结构蛋白编码氨基酸序列相似性为99.8%。本研究首次从家兔中检测并分离到GETV,对GETV的感染谱、传播机制和公共卫生等相关研究具有重要意义。

摘要：为建立鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体的间接ELISA检测方法,应用原核表达的IBDV VP2蛋白作为包被抗原,经方阵试验确定间接ELISA试验的最佳反应条件:包被抗原的浓度为8μg/m L,标准阴、阳性血清的稀释度为1∶400,封闭液选用10%马血清,酶标抗体最佳稀释倍数为1∶15000,最佳抗原稀释液为0.01 mol/L PBS(p H7.2),抗原最佳包被条件为4℃过夜,待检血清和酶标二抗反应条件为37℃60 min,底物作用时间为15 min。待检血清的OD_(450nm)≥0.288判为阳性,反之判为阴性。结果显示,该方法的特异性好、敏感高、重复性好。用建立的间接ELISA方法与商品化IDEXX-ELISA试剂盒对临床血清样品进行检测,符合率为95.7%。该方法的建立为检测IBDV抗体提供了一种安全、特异、敏感、方便经济的检测方法,为鸡传染性法氏囊病免疫监测和预防控制提供了科学的技术手段。

摘要：为分析不同免疫状态下禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)和A亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV-A)共感染对鸡生长性能及免疫器官的影响,通过对1日龄和10日龄常规疫苗免疫鸡群、1日龄灭活疫苗免疫鸡群、1日龄活疫苗免疫鸡群进行REV与ALV-A单感染或共感染,于不同日龄称重,采集免疫器官,对生长性能、免疫器官比重进行比较和分析。结果显示,1日龄鸡单感染或共感染REV和ALV-A均会引起发病、死亡及体重下降,REV、ALV-A单感染组及共感染组平均病死率依次为27.6%、11.6%及31.9%,表明,疫苗免疫刺激增强了REV与ALV-A感染的致病性。10日龄鸡REV、ALV-A单感染及共感染于81日内病死率分别为13.3%、6.7%及20%,低于1日龄感染各相应组,体重下降程度也低于1日龄感染鸡,表明鸡的日龄越高对REV、ALV-A感染的抵抗力越强。活疫苗与灭活疫苗免疫的比较显示,两种疫苗免疫应激均能引起鸡体重下降明显,且活疫苗免疫对体重的抑制作用更明显。REV单感染和共感染对生长发育的抑制作用高于ALV-A单感染,尤其是共感染对鸡体重的抑制作用最明显。对免疫器官比重的影响方面,1日龄感染时,共感染组胸腺比重显著降低,10日龄感染影响不显著,表明鸡日龄越大对病毒感染的抵抗力越强;常规免疫可引起法氏囊比重下降,但对法氏囊的影响是可恢复的,而REV单感染和共感染会加重常规免疫对法氏囊的损伤,且损伤更持久或不可恢复;ALV-A单感染对法氏囊的损伤影响不明显;单感染和共感染对脾脏比重的影响均不显著。本研究为深入研究REV和ALV-A单感染或者共感染诱导鸡群发生免疫抑制机制积累了重要的实验数据。