摘要：禽脑脊髓炎（avian encephalomyelitis，AE）又名流行性震颤，是一种主要侵害1月龄内雏鸡的病毒性传染病。该病传染迅速，既可垂直传播又可水平传播，危害极大。世界许多国家和地区均有该病发生和流行的报道。我国学者张泽纪等于1980年首次发现广东有疑似此病，1982年李心平等通过病理学方法确认此病，随后在我国各地均发现该病的发生和流行，给养鸡业造成较大的损失。　　禽脑脊髓炎病毒（AEV）是一种无囊膜的二十面体对称的病毒粒子，大小为26nm左右。Shafren和Tannock（1991）利用放射性碘标记电泳分析AEV的结构蛋白发现，它主要有3种结构蛋白即VP1、VP2和VP3。Marvil等（1999）测定了AEV疫苗株1?143株的全基因组序列，揭示出AEV结构蛋白有VP1、VP2、VP3和VP4，其中VP2和VP4又合称VP0。我们从河北地区某艾维因肉鸡群自然发病的肉雏鸡脑组织中分离鉴定出一株AE病毒-L2Z株。根据发表的AEV序列设计引物，利用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术，在体外从AEV分离株感染的SPF鸡胚病变组织中扩增出VP0基因，在该片段的5′和3′端均加上KpnI位点，成功地将VP0 cDNA插入到质粒pBssK的KpnI位点之间，获得阳性克隆，并对其进行测序。结果发现，该基因长726bp，编码242个氨基酸，与AEV 1?143株VP0基因的核苷酸与氨基酸之间的同源性分别为95.2%和97.5%，而与小RNA病毒科其它病毒属如人甲肝病毒HAS-15株相应基因核苷酸和氨基酸之间的同源性分别为50.1%和50.8%，与肠道病毒属的PV-1 Sabin株的同源性分别为20.5%和16.5%，与鼻病毒属的HRV-14株的同源性分别为25.5%和17.8%，与心病毒属的EMCV PV2株的同源性分别为25.9%和19.4%，与口蹄疫病毒属FMDV-C株的同源性分别为26.3%和18.6%，与人类肠道致细胞病变孤儿病毒ECHOV的同源性分别为24.9%和16.1%。在系统发育树上，L2Z株与AEV 1?143株之间的距离最近，其次与甲肝病毒之间距离较近，而与小RNA病毒科其它病毒属之间的距离较远。　　Marvil等（1999）首先测定出AEV 1143株的全基因序列，发现与甲肝病毒HM-175株之间氨基酸同源性为39%，与该科病毒其它病毒属之间的氨基酸同源性为19%～21%，其中VP0基因与甲肝病毒HM-175株相应基因氨基酸之间同源性达到71.8%，认为AEV与甲肝病毒属之间关系密切。Todd等（1999）对AEV VR株的3′端869bp序列测定表明，它与甲肝病毒相应区域氨基酸之间的同源性为35.7%，均高于与该科病毒其它病毒属相应氨基酸之间的同源性，也认为AEV与甲肝病毒之间最为接近。本试验发现：AEV分离株L2Z株VP0基因与甲肝病毒相应氨基酸之间的同源性为50.8%，而与该科病毒的其它属病毒相应氨基酸之间同源性仅在16.1%～21.9%之间。从系统发育树上也进一步表明，AEV L2Z株与甲肝病毒之间同源性之间距离最短，亲缘关系最近，而与肠道病毒属之间亲缘关系较远。第6次国际病毒学分类报告中将AEV划为小RNA病毒科肠道病毒属，但从我们的实验结果与Marvil等（1999）和Todd等（1999）的报道，从基因水平上证明AEV与甲肝病毒属更接近，而与肠道病毒属亲缘关系较远，因此认为AEV是否归为小RNA病毒科肠道毒属有待进一步确定。　　本研究成功地进行了AEV分离株VP0基因的克隆与序列测定，为下一步进行AEV基因结构研究打下了基础。

摘要：根据正交试验设计原理,设计探索正交试验和细调正交试验以确定马蔺(Iris ***(Fisch.)Koidz)ISSR-PCR反应体系中各成分的浓度,从dNTP、Taq酶、Pri mers、Mg2+4种因素对马蔺ISSR反应体系进行了优化,得到适合马蔺的ISSR-PCR最佳反应体系,即25μl的反应体系中含有dNTP 0.3 mmol/L、Taq酶1.5 U、Pri mers 0.4μmol/L、Mg2+2.5 mmol/L以及1×buffer和50 ng模板DNA。通过对马蔺ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火试验,得到这条引物的最佳退火温度为52℃。这一体系的建立为今后利用ISSR标记技术研究马蔺遗传多样性奠定了基础。

