摘要：目的应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分支杆菌对异烟肼(INH)耐药性。方法设计与合成用于检测结核分支杆菌耐INHkat、inhA基因的寡核苷酸探针,点于硝酸纤维素膜上,与结核分枝杆菌临床分离株生物素标记的聚合酶链反应(PCR)产物进行反向斑点杂交。结果20株INH敏感株中,仅9例出现野生型探针K1阳性杂交,余11株中,10株K1b'杂交阳性,PCR-DS显示KatG基因315位密码子AGC→ACC,1株K1c'杂交阳性,PCR-DS显示KatG基因315位密码子AGC→ACC;15株出现野生型探针inh1阳性杂交,另5株Inhal探针杂交阳性,PCR-DS显示inhA基因-15位C→T突变。36株耐药株中,17株K1探针杂交阳性,18株K1b'杂交阳性,1株与所试探针不杂交,PCR-DS显示KatG基因279位密码子GGC→GAC;11株与突变型Inhal探针阳性杂交,25株野生型探针inhl杂交阳性。KatG基因膜杂交突变检出率为50%,inhA基因膜杂交突变检出率为30.56%。结论膜反向斑点杂交技术可成为检测部分结核分支杆菌耐异烟肼基因型简便、快速的方法。

摘要：目的以结核菌素试验为参考标准,系统评价γ干扰素释放试验在诊断实体器官移植术前患者潜伏结核感染的临床价值。方法计算机检索PubMed、EMBASE、Cochrane图书馆,检索时间为建库至2012年8月,全面收集γ干扰素释放试验诊断实体器官移植术前患者潜伏结核感染的研究。用Meta Disc 1.4软件对其合并的特异度、敏感度、阴性似然比、阳性似然比等进行分析,绘制综合受试者工作特征曲线。结果最终纳入6个包括QFT-IT试验和T-SPOT试验的γ干扰素释放试验的研究。QFT-IT试验和T-SPOT试验对实体器官移植术前患者潜伏结核感染的诊断价值的合并特异度、合并敏感度、合并阳性似然比、合并阴性似然比、合并诊断比值比及综合受试者工作特征曲线下面积分别为81%、74%、3.94、0.33、12.44、0.847 8和78%、75%、3.61、0.32、12.07、0.845 0。结论经综合受试者工作特征曲线证实,γ干扰素释放试验在实体器官移植术前患者潜伏结核感染诊断中,不适用于结核感染的筛查,也不适合进一步鉴别诊断移植术前患者是否处于潜伏结核,上述结果尚需更多科学的、设计严谨的临床试验进一步证实。

摘要：目的　应用分子生物学方法快速鉴别结核、非结核分枝杆菌临床分离株。方法　通过设计两对引物分别扩增 16SrDNA两条片段 ,根据SSCP电泳图谱与结核分枝杆菌标准株的相似性鉴别结核、非结核分枝杆菌。结果　 98株临床分离株中 ,经细菌学鉴定 93株为结核分枝杆菌复合群 ,5株非结核分枝杆菌。用引物Ⅰ、Ⅱ对结核分枝杆菌复合群进行PCR SSCP分析 ,有81株与标准株有相似图谱。用引物Ⅲ、Ⅳ对非结核分枝杆菌进行PCR SSCP分析 ,均显示出与结核分枝杆菌标准株不同的电泳图谱。结论　PCR SSCP可快速鉴别结核、非结核分枝杆菌。

摘要：目的构建结核分枝杆菌PPE19的GST融合蛋白表达载体,并鉴定其在大肠杆菌中的表达。方法以结核杆菌H37Rv基因组为模板,根据PPE19基因序列设计引物,运用PCR的方法获得PPE19基因,并将其克隆到pGEX-kg载体中,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性菌落进行质粒的酶切和序列分析;将构建正确的克隆进行诱导表达,对菌体裂解物进行SDS-PAGE分析;用western-blot鉴定融合蛋白的表达。结果正确构建了pGEX-PPE19原核表达载体,载体上基因序列正确;载体能在大肠杆菌中表达分子量约为70 kDa的重组蛋白;该蛋白能与GST抗体结合。结论成功构建了GST-PPE19融合蛋白的表达载体,为进一步进行PPE19蛋白的功能研究奠定了基础。

摘要：目的建立一种简便、快速、灵敏、特异的分支杆菌菌种鉴定方法。方法通过 1 6SrDNA聚合酶链反应 单链构象多态性 (polymerasechainreaction singlestrandedconformationpolymorphism ,PCR SSCP)分析鉴定 1 4 0株分支杆菌临床分离株 ;设计与合成用于鉴定分支杆菌菌种的 1 6SrDNA寡核苷酸探针 ,制作膜芯片 ,与待测菌株生物素标记的 1 6SrDNA基因PCR产物进行反向斑点杂交。结果 1 4 0株分支杆菌临床分离株中 ,经 1 6SrDNAPCR SSCP初步鉴定 ,1 33株为结核分支杆菌复合群 ,7株为非结核分支杆菌。经膜芯片杂交分析 ,1 33株结核分支杆菌分离株鉴定为结核分支杆菌复合群 ;7株非结核分支杆菌中 ,1株鉴定为戈登分支杆菌 ,1株为土分支杆菌 ,1株为偶发分支杆菌 ,1株为胞内分支杆菌 ,另 3株与分析探针杂交阴性。分析 2 8种分支杆菌标准菌株和 9种非分支杆菌菌株 ,结果显示寡核苷酸探针是特异的。结论 1 6SrDNAPCR 膜芯片技术灵敏度高、特异性强、简便、快速 。

摘要：目的 :该研究旨在采用分子生物学技术 ,从基因水平上对深圳市某医院及河北辛集地区发生术后及注射后龟分枝杆菌暴发感染的临床分离株进行鉴定 ,并建立一套快速的的鉴定龟分枝杆菌脓肿亚种的探针杂交方法。方法 :根据龟分枝杆菌脓肿亚种标准株 16S - 2 3SrDNA间隔区序列测序结果 ,设计一对寡核苷酸探针 ,对其敏感性、特异性及其对临床标本和临床分离株的检测进行了研究。结果 :探针检测PCR扩增产物敏感性为 1ng ,只与龟分枝杆菌脓肿亚种杂交 ,与 5 6株龟分枝杆菌脓肿亚种临床分离株全部杂交 ;检测 5 7株临床标本阳性率为 6 6 .6 %。结论 :探针检测从基因水平上再次确认引起这两次暴发感染的致病菌为龟分枝杆菌脓肿亚种 ,结果快速可靠。