摘要：各有关单位:为促进北京市国际文物艺术品市场蓬勃发展,健全文物艺术品展示交易体系,打造国际文物艺术品交易展示中心,北京市商务局、中共北京市委宣传部、北京市文物局、北京市文化和旅游局、北京海关联合制定了《北京市着力打造国际文物艺术品交易展示中心的若干措施》,现予以印发,请各单位结合实际认真贯彻执行。

摘要：选取创伤弧菌单拷贝基因met为靶基因,设计引物探针,建立对创伤弧菌准确定量的微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)方法,并进行特异性、灵敏度和重复性实验,同时与实时PCR(real-time PCR)方法进行比较。结果显示,所建立的ddPCR方法可以快速、高效地检测出创伤弧菌,细菌纯培养物中其定量限可达323拷贝数/mL,检测限可达61拷贝数/mL,人工污染牡蛎样品中能最低能检测到1.13×10^2拷贝数/g的目标菌。对人工污染样品中目标菌的检测,ddPCR的定量结果约为平板计数结果的1.4倍,比real-time PCR方法的检测更加稳定准确。本研究建立的ddPCR检测方法能快速准确、特异、灵敏地定量检测创伤弧菌。

摘要：为建立食品中Escherichia coli O157:H7的微滴数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)快速定量检测方法,针对*** O157:H7的特异性单拷贝基因hlyA设计引物探针,并进行特异性、灵敏度和重复性实验,同时通过人工污染三文鱼样品的检测,比较平板计数法、real-time PCR和ddPCR方法的测定值效果。结果表明,所建立的*** O157:H7 ddPCR检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性。细菌纯培养液中定量限为105 CFU/mL,检出限为25 CFU/mL,人工污染三文鱼样品中检出限为110 CFU/g。对不同人工污染水平的三文鱼样品,ddPCR与平板计数的测定值结果无显著性差异(P>0.05),比real-time PCR方法的测定值结果更加稳定、准确。因此,本研究建立的ddPCR方法能够更加快速、准确、灵敏、特异地绝对定量检测食品中*** O157:H7。

摘要：葡萄灰皮诺病毒(Grapevine Pinot gris virus,GPGV)最早于2012年由意大利研究人员利用高通量测序技术发现(Giampetruzzi et al.,2012),该病毒可引起葡萄叶片褪绿、斑驳、皱缩、变形等症状,导致葡萄植株发育不良、成熟期延迟、产量降低、果实腐烂,还可与其它病毒共同作用产生复合负面效应。目前,葡萄灰皮诺病毒病尚缺乏有效防治药剂,为防控该病毒病的发生和传播,本研究拟设计特异性引物和探针,建立GPGV微滴数字RT-PCR(droplet digital reverse transcription-polymerase chain reaction,ddRTPCR)检测方法,以期提高GPGV截获率,为及时防控葡萄灰皮诺病毒病的发生和蔓延提供技术支持。

摘要：在序列比对分析的基础上,设计2对引物和2条MGB探针,经体系优化建立了可快速鉴别检测两种马梨形虫病病原(马泰勒虫和驽巴贝斯虫)的双重荧光PCR检测方法。该方法可分别检出22和31基因拷贝的虫体DNA,且不与其他马病病原发生交叉反应。应用建立的荧光PCR检测方法,对采自进出口马匹的10份马全血和20份马血清进行检测,结果从马全血中检出2份马泰勒虫阳性样品。使用一对马泰勒虫EMA1全基因扩增引物,从2份阳性样品中扩增了EMA1基因。克隆测序后,对该基因全序列进行分析,证实其为马泰勒虫特异基因序列;2份样品的基因序列相似性为98.9%,存在6个氨基酸变异;2个样品中的EMA1基因不完全一致,表明2个感染样品中的虫体可能为不同的马泰勒虫虫株。

