摘要：细菌在长期进化过程中形成了设计精巧的蛋白传输系统,运送与寄主互作过程中产生的各种与致病有关的毒性因子和效应子。目前已发现在细菌基因组中至少存在6种不同类型的分泌系统。本文着重介绍新近发现的Ⅵ型分泌系统及其与革兰氏阴性病原细菌致病性的关系。

摘要：绿盲蝽Apolygus lucorum Meyer-Dür不仅取食棉花等多种农作物,而且还具有一定的捕食行为。利用棉铃虫细胞色素氧化酶Ⅰ(COⅠ)的基因序列,设计了检测绿盲蝽对棉铃虫Helicoverpa armigera Hübner卵捕食作用的特异引物。PCR分析结果表明,该引物可特异性检测绿盲蝽体内棉铃虫卵DNA片段,取食3粒棉铃虫卵绿盲蝽的检测半衰期为1.77 h。此检测方法为进一步评价绿盲蝽在农业生态系统中的地位与功能提供了技术平台。

摘要：RNAi(RNA interference)是一种由dsRNA参与、对靶基因表达进行干扰或沉默的现象。由此发展起来的RNAi基因沉默技术已成为当今植物基因功能研究和遗传改良的一个重要手段。该技术已经在靶向病原物(真菌、细菌、病毒和线虫)基因沉默方面得到了广泛的应用,并且产生了一批抗病性增强的转基因植物。人工设计和合成的amiRNAs和ata-siRNAs的成功研发加快了RNAi技术的应用。本文对RNAi基因沉默机制、RNAi技术研发进展及其在植物抗病性遗传改良中的应用进行综述,并对其应用策略进行探讨。

摘要：通过对已测序和已报道的葡萄霜霉病菌[Plasmopara viticola(Berket Curtis)*** de Toni]细胞色素c氧化酶亚型2(cytochrome c oxidaseⅡ,cox2)的基因序列进行同源性比对分析,设计合成了一对用于***的检测引物FPv/R-Pv。利用该引物对包括***在内的30种常见植物病原真菌(包括15种Plasmopara属真菌、8种葡萄常见致病菌)的基因组DNA进行了PCR扩增,验证引物F-Pv/R-Pv的特异性,结果表明:该引物特异性强,仅***基因组DNA作为模板的PCR扩增产物呈现一条600bp左右的特异性条带,其他参照菌株及阴性对照均无任何条带;灵敏度验证结果表明,该检测法可以检测出3.3pg/μL水平的***基因组DNA;应用该方法对来自全国不同葡萄产区的不同品种的78份葡萄霜霉病菌进行了检测,结果表明,该检测法适用范围广,且检测准确率达100%。

摘要：[目的]通过测试vasK基因突变株对番茄的致病力变化,评价该基因在青枯菌致病过程中的作用。[方法]根据青枯菌(Ralstonia solanacearum)中存在的Ⅵ型分泌系统基因簇中的核心基因vasK序列设计PCR引物,扩增并克隆vasK基因,将庆大霉素抗性基因(Gm)插入vasK基因内部,克隆至自杀质粒pK18mobsacB中,获得重组自杀质粒pK18-vasK-Gm。将自杀质粒电转化至青枯菌GMI1000感受态细胞中,采用同源重组双交换法,将野生型vasK基因置换。对vasK基因突变菌株进行三步筛选和PCR扩增鉴定。[结果]筛选获得了具有庆大霉素抗性的目标基因被抗性基因替换的青枯菌突变株(GMI1000-m)。土壤接种番茄青枯菌结果显示,突变株GMI1000-m的致病性较野生型GMI1000明显下降。[结论]vasK基因在青枯菌致病过程中具有重要作用。

