摘要：为了建立可同时检测鲤浮肿病毒(Carp edema virus,CEV)和锦鲤疱疹病毒(Kio herpesvirus,KHV)的检测方法,本研究根据CEV P4a基因保守序列,对英国环境、渔业水产养殖研究中心(Center for Environment,Fisheries and Aquaculture Science,CEFAS)设计合成的引物序列进行优化,合成1对特异性引物和1条用FAM荧光基团标记的TaqMan探针;根据KHV ORF7基因保守序列,设计筛选1对特异性引物和1条用VIC荧光基团标记的TaqMan探针。优化反应条件,建立了CEV和KHV双重实时荧光定量PCR检测方法。结果显示该方法特异性强,与其它水生动物病毒无交叉反应;灵敏度高,对CEV和KHV的检测限均为15拷贝数/μL;组内重复与组间重复的平均变异系数小于3%。本研究建立的方法具有快速、特异、敏感等优点,可用于CEV和KHV的快速检测。

摘要：为建立一种简便、快捷的现地检测锦鲤疱疹病毒(KHV)的方法,本研究结合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,根据RAA引物设计原则,以KHV Sph基因保守区为靶位点,设计5对引物并筛选出5号引物作为最优引物,在其下游引物、探针的5'端分别标记Biotin、FAM荧光基因。采用方阵法对RAA反应时间和温度等条件优化,结果显示,该检测方法在34℃~40℃恒温反应10 min即可实现对KHV目的基因片段的有效扩增,并且扩增产物结果可直接观察,由此初步建立了KHV的RAA-LFD检测方法。特异性试验结果显示,建立的RAA-LFD检测方法与鲤浮肿病毒(CEV)、鲫造血器官坏死病毒(CHNV)、流行性造血器官坏死病毒(EHNV)、蛙虹彩病毒(BIV)等常见水生动物病原核酸均无交叉反应。敏感性试验结果显示,该方法对重组质粒标准品p EASY-KHV的检测限为50拷贝/μL,与行业标准常规PCR的敏感性相当。重复性试验结果显示,该方法对5份p EASY-KHV的检测结果均一致;对室温放置7 d的p EASY-KHV检测结果也均一致。采用该方法和常规PCR对60份临床样品检测,结果显示二者的阴性、阳性符合率以及总符合率均为100%。本研究首次建立了用于检测KHV的RAA-LFD方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好、操作方便,可用于KHV的临床样品检测,为KHV现地检测提供了一种简便、快捷的技术手段。

摘要：为了快速确诊锦鲤疱疹病毒(koi herpesvirus,KHV),本试验建立了KHV双重PCR检测方法。根据锦鲤疱疹病毒的SphⅠ-5基因和胸腺嘧啶脱氧核苷激酶(thymidine kinase,TK)基因设计特异性引物,优化反应条件,建立了KHV双重PCR检测方法。结果表明,建立的方法简单、灵敏、准确,一个反应体系可同时扩增292bp和410bp两个基因片段,可有效用于KHV的检测。

摘要：为了给鲤浮肿病(carp edema virus disease,CEVD)的防控提供特异、灵敏、快速的检测方法,针对鲤浮肿病毒(carp edema virus,CEV)的P4a基因序列设计5条特异性引物,建立CEV的环介导等温扩增检测方法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)。结果表明该方法具有很高的特异性。最低可检出6 000拷贝/μL,检测灵敏度与Real-time PCR方法相当。对30个鲤及锦鲤养殖场样品进行检测并与Real-time PCR方法进行比较,该方法的检测结果符合率达到96.7%以上。本方法的建立及应用为CEVD的防控提供依据。

摘要：为研究瓜尔豆胶作为添加剂对饲料及肠道排泄物在水中稳定性的影响,本试验采用完全随机设计,对比添加0.2%、0.3%、0.4%的瓜尔豆胶及普通饲料在浸泡过程中溶失率、饲料及肠道排泄物浸泡液中总氮、总磷、COD含量的差异,共分为4组,每组5个重复,试验期为60 d。结果表明:添加瓜尔豆胶可降低饲料的溶失率,在5~15 min时间段均符合添加量越多其数值越低,并在浸泡30min后趋于平稳。饲料在浸泡液中总氮、COD含量分别在4 h与2 h有差异(P<0.05),其最高添加量组比普通饲料分别低58.8%、22.6%。测定肠道排泄物在水中的zeta电位情况可以看出,添加瓜尔豆胶可明显改善肠道排泄物在水中的稳定性,并且添加量越多其zeta电位数值越低(P<0.05),0.4%瓜尔豆胶组较普通饲料低57%。综合各种指标可以看出,添加瓜尔豆胶可以提高饲料及排泄物在水中的稳定性,降低其对环境的污染。

