摘要：目的 对大鼠重复给予重组B群脑膜炎球菌疫苗,考察该创新疫苗的非临床安全性和免疫原性,为临床设计人用剂量及临床毒副反应的监测提供参考依据。方法 使用SD大鼠,设计阴性对照组、佐剂对照组、疫苗低剂量组(每只1剂)和高剂量组(每只3剂)4个主试验组及3个卫星组。于第0、3、6、9、12周分别肌肉注射,进行临床观察和解剖观察,并对多种组织脏器进行病理学检查。检测体质量、食量、体温、血细胞计数、凝血功能、血液生化、眼科、T淋巴细胞亚群、细胞因子、血清特异性IgG抗体和杀菌抗体等指标。结果 低、高剂量重组B群脑膜炎球菌疫苗均能产生高水平的结合抗体,免疫血清具有较强活性的杀菌抗体。低、高剂量组疫苗可引起大鼠中性粒细胞、单核细胞及淋巴细胞显著升高,血红蛋白和红细胞比容显著降低。与给药相关的改变还表现为血清球蛋白升高,白蛋白降低,与之伴随的A/G值降低。4周恢复期后均可恢复正常。与佐剂和疫苗免疫相关的组织病理学改变为注射局部可见轻微至中度肉芽肿性炎症、急性炎症,坐骨神经外膜单个核细胞/混合细胞浸润、增生,淋巴结髓索浆细胞数目及粒细胞系增多等。结论 重组B群脑膜炎球菌疫苗对SD大鼠具有良好的免疫原性和安全性,未见免疫毒性反应,可见与铝佐剂和免疫反应相关的外周血液指标变化以及注射部位炎症。本试验剂量下,重组B群脑膜炎球菌疫苗未见不良反应剂量(no observed adverse effect level, NOAEL)为每只3剂。

摘要：目的 使用响应面法(response surface methodology, RSM)对重组大肠埃希菌fHBP-B-1/BL21(DE3)的发酵条件进行优化,以提高目的蛋白表达量。方法 在单因素试验的基础上,利用Plackett-Burman试验筛选出对目的蛋白表达有显著影响的因素;再用最陡爬坡试验及Box-Behnken设计进一步优化试验条件并进行验证。结果 单因素试验结果显示,在酵母抽提物质量浓度为12.500 g/L、硫酸镁质量浓度为0.250 g/L、初始pH为6.00、诱导培养时间为8 h、诱导温度为35.00℃时,目的蛋白表达量最高,为363.04μg/mL。酵母抽提物质量浓度、硫酸镁质量浓度及诱导培养温度是影响目的蛋白表达量的显著因素。发酵条件优化后,酵母抽提物质量浓度为10.500 g/L、硫酸镁质量浓度为0.220 g/L、初始pH为6.00、诱导培养时间为4 h、诱导培养温度为37.50℃时,可以获得425.62μg/mL的目的蛋白,较单因素试验结果提高了17.25%。结论 重组大肠埃希菌fHBP-B-1/BL21(DE3)的发酵条件优化后,目的蛋白的表达量明显提升,为重组B群脑膜炎球菌疫苗后续工艺的开发奠定基础。

摘要：目的采用双水相萃取技术对重组B群脑膜炎奈瑟菌H因子结合蛋白A(fHBP-A)进行分离纯化,研究不同双水相萃取体系对fHBP-A粗提纯化的影响,应用响应面法优化fHBP-A在PEG/(NH_(4))_(2)SO_(4)双水相体系中的萃取工艺。方法首先建立PEG 2000/(NH_(4))_(2)SO_(4)、PEG 4000/(NH_(4))_(2)SO_(4)、PEG 6000/(NH_(4))_(2)SO_(4)和乙醇/(NH_(4))_(2)SO_(4)共4种双水相萃取体系相图;然后考察PEG相对分子质量、PEG质量分数、(NH_(4))_(2)SO_(4)质量分数、萃取体系pH这4个因素对fHBP-A萃取率、下相中fHBP-A纯度的影响;最后采用Box-Behnken试验设计以及响应面分析对fHBP-A双水相萃取工艺进行优化。结果确定fHBP-A双水相萃取的最佳工艺条件为PEG 4000质量分数为28%、萃取体系pH为6.0、(NH_(4))_(2)SO_(4)质量分数为13%。此条件下fHBP-A纯度达到68.11%。结论采用优化的工艺可以较好地提取及初步纯化fHBP-A,为进一步fHBP-A的纯化研究奠定基础。