摘要：目的:构建大鼠Pik3cb短发卡状RNA(shRNA)真核表达载体,为利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术从转录后水平抑制血管移植术后移植静脉再狭窄的研究做准备。方法:经预实验设计并合成6条shRNA寡核苷酸片段,酶切鉴定和测序正确后挑选2条质粒转染入大鼠胸主动脉平滑肌细胞内,48、72h用荧光显微镜观察转染效率,Western blot检测Phospho-Akt(Ser473)蛋白的表达,流式细胞仪分别在24、48、72、96h检测细胞凋亡数目。结果:构建的两条大鼠Pik3cbshRNA经限制性内切酶酶切和DNA测序正确后分别命名为pU6-Pik3cb-shRNA-1和pU6-Pik3cb-shRNA-2,转染平滑肌细胞48h和72h转染率分别为15.7%和10.1%;Westernblot结果显示转染组Phospho-Akt(Ser473)蛋白表达明显下降;流式结果表明pU6-Pik3cb-shRNA-1和pU6-Pik3cb-shRNA-2组凋亡细胞数目明显增加,与对照组相比有统计学意义(P<0.05),各时间点错配质粒组与正常对照组相比差异无统计学意义。结论:成功构建了2条大鼠Pik3cbshRNA真核表达载体,有效促进凋亡,抑制平滑肌细胞增殖,为靶向Pik3cb的RNAi防治血管再狭窄奠定了基础。

摘要：背景与目的我们的研究团队设计了一种可吸收先端半倒刺缝线,用于肺内小结节定位。本研究旨在评估可吸收先端半倒线用于电子计算机断层扫描(computed tomography,CT)引导下肺内小结节定位的可行性。方法对10条成年杂种犬进行肺结节建模;然后,在CT引导下,采用可吸收先端半倒线对10条成年杂种犬肺结节进行定位;最后,对其中6条犬进行胸腔镜下楔形切除。定位操作采用“预充式定位操作定位法”完成。结果10条犬全部定位成功,平均操作时间为12.0±5.8min。以半倒刺线为标记进行楔形切除6例,成功5例,楔形切除平均用时10.0±5.9min。出现定位相关轻微并发症7例,包括轻微血肿4例,少量气胸3例。结论在实验动物犬中采用可吸收先端半倒线进行CT引导下肺内小结节定位,是一种便捷、有效、安全可行的定位方法。

摘要：目的构建大鼠Pik3cb短发卡状RNA(shRNA)真核表达载体,为利用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)从转录后水平抑制移植术后血管再狭窄的研究做准备。方法根据大鼠Pik3cb mRNA序列设计6条并经预实验挑选出2条shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并克隆进入载体pGenesil-1,进行酶切鉴定和测序。结果酶切证明构建的shRNA已插入载体,经测序证明与设计的相同,获得大鼠Pik3cb shRNA表达载体质粒。结论成功构建了2条大鼠Pik3cb shRNA真核表达载体,为靶向Pik3cb的RNAi防治血管再狭窄奠定了基础。