摘要：北京市是宫廷金鱼的发祥地之一,也是商品金鱼的重要产地。京郊开展金鱼养殖历史悠久,有深厚的文化底蕴,技术日渐成熟。本文结合北京市金鱼养殖现状,总结了庭院金鱼饲养的相关技术,以供广大金鱼养殖从业者参考。金鱼,是由鲫鱼进化而成的观赏鱼类,远在晋朝就有金鱼祖先——“赤鳞鱼”的文字记载。金鱼堪称中国的国粹,它身姿奇异、色彩绚丽,是天然的活艺术品,因而为人们所喜爱。

摘要：【目的】研究感染鲤浮肿病毒(Carp edema virus,CEV)镜鲤的组织病理特征及CEV在各组织中的分布规律,以期为鲤浮肿病的诊断和防控提供参考。【方法】利用HE染色观察发病镜鲤心脏、肝脏、皮肤、脾脏、肾脏、脑、鳃组织的病理变化情况;用免疫组织化学法检测CEV在镜鲤各组织的分布和蛋白表达情况;利用CEV P4a基因保守区域设计3条探针,于5′-端标记FAM进行原位杂交,检测CEV在镜鲤各组织的核酸分布情况;实时荧光定量PCR检测感染镜鲤各组织的病毒载量。【结果】HE染色观察发现,患病镜鲤的鳃丝肿胀、充血,鳃丝间有脱落堆积的红细胞和炎性细胞,肝脏细胞深染萎缩,胆小管出血,脾脏组织出现明显间隙并伴有出血,肾脏组织充血明显,肾小管有明显闭合现象。免疫组织化学结果显示,在患病鱼的鳃和肝脏组织中大量表达CEV P4a蛋白,在其他组织中也有少量表达。原位杂交结果显示,CEV核酸大量存在于鳃组织中,在心脏、脾脏和肾脏中均有少量阳性信号。实时荧光定量PCR结果显示,鳃组织病毒载量极显著高于心脏、肝脏、皮肤、脾脏、肾脏、脑组织(P<0.01)。【结论】感染CEV后,镜鲤内脏组织出现不同程度充血、出血,病毒主要分布在鳃,说明鳃是CEV增殖的最主要靶器官。

摘要：为了给传染性造血器官坏死病(Infectious Hematopoietic Necrosisvirus,IHN)的防控提供特异、灵敏、快速的检测方法,根据NCBI基因库中传染性造血器官坏死病病毒(Infectious Hematopoietic Necrosis Virus,IHNV)保守序列设计特异性引物和探针,建立IHNV的逆转录重组酶介导扩增(Reverse Transcription Recombinase-aid Amplification,RT-RAA)检测技术。结果表明,该方法具有很高的特异性。其最低可检出100 copies/μL,检测灵敏度与OIE建议的RT-PCR方法相当。对35份虹鳟(含金鳟)养殖场样品检测并与RT-PCR方法进行比较,该方法的检测结果符合率达到96%以上。本文建立的RT-RAA方法具有操作简便、灵敏度高、特异性好、检测周期短、不需要昂贵仪器,结合荧光探针能够实现实时检测以及现场快速检测等优点。该方法的建立及应用可为IHN防控提供新的有用的检测工具。

摘要：传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)是一种严重危害鲑鳟鱼类的重要传染性病原。为建立IPNV快速检测方法,根据IPNV VP2蛋白编码基因保守序列,设计并筛选出特异性引物和Taq Man探针,并优化筛选引物以及探针检测浓度、退火温度和退火时间,建立了一种实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对方法进行了评价。结果显示:该方法灵敏度高,对IPNV的检测限为5 copies/μL;特异性强,对传染性造血器官坏死病毒、鲤春病毒血症病毒、病毒性出血性败血症病毒、草鱼呼肠孤病毒、流行性造血器官坏死病毒等其他病毒核酸扩增均呈阴性;重复性良好,组内与组间重复平均变异系数均小于3%;用本研究建立的实时荧光定量RT-PCR方法,对40份经病毒分离鉴定的样品进行IPNV检测,符合率为100%。结果表明,本研究建立的方法具有快速、特异、敏感等优点,可检测病毒含量较低的组织样品,对于IPNV的快速检测更具优势。

摘要：以保障水产质量安全、提高管理服务水平为宗旨，采B／S模式，选用JAVA为基础开发平台，以Oracle为后台数据库，采用电子地图的展现形式，研究开发水产资源与水环境监测管理系统，实现对全市水产资源进行系统、科学的管理，对全市水环境质量进行实时监测和预警，并面向不同用户提供个性化水产信息服务，为水产养殖业的发展提供基础性的资源支撑条件，为水产技术推广部门的业务能力拓展提供全面的支持。