摘要：本文借助环介导等温扩增技术(LAMP),建立了两种常见鸡免疫抑制病的(鸡传染性贫血病、J亚群白血病)的快速检测方法。采用简易法提取DNA模板,设计特异性LAMP引物,成功扩增出梯形条带,并且对反应体系进行优化,以及特异性试验和灵敏度试验。结果表明LAMP的灵敏度可达10个拷贝,比PCR灵敏度高10倍;且具有特异性,对其他相关鸡病病原检测结果均为阴性。用建立的LAMP方法对临床样品进行检测,同时与PCR方法比较,结果表明LAMP结果基本与PCR相符,但检测的阳性率要比PCR高。操作简便,无需昂贵设备,适用于临床快速诊断。

摘要：为了比较不同硒源对肉仔鸡组织硒含量及对肝脏和全血中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH -Px)活力的影响 ,以不同的指标确定4种硒源在肉鸡饲料中的应用效果及适宜添加量 ,采用4×3因子完全随机设计 ,包括4种硒源 (硒化卡拉胶、硒蛋氨酸、富硒酵母、亚硒酸钠 ) ,3个水平 ,设基础日粮对照。测定21日龄和42日龄肉鸡的全血、肝脏、血浆、红细胞、肌肉的硒含量和GSH -Px活性。结果表明 ,硒蛋氨酸组在所有组织中均有最高的硒含量 ,4种硒源均能有效提高肝脏及全血GSH -Px活力 ,硒蛋氨酸和富硒酵母可显著提高红细胞中的硒含量 ,而亚硒酸钠则能有效提高红细胞的GSH

摘要：为建立口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)不同血清型与基因型的基因芯片检测方法,设计针对O型8个基因型、A型3个基因型和亚洲1型的特异性探针。从美国GenBank与英国世界口蹄疫参考实验室基因库下载了O型、A型和亚洲1型FMDV的VP1基因序列547条。对每一血清型序列用DNA Star软件ClastalW程序进行多重比对,做系统发育分析并进行基因分型。用生物学软件BioSun 2.0建立基因型数据库,设计每一基因型的特异性探针。共设计出104条候选探针,通过芯片试验筛选出12条特异性探针。以各型特异性探针所对应的靶序列模板做10倍系列稀释进行PCR扩增,扩增产物与探针杂交,验证各探针的灵敏度。对O型SEA、Euro-SA、ME-SA、WA 4个基因型的各条探针的灵敏度进行了检验,结果这些探针能够检测到102数量级拷贝数的阳性靶标。

摘要：目的:克隆鸡补体分子C3d基因并解析其结构特点。方法:将已发表的人、小鼠、地鼠、奶牛、野兔、猪、猩猩、绵羊的C3d基因同鸡的C3α链进行序列比较分析,发现在鸡的C3α链上有一段约897bp的序列同上述动物有较高的同源性,在上下端保守区域设计一对引物788bp,应用RT-PCR扩增鸡C3d部分基因,并克隆到pMD18-T载体中,测序正确后再在上下端分别设计一对引物,理论长度分别为378和336bp,最后用3种PCR产物延伸扩出C3d全长序列。结果:获得了鸡C3d基因重组质粒pMD18-C3d,序列分析表明所获的鸡C3dcDNA全长为993bp,编码331个氨基酸残基。鸡与上述人或动物C3d核苷酸的同源性分别为66.6%、66.2%、67.7%、66.2%、67.1%、67.0%、59.6%、67.1%,与其编码的氨基酸的同源性分别为61.5%、61.9%、61.2%、61.9%、56.5%、61.9%、54.5%、61.5%;而哺乳动物间C3d的核苷酸和氨基酸的同源性则分别为74.2%～100%和72.2%～100%。进化树反映出C3d基因具有种的多样性,亲缘关系越近,进化关系也越近。结论:鸡C3d与其他动物的C3d在抗原结合位点上没有氨基酸的变化,而与CR2结合的28肽区氨基酸差异明显,说明鸡C3d结合抗原没有专一性,而结合免疫细胞则有种的特异性,由此可以推测鸡C3d只能增强鸡的特异性免疫反应。

