摘要：目的 在规范化的结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）可变数目串联重复序列（variable number of tandem repeats，VNTR）基因分型的基础上，构建我国31个省（自治区、直辖市）VNTR数据库，每个省优化一套VNTR位点组合，为我国结核病预防控制策略的制定提供科学依据。方法 对2007－2008年全国结核病耐药性基线调查的4 116株MTB15位点VNTR（15-VNTR）基因分型。汉高指数（Hunter-Gaston Index，HGI）分析每个位点的分辨率。依据谱系流行特征，以分辨率高和稳定性强为原则，为各省设计一套VNTR优化组合（12-VNTR、10-VNTR、8-VNTR和5-VNTR），采用HGI和成簇率进行评价。结果 完成了涵盖率为96.36%（3 966/4 116）MTB完整15-VNTR图谱。发现QUB11b、MIRU26等7个高分辨率位点；QUB26、MIRU16、Mtub21、QUB11b在部分地区遗传稳定性差。内蒙古自治区、重庆市、黑龙江省的最优组合为10-VNTR，其他各省的最佳组合为8-VNTR。结论 VNTR数据库的建立将推动全国范围MTB传染源的追踪；各省优化VNTR组合的推出有助于当地结核病疫情的监测和群体遗传学的研究。

摘要：目的评价磺胺甲噁唑(sulfamethoxazole,SMX)和甲氧苄啶(trimethoprim,TMP)对结核分枝杆菌的体外抑菌作用,并探讨SMX与其他抗结核药物的体外相互作用。方法采用微孔板Alamar blue法测定TMP联合SMX对121株结核分枝杆菌临床株的最低抑菌浓度(MIC)。同时采用分层整群抽样设计方法,抽取18株结核分枝杆菌临床分离株观察SMX在与利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇、卡那霉素、氧氟沙星、利福布丁联用时MIC值的影响,以H37Rv为对照,通过计算分级抑菌浓度指数(FICI),观察SMX与其他抗结核药物之间是否存在协同作用。采用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,MDR菌株、非MDR菌株、敏感菌株间MIC的比较采用非参数秩和检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果90.08%(109/121)的结核分枝杆菌临床分离株可以被MIC为1/19(TMP∶SMX)μg/ml的复合制剂抑制生长,5株菌株的"TMP∶SMX=1∶19"的MIC为2/38μg/ml,仅有7株"TMP∶SMX=1∶19"的MIC≥2/38μg/ml,包括敏感株5株,MDR菌株2株。"TMP∶SMX=1∶19"对敏感株、MDR菌株及非MDR菌株MIC间的差异没有统计学意义(χ2=0.111,P=0.946)。对于H37Rv,SMX与其他抗结核药联合用药后,除了利福布丁表现出协同作用(FICI为0.281)外,其余药物均表现为无关作用。对18株临床分离株,SMX与其他抗结核药联合用药后,77.78%(14/18)表现为与利福布丁协同,FICI范围为0.205～1.063。结论TMP联合SMX有较好的抗结核分枝杆菌活性,并且这种活性与细菌对其他药物是否耐药无关;SMX与其他常用抗结核药的相互作用主要表现为无关。

