摘要：通过添加不同含量的茶多酚提取物修饰大豆分离蛋白制备水包油乳液,考察大豆分离蛋白乳液的界面张力、蛋白吸附比例、乳液粒径以及Zeta电位等性质变化,探究茶多酚对大豆分离蛋白乳液性质和界面蛋白置换的影响。实验结果表明:添加茶多酚后,大豆分离蛋白的界面张力升高;大豆分离蛋白溶液(1%,质量分数)按照9∶1(质量比)与大豆油混合后,经过高速剪切和超声制备成水包油乳液,添加茶多酚制备的乳液稳定性提高,与空白对照组相比,当茶多酚添加量为0.04%时,乳液平均粒径从1.702μm显著下降至1.203μm(P<0.05),乳液的蛋白吸附比例从9.22%显著上升至20.68%(P<0.05),Zeta电位绝对值从25.7 mV显著上升至27.1 mV(P<0.05);大豆分离蛋白在油-水界面上具有抗胆盐置换的特性,由茶多酚修饰的大豆分离蛋白更加难以被胆盐置换,这可能是添加茶多酚后大豆分离蛋白具有较强的静电相互作用以及较厚的界面层导致的。肠道中的脂质消化是界面过程,探究脂滴界面上蛋白与胆盐的置换反应对研究脂质代谢和食品精准设计具有指导作用。

摘要：应用微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)技术,建立婴幼儿配方乳粉中双歧杆菌定量检测方法。以双歧杆菌的单拷贝特异性基因rpsL为目标基因设计引物探针,对ddPCR条件进行优化,考察方法的特异性、灵敏度和重复性,并与平板计数方法进行对照验证。结果表明,建立的方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性。细菌纯培养液的检出限为296 CFU/mL,模拟样品检出限为7 300 CFU/g,不与10种近缘乳酸菌发生交叉反应,且重复性较好,采用已建立的ddPCR方法和平板计数方法对市售婴幼儿配方乳粉样品进行检测,2种方法测定值结果偏差小于10%,结果一致性较好。本研究建立的ddPCR方法对婴幼儿配方乳粉中的双歧杆菌定量检测能够更快速、灵敏、准确,具有一定的应用前景。

摘要：目的建立一种能够快速准确鉴定克罗诺杆菌的实时荧光聚合酶链式反应(PCR)方法,并对食品样品和人工污染样品进行克罗诺杆菌检验。方法根据克罗诺杆菌DNA旋转酶B亚基(gyrB)基因保守区序列设计引物和探针。通过特异性试验、绝对灵敏度、相对灵敏性试验、抗干扰试验对所建立方法进行方法学验证。采用人工污染样品增菌液进行方法灵敏度试验。结果本研究建立的方法能够特异性扩增7种克罗诺杆菌,但对与其亲缘关系较近的其他肠杆菌及食品中较为常见的其他致病菌均无扩增,表明本研究建立的方法具有很好的特异性和抗干扰能力。采用阪崎克罗诺杆菌验证绝对灵敏度达1~10 pg,相对灵敏度可以达到10^(3)CFU/mL。在基因组水平和培养物水平均具有很好的抗干扰能力。人工污染样品在36℃增菌24 h后检测灵敏度可以达到10^(0)CFU/mL。结论本研究所建立的实时荧光PCR方法对婴幼儿配方食品样品中的克罗诺杆菌的检测具有快速、特异、灵敏和稳定的特点,可以为传统婴幼儿配方食品中的克罗诺杆菌的检验提供技术参考。

摘要：目的:利用Real-time PCR建立酸乳中乳双歧杆菌的快速精准鉴定方法。方法:选取乳双歧杆菌atpD基因,利用Primer Express 3.0.1设计引物探针,进而验证引物探针的特异性、灵敏度和抗干扰能力,最后应用到17种酸乳样品的检测。结果:所设计的引物探针可以有效地扩增出乳双歧杆菌,而对于20种乳酸菌和18种常见的致病菌都不能扩增,具有良好的特异性;其灵敏度在DNA水平可以达到1 pg/μL,在菌浓度水平可以达到10^(3)cfu/mL;并且不受酸乳中的嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌的干扰,具有很好的抗干扰能力。利用RT-PCR技术能很好地鉴定17种酸乳中乳双歧杆菌。结论:该研究建立了酸乳中快速精准鉴定乳双歧杆菌的方法,对食品中双歧杆菌鉴定起到积极推动作用。

摘要：目的 建立一种基于实时荧光聚合酶链式反应快速检测包装饮用水中铜绿假单胞菌的检测方法。方法 针对选择铜绿假单胞菌gyrB基因设计特异性引物和探针。250mL水样经膜过滤后经过短时培养(36℃、4 h),优化提取菌体DNA流程,预冻干聚合酶链式反应预混液,采用实时荧光聚合酶链式反应进行检测。结果 样品中铜绿假单胞菌量为≥1 CFU/250 mL时,检测结果均呈阳性,整个检测用时6 h左右。该方法检测结果与国家标准方法(GB8538—2022)检测结果一致。结论 该方法特异性强、灵敏度高、用时短,可为预包装饮用水中铜绿假单胞菌监管和生产企业质控提供更为快速、精准的技术手段。

