摘要：依据HSV-1 Patton株糖蛋白D全基因序列,设计、合成一对引物,利用多聚酶链反应(PCR),从我国HSV-1 168株基因组DNA中扩增、克隆出糖蛋白D全基因序列,共1185bp,编码395个氨基酸,并将其推测的氨基酸序列同国外HSV-1 HFEM、SCl6、17和Patton株的糖蛋白D的氨基酸序列进行了详细比较,发现最保守的区域主要是除信号肽以外的胞外编码区。氨基酸的变异主要分布在信号肽区、跨膜区及胞浆内编码区。本工作对研究HSV-1糖蛋白D的结构和功能以及研制我国HSV-1基因工程疫苗都具重要意义。

摘要：目的研究合成肽ＷＬＤＰＲＨ的免疫反应性和对干扰素（ＩＦＮ）诱导的生物学活性的影响。方法根据我们早先的研究，已用中和抗体从噬菌体展示６肽库中筛选出了两个与ＩＦＮ－α有同源性的肽片段，将其中之一进行了人工合成（ＷＬＤＰＲＨ），并进行了同源性比较分析，体外竞争酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ），体外ＩＦＮ诱导抗病毒和抗增殖分析。结果计算机分析表明，人工合成肽ＷＬＤＰＲＨ与推理的Ｉ型ＩＦＮ受体结合区ＬｏｏｐＡＢ（２９－３５位）有相当的同源性。体外竞争ＥＬＩＳＡ实验表明，合成肽在２５μｇ／ｍｌ浓度时能特异性抑制ＩＦＮ－α与中和抗体４Ｃ１结合。体外抗病毒结果显示，干扰素在亚保护剂量时（２０～７０ｐｇ／ｍｌ）时，合成肽能提高ＩＦＮ－α作用细胞后的抗病毒活性，并且合成肽ＷＬＤＰＲＨ在１．４μｇ／ｍｌ时，ＩＦＮ－α抗病毒保护率从４０％提高到８６％，为最高保护率的最低剂量，但合成肽为１．４μｇ／ｍｌ，ＩＦＮ浓度为５～５５ｎｇ／ｍｌ时，对ＩＦＮ－α诱导的抗增殖作用不明显。结论用中和抗体筛选的短肽ＷＬＤＰＲＨ能影响ＩＦＮ分子作用模式，并且有可能模拟ＩＦＮ分子ＬｏｏｐＡＢ的结构和功能，这为免疫治疗及ＩＦＮ的小分子模拟设计奠定基础。

摘要：探讨研制能同时检测HBV、HCV、HIV、HAV、GBV-C/HGV和B19的微阵列监控芯片。根据病毒公开发表序列,序列比对,得出保守区域,设计病毒的特异性检测探针,同时设置阴性、阳性参照探针,制备监控微阵列。利用随机引物PCR方法标记样品中的病毒靶序列,标记产物与微阵列上的探针杂交,清洗、扫描后进行结果分析。通过对质粒或模式分子的检测以及经HBV、HCV、HIV临床标本的验证,发现该微阵列监控芯片具有良好的特异性。其对质粒的检测灵敏度可达102病毒拷贝数,对临床标本的检测灵敏度可达103病毒拷贝数。此外,该微阵列监控芯片可检测出病毒混合感染血清。为微阵列监控芯片应用于此六种血液病毒的检测打下一定的基础。

摘要：目的通过建立RNA干扰(RNAinterference,RNAi)抑制XJ160病毒复制的模型,在序列特异性、位置效应和量效关系等方面,探讨RNAi对XJ160病毒复制的影响,为进一步研究RNAi的抗病毒作用和机制奠定基础。方法按照siRNA(shortinterferencingRNA)的设计要求合成XJ160病毒特异siRNA,脂质体法转染BHK21细胞后感染XJ160病毒,通过测定病毒滴度、蛋白表达量及XJ160病毒RNA合成研究siRNA对XJ160病毒复制的抑制。结果成功建立了RNAi抑制XJ160病毒复制的模型,探讨了RNAi抑制该病毒复制作用的特点。结论外源导入的siRNA能够抑制XJ160病毒的复制,并且这种抑制作用具有明显的序列特异性、位置效应和存在量效关系等特点;siRNA是通过降解病毒RNA实现抑制病毒复制作用的。

摘要：目的构建用于宫颈癌治疗的HPV16E7E6重组腺病毒并评价其免疫效果。方法根据哺乳细胞使用密码子的偏嗜性设计HPV16E7E6融合蛋白表达优势密码子基因序列并合成。将合成的E7E6基因插入腺病毒重组穿棱质粒pCD316后，与Ad5腺病毒骨架质粒共转染293细胞，重组病毒经单斑纯化并进行目的基因插入及表达的鉴定。扩增纯化重组病毒后免疫小鼠，评价其免疫活性。结果PCR试验证明E7E6密码子优化基因成功插入Ad5病毒；Western blot检测结果表明重组腺病毒中E7E6优化基因能高效表达，该重组腺病毒免疫C57小鼠后，可诱发强特异性T细胞免疫应答，在小鼠体内能完全抑制5×10^4TC-1移植瘤细胞的生长。结论重组HPV16E7E6腺病毒可作为治疗HPV慢性感染或宫颈癌的候选疫苗。