摘要：目的探讨针对hspX、gyrB、IS6110靶基因设计引物，采用环介导等温扩增技术（LAMP）检测对结核病的诊断价值。方法肺结核组为我院收治的68例肺结核患者，对照组为我院收治的45例肺癌患者和20名健康体检者，收集痰标本后采用LAMP、定量PCR及涂片法进行分析，评价LAMP技术的临床应用价值。采用LAMP及定量PCR分别对结核分枝杆菌标准株H37Rv的DNA样品进行检测，评价LAMP技术的检测限；同时对鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、偶发分枝杆菌、耻垢分枝杆菌、海分枝杆菌、龟分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌等8种非结核分枝杆菌菌株及4株普通菌标准株包括大肠埃希菌（ATCC25922）、阴沟肠杆菌（ATCC700323）、铜绿假单胞菌（ATCC27853）和金黄色葡萄球菌标准菌株（ATCC29213）进行鉴定，评价LAMP的敏感度和特异度。结果本研究采用hspX、IS6110和gyrB靶基因进行LAMP检测，对H37Rv的DNA样品检测限分别为320amol/L，320amol／L和32amol／L。LAMP对8种非结核分枝杆菌和4种普通菌检测结果为阴性。对照组中健康志愿者定量PCR，涂片法及LAMP方法的结果均为阴性，对照组中肺癌患者中hspX，gyrB，IS6110LAMP方法和定量PCR阳性结果2例，3种靶基因位点的LAMP和定量PCR检测的特异度均为96．9％（63／65）。针对hspX、gyrB、IS6110靶基因进行LAMP检测，对68例肺结核患者痰标本检测的敏感度分别为75．0％（51／68），77．9％（53／68），73．5％（50／68）；定量PCR检测的敏感度为79．4％（54／68）。3种不同基因位点LAMP技术与定量PCR检测的敏感度比较差异无统计学意义（χ^2=0．82，P〉0．05），但均高于涂片法的38．2％（26／68），LAMP技术与涂片法之间差异均有统计学意义（χ^2=18．71，χ^2=22．02，χ^2=17．18，P值均〈0．01）。结论hspX、gyrB、IS6110 LAMP技术检测的敏感度和特异度均较高，尤其是针对gyrB靶基因位点进行LAMP检测的敏感度与定量PCR接近，并且高于涂片法；如果结合不同基因位点LAMP技术的检测结果进行评判可以提高该技术的敏感度。

摘要：目的基于SYBR GreenⅠ荧光染料建立鉴定鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium,MA)的荧光PCR熔解曲线法,为临床鉴定MA提供简单、准确性高的分子生物学检测方法。方法以MA的特异性插入序列IS1311为检测靶标设计引物,在60℃的退火温度下,建立鉴定MA的SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法,并对MA等21种分枝杆菌标准株和金黄色葡萄球菌等5种常见致病菌进行检测,评价方法的特异性、检测限;以hsp65、16S rDNA普通PCR扩增产物测序分析为“金标准”,鉴定200株分枝杆菌临床分离株,评估建立方法鉴定MA的准确性。结果SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法在30个循环内能准确鉴定出21种分枝杆菌标准株和5种致病菌中的MA,检测限为5.6×10-2 ng/μL。200株分枝杆菌临床分离株中,以PCR测序鉴定出16株MA和184株其他分枝杆菌,以SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法鉴定出15株MA和185株非MA;本研究建立的方法和测序方法对MA的鉴定率差异无统计学意义(P>0.05);两法符合率为99.5%(199/200),一致性较高(Kappa值>0.75,P<0.01);建立方法的敏感性为93.8%(15/16),特异性为100.0%(184/184),阳性预测值为100.0%(15/15),阴性预测值为99.5%(184/185)。结论以MA特异性重复序列IS1311为基础建立的SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法,具有较高的灵敏度和特异性,为MA的临床检测提供新的途径。