摘要：不吸水链霉菌武夷变种Streptomyces ahygroscopicus *** CK-15是从福建省武夷山土样中分离得到的一株链霉菌,其代谢产物武夷菌素对果蔬真菌病害具有良好的防治效果,但是因其产量低的缺点限制了武夷菌素工业化生产和农业生产中的应用。为了实现利用基因工程培育高产新菌株的目标,首先要获得武夷菌素的生物合成基因。根据大环内酯类抗生素聚酮合成酶基因设计引物筛选菌株CK-15的基因组文库,共获得9个阳性克隆。克隆和测序获得3个较长scaffold片段,序列总长度达53.291 kb,其中包含了14个可能阅读框,通过同源比对证实该序列与*** ATCC 11455的制霉素生物合成基因有很高的同源性。本研究为进一步研究武夷菌素生物合成基因的功能,并通过基因工程培育高产新菌株奠定了基础。

摘要：以不吸水链霉菌武夷变种CK-15为材料，提取基因组DNA，经Sau3AI部分酶切后回收35—40kb之间的片段。连接到pCC1FOS载体上，经过包装转染涂布后构建得到了CK-15基因组的Fosmid文库，文库的滴度为8．8×10^5CFU／mL。随机挑取16个阳性克隆，经EcoR I和Hind Ⅲ双酶切电泳分析，样品插入片段平均长度大于35kh，插入率为100％，符合构建文库的要求。根据多氧霉素、尼克霉素生物合成基因及大环内酯类聚酮合成酶基因（PKS）设计特异性引物，以基因组为模板进行PCR扩增，筛选特异性引物探针。结果用大环内酯类聚酮合成酶基因设计引物扩增出1693bp的片段经Blast比对其与大环内酯类抗生素生物合成基因相似性为95％以上。武夷菌素产生菌CK-15 Fosmid文库的构建及文库探针的获得，为武夷菌素生物合成基因的克隆奠定了基础。

摘要：在苏云金芽孢杆菌常用培养基的基础上，设计了３种改进苏云金芽孢杆菌产生伴孢晶体的培养基，从中筛选出一种比１／２ＬＢ、ＧＴ培养基培养周期短（约需３８ｈ）的ＺＭ培养基。同时，改进了晶体蛋白的提纯方法—碱裂解法。改进后的方法与不连续蔗糖密度梯度离心法相比，简便易行，提取量大，在Ｂｔ的生化和生物活性研究上具有一定参考价值。

摘要：根据已知抗病基因NBS保守区的P-loop和GLPL区设计一对简并引物F1/R1,以7个抗黄萎病陆地棉品种和2个感黄萎病品种的基因组DNA为模板进行PCR扩增。在9个品种中均扩增出500 bp左右的条带。对目的条带进行回收,连接、转化克隆得到350个阳性克隆,进行测序。在8个棉花品种中克隆到74条具有完整开放读码框的棉花RGAs序列。这74条序列共有64种不同的基因型,有10条与其他品种中的RGAs序列相同。用MEGA软件对8个棉花品种的74条RGA序列以及12个已知的抗病基因的NBS区域进行聚类分析,可分为4类;4类RGAs之间的相似性较低,各类之内的RGAs虽然来自不同品种,氨基酸序列的相似度却非常高。推测各大类中相似性较高的序列分别属于同一个基因家族,从位点上说可能处于同一个基因簇。

摘要：采用正交设计对旱稻孢囊线虫ISSR–PCR反应体系的4因素（Taq酶、模板DNA、d NTPs、引物）在4个用量水平上进行优化试验。结果表明,旱稻孢囊线虫ISSR–PCR最佳的反应体系为：在25μL反应体系中,含Taq DNA聚合酶（5 U/μL）0.3μL﹑模板DNA 1μL﹑d NTPs（2.5 mmol/L）2μL﹑引物（10μmol/L）1μL﹑10×PCR Buffer（20 mmol/L Mg2＋plus）2.5μL。引物UBC887最适退火温度为48℃。优化的旱稻孢囊线虫ISSR–PCR的反应体系和程序有较好的重复性和稳定性。