摘要：目的在大肠埃希菌中高效表达重组人干扰素λ2(rhIFNλ2),并对其抗病毒活性进行初步研究。方法根据大肠埃希菌的偏爱密码子人工设计合成人干扰素λ2(hIFNλ2)的高表达基因,将其克隆到原核表达载体pBV220,在大肠埃希菌中进行表达,表达产物经变性、复性、阳离子交换层析及分子筛层析纯化,测定其抗病毒活性、种属特异性及抗HBV活性。结果在大肠埃希菌表达的目的蛋白占细胞总蛋白量的15%左右,纯化后的纯度达到90%以上,在WISH细胞上抗VSV活性约为1.5×106IU/mg。与rhIFNα2b比较,表达产物在非灵长类细胞上的抗病毒活性较在灵长类细胞上弱,目的蛋白在HepG2.2.15细胞上表现有与rhIFNα2b相似的抗HBV活性。结论hIFNλ2可以在大肠埃希菌内实现高效表达,表达产物具有抗病毒活性,有与rhIFNα2b相似的抗HBV活性,本型IFN有较严格的种属特异性。

摘要：目的　在细胞水平上 ,利用研制的SARS病毒全基因组芯片技术探讨人重组干扰素α2b抑制SARS病毒复制的分子机制。方法　根据已经发表的SARS病毒基因组全序列和生物信息学软件分析 ,设计包括SARS病毒全基因组的各个可能编码区的PCR引物 ;将所有PCR产物用来制备SARS病毒的全基因组cDNA芯片。利用该芯片来探讨人重组干扰素α2b抑制SARS病毒复制的分子基础。结果　通过PCR方法研制了SARS病毒全基因组的cDNA芯片 ,并说明cDNA芯片可以准确地检测SARS病毒各个基因的RNA水平。利用这一技术研究了干扰素抗SARS病毒的分子机制。结果表明 ,人重组干扰素α2b可以明显抑制SARS病毒复制过程中几乎所有病毒RNAs的转录 ,并呈现一定的剂量关系 ;并发现一个目前还没有确定功能的SARS病毒新基因 ,命名为U基因 ,转录最早 ,转录水平最高 ,对干扰素的抑制作用也很敏感 ;它可能在病毒的转录复制过程中发挥重要作用。结论　SARS冠状病毒cDNA芯片可以用来研究病毒复制的分子机制以及相关抗病毒药物包括干扰素的研究。本文在分子水平上研究了人干扰素α2b抑制SARS病毒复制的基因转录动态 。

摘要：为了获得人干扰素 ω(huIFN ω)在大肠杆菌中的高效表达,根据大肠杆菌的偏爱密码子,人工设计并合成了huIFN ω高表达基因,并克隆到原核表达载体pBV220,在大肠杆菌DH5α中实现了高效表达,目的蛋白占细胞总蛋白的15%左右,以包涵体形式存在。表达产物经变性、复性及阳离子和分子筛层析纯化,纯度达90%以上,产物的抗病毒活性约为1.0×108IU/mg,并具有体外促NK杀伤活性。此结果为进一步研究和开发重组huIFN ω奠定了基础。

摘要：肿瘤的快速生长主要依赖于新生血管的形成。血管内皮生长因子(VEGF)在刺激血管内皮细胞生长和诱导血管生成方面起重要作用。肿瘤组织因血管含量丰富,VEGF特异性受体的数目远高于邻近正常组织,因此可以将血管内皮生长因子和某些细胞毒素构建为融合毒素,特异性定位于肿瘤部位,通过抑制血管的增生达到抑制肿瘤的目的。国外自二十世纪九十年代后期开展这方面研究,国内尚少见此类报道。本文就此类融合毒素的设计及临床研究等方面的进展作一综述。

摘要：目的　研究我国首例从发热病人血清中分离的YN87448病毒的分子致病基础。方法　甲属病毒基因序列保守区设计引物,用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法扩增,再将扩增片段克隆到pGEMT载体。测定YN87448毒株非结构基因序列。结果　YN87448病毒非结构区基因序列为7613个核苷酸(不包括5′端帽子结构),编码非结构蛋白1(nsP1),非结构蛋白2(nsP2),非结构蛋白3(nsP3),非结构蛋白4(nsP4);有一个起始密码子(ATG)位于第60位碱基;含有2个终止密码子(TGA),分别位于基因组nsP3基因和nsP4基因的末端。YN87448病毒非结构区基因与辛德毕斯病毒家族中唯一能致成年小鼠死亡的***86株相应基因的核苷酸序列同源性为988%,但YN87448毒株不致成年小鼠死亡。与***86株相比,基因结构上有三点明显差异:YN87448毒株在nsP3区位于基因组5256bp5309bp含54个核苷酸的插入;位于基因组5603bp处3个核苷酸(AGT)的缺失;在nsP3和nsP4之间有乳白突变终止密码子(TGA)。此序列已输入GeneBank,序列号为AF103734。结论　YN87448为一株新的辛德毕斯病毒株。