摘要：由产气荚膜梭菌引起的包装饮用水污染在世界范围内的报道越来越多。产气荚膜梭菌既是水微生物污染的一种指示菌,同时也是一种致病菌,对人类生命和健康构成潜在威胁。该研究开发了一种基于实时荧光PCR的快速检测包装饮用水中的产气荚膜梭菌新方法。该方法针对cpa基因设计引物和探针,用于检测产气荚膜梭菌。50 mL水样膜过滤后在(36±1)℃下孵育4 h,提取菌体DNA,采用实时荧光PCR检测。结果显示该方法特异性强,检出限为1 cfu/50 mL。PCR反应混合物预混冻干和核酸提取优化使整个检测过程用时≤6 h,实时荧光PCR检测结果与国家标准方法GB 8538—2016检测结果一致。因此,该实时荧光PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强、检测时间短等特性,为日常包装饮用水中产气荚膜梭菌监管和质控提供了新的检测技术手段。

摘要：利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-fqPCR)技术对益生菌粉中的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)进行快速精准鉴定。选取植物乳杆菌的16S rRNA基因,利用Primer Express 3.0.1设计引物探针,验证引物探针的特异性、灵敏度和抗干扰性,建立植物乳杆菌的RT-fqPCR检测方法。益生菌粉中菌株未经过平板培养分离,直接对样品进行脱氧核糖核酸(DNA)提取,利用RT-fqPCR技术对植物乳杆菌进行快速精准鉴定。结果表明,所设计的引物探针可以有效的扩增植物乳杆菌,具有良好的特异性;灵敏度在DNA水平可以达到1 pg/μL,并且具有很好的抗干扰性,对12种益生菌粉样品直接提取的DNA进行RT-fqPCR快速鉴定,其中有10种益生菌样品粉检测出植物乳杆菌。

摘要：该研究通过系统发育树分析确定目标基因,并设计引物和探针,建立一种婴幼儿配方乳粉中动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animalis ***)的实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-fqPCR)鉴定方法。通过特异性、灵敏性和抗干扰实验对该方法进行验证,并对市售的64份标识含有动物双歧杆菌乳亚种的婴幼儿配方乳粉样品进行检测。结果表明,atpD基因在动物双歧杆菌乳亚种间具有较高的种间特异性,种间差异率>10%,确定其为目标基因。基于该基因建立的RT-fqPCR方法能够特异性的检测动物双歧杆菌乳亚种,检测绝对灵敏度可以达到1 pg/μL,相对灵敏度可以达到10^(3) CFU/mL;基因水平和培养物水平抗干扰能力良好。采用该方法从64份标识含有动物双歧杆菌乳亚种的乳粉样品中均能检测出动物双歧杆菌乳亚种,表明基于atpD基因建立的RT-fqPCR方法能够快速准确的对动物双歧杆菌乳亚种进行检测。

摘要：该研究通过系统发育树分析确定目标基因,根据目的基因设计特异性引物和探针,建立一种能够快速准确鉴定发酵乳中嗜热链球菌的实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-fqPCR)法,通过特异性、灵敏性和抗干扰实验对所建立方法进行验证,并使用该方法对市售的60份标识含有嗜热链球菌的发酵乳样品进行检测。结果表明,recA基因具有种间特异性,种间差异率>10%,以其为目的基因建立的RT-fqPCR方法能够特异性的检测嗜热链球菌;绝对灵敏度达1 pg/μL,相对灵敏度达10^(3) CFU/mL;在培养物水平和基因组水平抗干扰能力良好。采用该方法从60份标识含有嗜热链球菌的发酵乳样品中均能检测出嗜热链球菌,说明实时荧光定量PCR方法能够快速、准确的对发酵乳中嗜热链球菌进行检测。

摘要：沙门氏菌(Salmonella)是食品检测过程中最常见的致病菌之一,亚利桑那沙门氏菌(Salmonella arizonae)又是沙门氏菌中比较难鉴定的亚种。该实验通过实时荧光聚合酶链式反应(PCR)方法快速准确的检测亚利桑那沙门氏菌和其他沙门氏菌。根据GenBank公布的亚利桑那沙门氏菌和其他沙门氏菌gud D基因序列,分别设计引物和Taqman探针。使用10株不同血清型的沙门氏菌标准菌株、88株沙门氏菌分离株和29株食品中常见食源性致病菌进行实时荧光PCR特异性实验。结果显示,该实验所设计的引物探针特异性非常好。实时荧光PCR灵敏性试验结果表明,检测灵敏度可达到1～10 CFU/m L的添加浓度。经模拟污染样品验证,所建立的实时荧光PCR方法与传统方法的检测结果相一致,具有检测周期短、操作简便的优势。