摘要：目的　研究并优化微球乙型肝炎疫苗的配方 ,观察微球乙肝疫苗对温度的稳定性。方法　用明胶包裹HBs制备微球 ,设计不同配方及不同粒径微球乙肝疫苗、冻干微球乙肝疫苗于不同温度放置一定时间 ,免疫动物观察免疫效果。结果　微球疫苗HBs包裹率 >90 % ,微球疫苗的免疫效果受佐剂配方及制备程序等因素影响 ,10 μm的微球(2 5 4μm) (P <0 0 2 )及铝佐剂组 (P <0 0 1)。接种动物后可维持高水平抗 HBsIgG抗体 (2 2 0～ 2 80mIU ml) 12个月以上 ;含铝佐剂的微球疫苗免疫效果优于不含铝的微球疫苗 (P <0 0 5 ) ;单纯明胶微球与HBs混合后免疫可增强抗 HBs反应 ,稍低于包裹HBs的微球组。冻干HBs微球对温度稳定性优于铝佐剂吸附HBs。结论　 <10 μm的微球疫苗和含铝佐剂的微球疫苗可产生最佳的免疫效果 ;冻干微球疫苗可望解决铝佐剂吸附乙肝疫苗需要冷链的问题。

摘要：目的构建二硫键稳定的抗TNF-α单链抗体原核表达质粒,并进行表达和生物学特性鉴定。方法利用SWISS-PROT软件分析抗TNF-α单链抗体(scFv)的结构,并结合二硫键稳定的单链抗体(ds-scFv)的突变位点设计原则,确定其突变位点,采用PCR定点突变的方法,构建二硫键稳定的抗TNF-α单链抗体的表达质粒pGEX-4T-1-ds-scFv,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。采用十二烷基肌氨酸钠(Sarkosy)l对表达的目的蛋白进行可溶性纯化,并进行抗原结合活性、相对稳定性及细胞毒中和活性检测。结果重组表达质粒pGEX-4T-1-ds-scFv经菌落PCR及测序鉴定,证明构建正确。抗TNF-α的ds-scFv的表达量占菌体总蛋白的16.6%,主要以包涵体形式表达;纯化的目的蛋白纯度可达94.4%;经ELISA及Western blot验证,ds-scFv与TNF-α抗原的结合活性与scFv相近;相对稳定性优于scFv;在同样的抗体浓度下,scFv和ds-scFv的细胞毒中和活性略低于亲本鼠单抗,ds-scFv略高于scFv。结论已成功构建了二硫键稳定的抗TNF-α单链抗体的原核表达质粒,并获得有活性的目的蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

摘要：本刊继续教育园地从 2 0 0 1年第 1期开始 ,连续刊出了《医学研究统计方法应用》系列讲座 ,共 18讲 ,内容包括研究设计的统计学原则、随机对照研究、样本量的确定、数据类型与质量控制、常用的数据统计分析方法、统计图表的正确应用、医学参考值范围的确定、重复测量结果的比较、随访资料分析、荟萃分析、循征医学、统计结果表达与解释、常用数据库软件与统计软件介绍等内容 ,深受读者的欢迎 ,很多读者来信讲到 ,讲座的内容非常实用 ,对解决工作中遇到的问题有很大帮助。在此 ,本刊编辑委员会和编辑部对该讲座所有撰稿人、广大读者和同道对本栏目的支持和关注表示深深的谢意。 2 0 0 4年第 1期开始 ,将连续刊登流行病研究方法介绍 ,内容包括突发卫生事件的流行病学调查与应急处理、突发卫生事件的信息收集与分析利用、爆发疫情的调查及疫区处理、突发性中毒事件的调查及现场处理、生物恐怖事件的现场调查与应对、自然灾害地区的流行病学调查与防疫措施、突发性伤害事件的预警与应急等。每期刊出一篇 ,文后附有测试题 ,以帮助读者自学与掌握讲座内容。由于时间较紧 ,题目设置可能有不妥之处 ,请大家及时提出 ,同时也可将您的需求告诉我们 ,以便使本栏目办得更好、更实用。

摘要：目的比较A、B和C3种类型CpG-ODN在动物模型中的疫苗佐剂活性，为设计高活性的新型人用疫苗佐剂提供理论基础。方法用不同CpG-ODN刺激体外培养的小鼠脾细胞，检测上清中的IFN-γ和IgM，从而确定3种类型的CpG-ODN。以基因工程乙肝表面抗原（HBsAg）为模型抗原、不同类型CpG-ODN为佐剂免疫BALB／c小鼠，用间接ELISA法检测被免动物血清中抗原特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体。结果小鼠免疫结果表明，与A1（OH），对照组相比，3种类型CpG-ODN均具有良好的疫苗佐剂活性，但B和c型CpG-ODN诱生的抗原特异性IgG和IgG2a抗体水平远高于A型CpG-ODN。虽然A型CpG-ODN也能够显著增强总抗体水平，但并不改变IgG1和IgG2a抗体亚型的比值。这与B和c型CpG-ODN能够极大地促进TH1类免疫应答并降低IgG1／IgG2a比值明显不同，提示不同类型CpG-ODN可能通过不同机制起到疫苗佐剂作用。结论不同类型CpG-ODN具有不同疫苗佐剂活性，B和C型CpG-ODN在小鼠体内的体液免疫佐剂效果优于A型CpG-ODN。