摘要：为建立一种简便、快速、高效的可同时区分犬腺病毒1型(canine adenovirus type 1,CAV-1)、犬腺病毒2型(canine adenovirus type 2,CAV-2)、犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)、犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)、犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)5种常见犬腹泻病毒的基因芯片诊断方法,本研究以CAV-1、CAV-2、CCV、CDV、CPV 5种犬腹泻病毒为靶病毒,根据NCBI上收录的病毒基因序列在其保守区域内设计引物,在此基础上根据变异区域设计针对每种病毒的探针2~3条,优化检测体系的各反应条件,确定该检测方法的特异性与敏感性,建立可同时区分5种病毒的基因芯片检测方法。结果显示,建立的基因芯片检测方法可同时检测以上述5种犬腹泻病毒,其中PCR的退火温度为55℃、延伸时间为1 min 15 s;探针与PCR产物的杂交温度40℃、杂交时间2.5 h时,该方法对CAV-1、CAV-2、CCV、CDV和CPV 5种病毒标准品的检测限分别为0.2 fg/μL、2 fg/μL、2 fg/μL、20 pg/μL和0.02 fg/μL,具有较高的灵敏性;同时对犬副流感病毒进行特异性试验,发现无阳性信号出现,具有较强的特异性;对14份临床腹泻样品检测结果显示,基因芯片方法对CAV-1、CAV-2、CCV、CDV和CPV 5种病毒的阳性检出率分别为28.57%、50.00%、64.28%、14.28%和85.71%,并且基因芯片检测方法的敏感性较PCR要高10~100倍。以上结果表明,本研究建立的基因芯片检测方法具有特异、敏感等特点,对临床中犬类混合感染病毒检测具有一定的诊断意义。

摘要：研究仔猪12种致病菌的16 S rRNA基因序列,分析其亲缘关系,为设计其16 S rRNA基因的诊断探针提供理论依据。从美国国家生物技术信息中心(NCBI)基因库中下载332条仔猪12种致病菌的16S rRNA基因序列,应用双序列比对和构建系统进化树的方法对这些序列进行种内分析,选出每种细菌的代表序列,再对代表序列用同法进行种间分析,并将种间分类结果与伯杰氏细菌分类手册(第8版)的分类结果进行比较。从每种细菌的数据库中选出一条接近16 S rRNA基因序列全长,与同种其他序列的核苷酸替代率差异较小的序列为该种细菌的代表序列,进行种间16 S rRNA基因序列系统进化分析,结果与伯杰氏细菌分类手册(第8版)的分类基本一致。该16 S rRNA基因的系统进化分析所提供的信息将用于下一步针对这12种致病菌的16 S rRNA基因诊断探针的设计。

摘要：根据发表的犬瘟热病毒(CDV)参考毒株Onderstepoort的序列设计了一对引物,以感染犬瘟热病毒的犬的粪便总RNA为模板,RT-PCR扩增出17株CDV的H全基因1877bp的片段,将这个片段连接到pGEM-Teasy载体上,经酶切鉴定得到阳性克隆,将阳性质粒进行序列测定,并与国内外毒株进行同源性比较和系统发育分析,结果显示17株均为Asia-1型。北京地区流行的毒株主要是America-1型和Asia-1型,其中2007年主要流行America-1(疫苗型),而2008年主要是Asia-1型。

摘要：[目的]测定H9N2 AIV4个毒株血凝素基因序列,并进行比较分析,从分子生物学角度了解各毒株间的差异和变异规律,进而了解该亚型禽流感的分布及流行规律。[方法]参照H9N2亚型禽流感HA基因序列设计1对引物,对禽流感A/Chicken/Hebei/WD/98(H9N2)、A/Chiken/Hebei/ZD/04(H9N2)、A/Chicken/Beijing/MY/06(H9N2)和A/Chicken/Beijing/PG/08(H9N2)4个毒株HA基因进行扩增、克隆和测序,并将这4个毒株的HA基因序列分别与GenBank登录的10个H9N2亚型禽流感毒株进行比较分析。[结果]获得了4个毒株HA基因(ORF)全长1 683 bp,编码561个氨基酸;4个毒株之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为92.5%～95.6%和95.2%～96.8%;WD株、MY株、PG株和ZD株与其他10个毒株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为82.6%～95.1%、83.0%～99.0%、82.7%～95.5%、81.30%～95.7%、86.6%～96.3%、86.6%～97.9%、87.0%～97.1%、86.9%～97.3。[结论]HA基因在不同毒株间具有很高的同源性。