摘要：二代测序相较于毛细管电泳技术(capillary electrophoresis, CE),以其体系中可容纳更多的基因座而在法医学实践中更具潜力和价值。MiSeq FGx^(TM)系统是专为法医学设计研发的一个测序平台,其配套试剂盒Forenseq DNA Signature Prep kit具有较高的灵敏度和准确度。本实验利用该试剂盒对41份家系样本进行测序,结果发现,58个STR基因座中有26个基因座出现了等位基因亚型,等位基因总数目增加了79个;与CE一致性上,有1份样本在DYS392基因座出现缺失,推测应与试剂盒引物扩增效率有关,另外还有8份样本在DXS7132基因座出现与CE不一致的情况,通过Sanger测序以及使用其他软件分析后,排除扩增失败,确认是生物信息分析问题。实验证明,二代测序相比于毛细管电泳技术有很多优势,不过目前在数据分析方面还存在一些问题,需要不断优化完善所涉及的生物信息分析方法。随着未来相关技术与标准的不断完善,二代测序会逐渐应用于法医学实践中。

摘要：目的构建一套猪的STR复合扩增体系,并进行体系验证。方法筛选出猪的12个STR基因座:SW240、S0386、S0655、PigSTR4C、PigSTR5C、PigSTR7B、PigSTR11B、387A12F、PigSTR13E、PigSTR14A、PigSTR15A、PigSTR17A,并结合性别位点Amelogenin基因座设计荧光标记引物,优化反应条件,构建出复合扩增体系。结果成功构建了一套包含猪的12个STR基因座和1个性别位点的复合扩增体系。体系的最佳条件为10μL体积,60℃退火温度,28次循环。体系的准确性、一致性、均衡性、稳定性、种属特异性、多态性均良好,灵敏度达0.125ng。12个基因座的累积个体识别率为0.999999999999961,累积随机匹配概率为3.9208×10^-14,累积非父排除率为0.9952。结论本文构建的猪复合扩增体系可以用于涉及猪的个体识别和亲子鉴定的案件鉴定。

摘要：目的制备标准分子量DNA片段混合物。方法选取pMD18-T载体部分序列作为插入片段,设计引物,制备包含不同大小的标准分子量片段的克隆。大量培养细菌提取质粒,用双酶切、连接荧光接头的方法制备不同大小的带有荧光的标准分子量片段,混合,纯化,最终获得标准分子量片段混合物(内标)。结果用分子克隆方法制备出具有实用性的标准分子量片段混合物,其单个标准分子量片段大小分别为80bp、124bp、194bp、224bp、254bp、304bp、349bp、399bp、424bp、454bp。并且这些标准分子量片段混合物可以准确地对DNATyper15试剂盒的扩增产物进行检测。结论应用该方法制备了能满足研究和实验室要求的标准分子量片段混合物,为DNA分子量标准物标准品的制作提供了一种新的方法。

摘要：目的通过对人类DNA进行突变基因检测推断该DNA供者是否患特定遗传病,建立对DNA样本突变检测的方法,运用于法庭科学的DNA来源人特征刻画领域,为案件侦查提供线索。方法根据遗传性耳聋、β-地中海贫血、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症三类遗传疾病各突变位点在中国人群中的出现概率,挑选了20个位点,设计引物,利用等位基因特异性PCR和毛细管电泳技术构建推断这三类遗传疾病的PCR检测体系。结果构建了包含20个突变位点,能够同时检测遗传性耳聋、地中海贫血、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)三类遗传疾病的毛细管电泳复合扩增实验体系。结论在法医学实验室开展检材DNA来源人的疾病特征推断是可行的。通过进一步研究发展,该技术有望在刑事案件侦查中发挥作用。