摘要：目的探讨针对hspX、gyrB、IS6110靶基因设计引物，采用环介导等温扩增技术（LAMP）检测对结核病的诊断价值。方法肺结核组为我院收治的68例肺结核患者，对照组为我院收治的45例肺癌患者和20名健康体检者，收集痰标本后采用LAMP、定量PCR及涂片法进行分析，评价LAMP技术的临床应用价值。采用LAMP及定量PCR分别对结核分枝杆菌标准株H37Rv的DNA样品进行检测，评价LAMP技术的检测限；同时对鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、偶发分枝杆菌、耻垢分枝杆菌、海分枝杆菌、龟分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌等8种非结核分枝杆菌菌株及4株普通菌标准株包括大肠埃希菌（ATCC25922）、阴沟肠杆菌（ATCC700323）、铜绿假单胞菌（ATcc27853）和金黄色葡萄球菌标准菌株（ATcc29213）进行鉴定，评价LAMP的敏感度和特异度。结果本研究采用hspX、IS6110和gyrB靶基因进行LAMP检测，对H37Rv的DNA样品检测限分别为320amol／L，320amol／L和32amol／L。LAMP对8种非结核分枝杆菌和4种普通菌检测结果为阴性。对照组中健康志愿者定量PCR，涂片法及LAMP方法的结果均为阴性，对照组中肺癌患者中hspX，gyrB，IS6110LAMP方法和定量PCR阳性结果2例，3种靶基因位点的LAMP和定量PCR检测的特异度均为96．9％（63／65）。针对hspX、gyrB、IS6110靶基因进行LAMP检测，对68例肺结核患者痰标本检测的敏感度分别为75．0％（51／68），77．9％（53／68），73．5％（50／68）；定量PCR检测的敏感度为79．4％（54／68）。3种不同基因位点LAMP技术与定量PCR检测的敏感度比较差异无统计学意义（x^2=0．82，P〉0．05），但均高于涂片法的38．2％（26／68），LAMP技术与涂片法之间差异均有统计学意义（x^2=18．71，x^2=22．02，x^2=17．18，P值均〈0．01）。结论hspX、gyrB、IS6110LAMP技术检测的敏感度和特异度均较高，尤其是针对gyrB靶基因位点进行LAMP检测的敏感度与定量PCR接近，并且高于涂片法；如果结合不同基因位点LAMP技术的检测结果进行评判可以提高该技术的敏感度。

摘要：目的基于SYBR Green I荧光染料建立鉴定鸟分枝杆菌(Mycobacterium ***)的荧光PCR熔解曲线法,为临床鉴定MA提供简单、准确性高的分子生物学检测方法。方法以MA的特异性插人序列ISI311为检测靶标设计引物,在60 C的退火温度下,建立鉴定MA的SYBRGreenI荧光PCR熔解曲线方法,并对MA等21种分枝杆菌标准株和金黄色葡萄球菌等5种常见致病菌进行检测,评价方法的特异性、检测限;以hsp65、16S rDNA普通PCR扩增产物测序分析为“金标准”,鉴定200株分枝杆菌临床分离株,评估建立方法鉴定MA的准确性。结果SYBRGreenI荧光PCR熔解曲线方法在30个循环内能准确鉴定出21种分枝杆菌标准株和5种致病菌中的MA.检测限为5.6x 102 ng/μL。200株分枝杆菌临床分离株中,以PCR测序鉴定出16株MA和184株其他分枝杆菌,以SYBR Green I荧光PCR熔解曲线方法鉴定出15株MA和185株非MA;本研究建立的方法和测序方法对MA的鉴定率差异无统计学意义(P>0.05);两法符合率为99.5%(199/200),一致性较高(Kappa值>0.75,P<0.01);建立方法的敏感性为93.8%(15/16),特异性为100.0%(184/184),阳性预测值为100.0%(15/15),阴性预测值为99.5%(184/185)。结论以MA特异性重复序列ISI311为基础建立的SYBR Green I荧光PCR熔解曲线方法,具有较高的灵敏度和特异性,为MA的临床检测提供新的途径。

摘要：目的在规范化的结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis，MTB）可变数目串联重复序列（variablenumberoftandemrepeats，VNTR）基因分型的基础上，构建我国31个省（自治区、直辖市）VNTR数据库，每个省优化一套VNTR位点组合，为我国结核病预防控制策略的制定提供科学依据。方法对2007—2008年全国结核病耐药性基线调查的4116株MTBl5位点VNTR（15-VNTR）基因分型。汉高指数（Hunter-GastonIndex，HGI）分析每个位点的分辨率。依据谱系流行特征，以分辨率高和稳定性强为原则，为各省设计一套VNTR优化组合（***、***、8-VNTR和5-VNTR），采用HGI和成簇率进行评价。结果完成了涵盖率为96．36％（3966／4116）MTB完整15-VNTR图谱。发现QUB11b、MIRU26等7个高分辨率位点；QUB26、MIRU16、Mtub21、QUB11b在部分地区遗传稳定性差。内蒙古自治区、重庆市、黑龙江省的最优组合为***，其他各省的最佳组合为8-VNTR。结论VNTR数据库的建立将推动全国范围MTB传染源的追踪；各省优化VNTR组合的推出有助于当地结核病疫情的监测和群体遗传学的研究。