摘要：本研究中共用了４对引物，所设计的Ｐｏｌｉｏ０１、Ｐｏｌｉｏ０２引物对与核苷酸序列中高度保守的５’端非编码区的序列匹配，它们给我们提供了待检样品中是否有脊髓灰质炎病毒核苷酸的证据，扩增产物为１０９ｂｐ。在ＶＰ１区我们设计对３对区分Ｓａｂｉｎ株疫苗病毒３个血清型及用于区别脊髓灰质炎病毒疫苗株和野毒株的引物，各引物序列之间无互补，识别同型Ｓａｂｉｎ疫苗病毒准确可靠。Ｓａｂｉｎ１１。

摘要：目的尝试将ＣＥＡ单链抗体在大肠杆菌中进行高效表达。方法以ＣＥＡ单链抗体基因为模板，设计４对引物，ＰＣＲ扩增，将４条ＤＮＡ扩增片段分别插入原核表达载体ｐＢＶ２２０中；重组质粒转染大肠杆菌ＴＧ１，４２℃热诱导外源蛋白的表达；包涵体经８ｍｏｌ／Ｌ脲溶解及谷胱甘肽系统复性；过离子交换柱进行纯化；ＥＬＩＳＡ夹心法测活性。结果得到了ＳＤ序列与起始密码ＡＴＧ分别相隔着５，６，７，８个核苷酸的重组质粒；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示转染入重组质粒的ＴＧ１菌经热诱导后有分子量约为３×１０４的外源蛋白，表达量最高达９３０ｍｇ／Ｌ培养液，约占菌体总蛋白的５０％；ＥＬＩＳＡ活性测定结果表明复性后的ＳｃＦｖ有较高的抗原结合活性。结论ＣＥＡ单链抗体在大肠杆菌中获得了较高水平的表达，且经复性后有较高的抗原结合活性。

摘要：目的分析b型流感嗜血杆菌(Type b Haemophilus influenzae,Hib)不同培养基发酵液中蛋白质、核酸含量及不同培养基添加物对发酵产物的影响,优化Hib发酵培养基。方法设计不同配方的Hib摇瓶培养基,经摇瓶培养,检测发酵液上清中的蛋白质及核酸含量,选择合适的基础培养基,并在此基础上进行发酵罐培养,检测不同添加物(磷酸盐、钠盐、金属离子等)对Hib多糖复合物收获量、菌体形态及发酵液颜色的影响,并发酵3批,进一步检测多糖复合物中蛋白质和核酸的含量。结果培养基介质不同,其发酵上清液中的蛋白质和核酸含量也不同,2号培养基(主要成分为酸水解酪素粉和酵母浸粉)发酵液蛋白质和核酸含量较低且稳定;培养基中不同添加物对Hib菌体形态、发酵液颜色及多糖复合物的收获量、质量和性状均产生不同的影响,其中b培养基发酵液菌体形态、多糖复合物收获量及质量均较好;3批发酵培养液中分别约有7%～10%的蛋白质和34%～42%的核酸被沉淀至多糖复合物中。结论选择2号培养基为Hib基础培养基,b培养基为发酵培养基,本实验为Hib疫苗培养基的优化和多糖抗原的纯化提供了实验依据。

摘要：目的　克隆人巨细胞病毒 (HCMV)gB基因并构建真核表达载体。方法　根据Genebank中HCMV核苷酸序列设计引物 ,并在引物的 5′端分别加入BamHⅠ、XhoⅠ限制性内切酶位点 ,特异性扩增gB编码基因片段。TA克隆后经双酶切、PCR、测序等鉴定重组质粒 ,再经双酶切、连接构建含HCMVgB编码基因的真核表达载体 ,转染COS7细胞 ,通过间接免疫荧光法 (IFA)检测该重组真核表达载体在COS7细胞中的表达。结果　重组质粒经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切成大小为 5 0kb与 2 7kb的片段 ,表明表达载体pcDNA3 1中插入了HCMVgB基因片段 ,测序结果表明读码框正确。重组表达载体pcDNA3 1 gB转染COS7细胞后 ,经IFA检测胞浆中可见黄绿色荧光。结论成功构建了pcDNA3 1 gB真核表达载体 。

摘要：本文报导了用于基因重组与基因合成实验设计的软件系统的建立.此系统由30个功能模块组成,为研究者提供了包括在DNA分子上寻找限制性内切酶位点、核酸分子片段之间同源性比较,基因化学合成的实验设计、特定顺序分析引物及核酸杂交探针的设计、阅读框的查找等功能.此外,本系统可以对外来数据库的资料进行援引和进一步分析,为分子生物学的研究提供有价值的信息.

摘要：目的以适用生物统计学方法指导麻疹疫苗生产工艺改进,提高疫苗质量。方法总结疫苗病毒滴度分布规律,确定疫苗标准参考品使用参数及改进麻疹疫苗生产工艺设计。细胞维持液中加入蔗糖明胶病毒稳定剂,提高疫苗病毒原液滴度,改进冻干保护剂配方,减少疫苗冻干过程滴度损失,过滤并稀释高滴度病毒原液,提高疫苗产量。结果同一条件下生产疫苗病毒滴度为对数正态分布数据。病毒培养阶段加入稳定剂可提高麻疹疫苗原液病毒滴度,山梨醇可明显降低疫苗冻干过程滴度损失,并有效降低疫苗水分,疫苗的热稳定性未受原液稀释加工影响。结论疫苗病毒滴度属于对数正态分布资料,据此设计麻疹疫苗生产工艺改进实验,可以优化生产条件,并为其它疫苗生产提供参考。