摘要：为建立流行性造血器官坏死病毒的焦磷酸测序检测方法,本研究针对流行性造血器官坏死病毒ORF65基因的保守区域进行分析,设计扩增引物及测序引物,经PCR扩增后对PCR产物进行焦磷酸测序,通过对反应条件和反应体系的优化,成功建立了该检测方法。试验结果显示,该方法扩增基因片段长度为137 bp,焦磷酸测序长度为38 bp,能够特异性检测出流行性造血器官坏死病毒,最低核酸检测限为0.5 pg/μL,与常规PCR检测方法的符合率达100%。本研究建立的流行性造血器官坏死病毒焦磷酸测序检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为流行性造血器官坏死病毒的快速检测提供了一种可行方法。

摘要：小孔异担子菌Heterobasidion parviporum是一种侵染性强、危害大的针叶树腐朽菌,在我国尚未分布,有随进境木材传入我国的风险。为建立小孔异担子菌的竞争性等位基因特异性PCR(kompetitive allele specific PCR,KASP)检测方法,本研究对收集的异担子菌属及其近似属的223条基因进行多序列比较分析,从小孔异担子菌GAPDH基因筛选出1个SNP位点作为检测标记,然后参照KASP引物设计要求设计引物Hpar-FAM-F1、Hpar-HEX-F2、Hpar-R,用于该分子标记的KASP检测。测试结果表明,利用开发的分子标记可以成功将小孔异担子菌与变孔异担子菌、西方异担子菌等22种近似种明确分型,说明该标记特异性好;灵敏度测试发现,将小孔异担子菌DNA浓度从100 ng/μL按10倍梯度稀释后,10^(-4)和10^(-5)稀释梯度的DNA反应结果与双蒸水接近,说明该标记的检测最低浓度可达0.1 ng/μL。阳性样品模拟分别使用担子果粉末与木材混合提取DNA和直接在木材样品中添加小孔异担子菌DNA进行KASP检测,结果表明,模拟阳性样品与参照近似种在坐标轴上表现出典型的基因分型,该KASP标记可以准确鉴定针叶木材上的小孔异担子菌。因此,本研究建立的KASP方法可用于检测进境针叶材上的小孔异担子菌。

摘要：自岸田文雄执政以来,日本政府一直力推“新资本主义”理念,旨在充分利用政府与市场合作应对重大问题的机制,实现经济社会可持续发展。2022年5月,日本出台《新资本主义宏伟设计和实施计划》,明确提出实现“新资本主义”需要强大的科技支撑,并将加大对人、技术、绿色化、数字化以及创业的投资。

摘要：在序列比对分析的基础上,分别针对禽败血支原体脂蛋白基因、滑液支原体16S rRNA基因以及β-actin(内参)设计3对引物和3条探针,经体系优化建立了可快速鉴别检测2种禽类最重要的支原体(禽败血支原体和滑液支原体)的多重荧光PCR检测方法。经概率回归分析显示,该方法可分别检出4.48和4.89基因拷贝的DNA,且不与其他禽病病原发生交叉反应。应用建立的荧光PCR检测方法,对送检的358份拭子进行检测,检出败血支原体阳性6份,滑液支原体阳性2份,与OIE推荐的常规PCR方法结果一致。本研究建立的含内参靶标的多重荧光PCR方法不仅特异性强、灵敏度高,而且可对采样和检测全过程进行质控,可用于禽败血支原体和滑液支原体的快速筛查。

摘要：目的建立乙脑病毒重组酶介导逆转录核酸扩增(RT-RAA)快速检测方法。方法根据乙脑病毒NS1基因片段设计引物和探针,通过优化筛选确定最佳引物组合,建立乙脑病毒RT-RAA检测方法,并对其检测灵敏度和特异性进行测试。结果建立的乙脑病毒RT-RAA检测方法灵敏度可达10拷贝,方法检测时间少于20 min,最快2-3 min即可观察到明确荧光扩增信号,与登革病毒、黄热病毒、寨卡病毒、基孔肯雅病毒及正常血液样本无交叉反应。结论建立的乙脑病毒RT-RAA检测方法灵敏、快速、特异性好,适用于口岸现场乙脑病毒的快速检测。