摘要：目的检测3个先天性鱼鳞病样红皮病家系基因突变情况。方法对临床诊断为先天性鱼鳞病样红皮病的3例先证者外周血DNA进行遗传性皮肤病靶基因外显子测序明确突变位点,根据突变位点设计引物进行PCR扩增,Sanger测序验证先证者和家庭成员突变情况,明确致病原因。结果先证者1和2表现为全身皮肤干燥,下肢伸侧多角形暗褐色鳞屑;先证者3主要表现为躯干、四肢境界清楚红斑、丘疹、鳞屑。均否认家族史。基因检测显示,先证者1存在PNPLA1基因c.100G>A(来自于母亲)和c.377G>A(来自于父亲)复合杂合突变;先证者2存在PNPLA1基因c.320T>A(来自于母亲)和c.434T>C(来自于父亲)复合杂合突变;先证者3存在PNPLA1基因上c.1300delG纯合突变。两个复合杂合突变家系表型和基因突变符合共分离原则。在检出的5个突变中,两个错义突变(c.377G>A和c.320T>A)为首次报道的突变。结论PNPLA1基因的双等位基因突变是3个先证者的致病突变,新报道的突变丰富了该病基因突变谱。

摘要：目的:构建针对人VEGF基因的小干扰RNA(siRNA)的表达载体,实现CMV启动子调控,转染肿瘤细胞后观察其对VEGF基因的干扰作用,并筛选出有效的VEGF-shRNA。方法:设计三对VEGF靶向的发夹状shRNA,依据设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入质粒pDC311-SV40-RC中,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹转染人骨肉瘤细胞U-2 OS,分别培养3d和7d后收集细胞培养上清液,ELISA检测上清中VEGF蛋白的表达。结果:将针对VEGF基因的siRNA的双链寡核苷酸片段成功克隆到pDC311-SV40-RC载体,经过阳性菌落PCR鉴定与测序,结果正确;转染U-2 OS细胞后,ELISA方法检测蛋白表达水平证实干扰序列3能有效降低VEGF的表达。结论:成功构建了CMV启动子调控的针对VEGF基因的siRNA载体,转染肿瘤细胞后可抑制VEGF的表达,并筛选出有效的干扰序列。

摘要：目的:模拟miR30的框架结构设计针对HPSE的shRNA,将其克隆至慢病毒载体的CMV启动子调控的表达框内,实现Ⅱ型启动子对RNAi的有效调控。方法:设计3条基于miR30骨架的HPSE-shRNA,通过PCR获得目的片段,回收后与线性化LV PP-GFP载体连接产生重组慢病毒载体LV PP-GFP/miR-HPSE-shRNA,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用LV PP-GFP/miR-HPSE-shRNA、pHelper 1.0载体和pHelper 2.0载体共转染包装细胞293T细胞,产生慢病毒,感染A375细胞。以实时荧光定量PCR检测HPSE-mRNA的表达情况,以Westen blot检测HPSE蛋白的表达水平。结果:构建出以miR30为骨架的针对HPSE的慢病毒干扰载体,经阳性菌落PCR鉴定与测序,结果正确。实时荧光定量PCR和Westen blot结果表明,LV PP-GFP/miR-HPSE-shRNA重组病毒感染后A375细胞HPSE-mRNA和蛋白的表达明显降低。结论:本研究成功构建了以miR30为骨架的HPSE-shRNA慢病毒载体,实现了Ⅱ型启动子对RNAi的有效调控,为今后实现溶瘤病毒介导RNAi提供了实验依据。

摘要：目的 以岗位胜任力为导向,研究皮肤病与性病学专业学位研究生培养模式,为该专业的研究生培养机制提供更完善的教学方案。方法 课题的研究和实施方法采用了文献调研与考察交流、设计调查问卷及评估表还有现场调研,调查范围包括专业培训基地管理人员、皮肤性病学专业带教老师、该专业的专业型研究生(包括未毕业和已毕业的),对调研结果进行统计学分析,数据采用SPSS19.0软件,计数资料采用χ~2检验,其中P<0.05表示具有统计学意义,深入分析该专业学位硕士研究生培养质量保障体系存在的问题。结果 针对专业学位硕士研究生岗位胜任力的8个方面,专业培训基地管理人员、带教老师、研究生在基本能力和医学知识2项能力打分较高,在职业精神与素质、沟通能力、信息与管理和学术研究能力4个方面打分较低。3组人群在基本能力、职业精神与素质、沟通能力、团队合作、学术研究等方面评分,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 通过分析目前皮肤病与性病学专业学位硕士研究生培养中存在的问题,设计以岗位胜任力为导向的研究生培养新模式,进一步完善其教学质量评价体系,提高了研究生的岗位胜任力。

摘要：目的探讨定点测距分级在评估男性雄激素性脱发严重程度中的适用性。方法 2019年6至12月于杭州市第一人民医院脱发专科门诊根据定点测距分级及BASP(basic and specific)分级对诊断明确的中国男性雄激素性脱发患者进行评估。定点测距分级基于患者毛发的测量数据进行评级,通过测量前发际线定点至眉水平线的距离、发旋中心的最长脱发半径,评估患者额(F)、颞(M)、顶(V)部毛发退缩情况,将各区域脱发情况由轻到重评为0~3级,最终脱发分级表示为FnMnVn形式(如F1M2V0)。以F、M、V中最高的脱发等级作为患者整体脱发分级。采用SPSS 25.0软件统计分析患者一般资料,采用Kappa检验评估定点测距分级与BASP分级结果间的一致性;通过3位脱发专科医生评级的重复率检验定点测距分级的重复性;3位脱发专科医生中2位及以上有相同评价的患者,将该评价结果视作标准结果,通过2位临时培训的普通医生的分级结果与标准结果的一致率检验定点测距分级的易用性。结果共纳入150例男性患者,年龄(32.8±7.9)岁(19~58岁),其中24~35岁者99例,占66.00%,可以观察到患者发病年龄偏早。经定点测距分级评估,150例患者中轻度脱发的人数最多[65例(43.33%)],其次为重度脱发[58例(38.67%)],与BASP分级所得结果的一致性中等(κ=0.573,P<0.001)。3位经验丰富的脱发专科医生通过定点测距分级对150例患者进行评估的结果显示,额、颞、顶部分级结果的重复率分别为98.00%(147/150)、97.33%(146/150)和96.00%(144/150),最终脱发分级的重复率为92.00%(138/150),整体脱发分级的重复率为98.00%(147/150)。2名临时培训的普通医生的整体脱发分级结果与标准结果的一致率分别为95.92%(141/147)与96.60%(142/147),且除其中1位普通医生在最终分级方面与标准结果的一致率为89.86%(124/138)外,其余结果一致率均高于90.00%。结论定点测距分级是一种针对中国男性雄激素性脱发患者设计、基于客观测量数据的可重复性高、易于学习使用的分级方法。

摘要：目的　利用分子生物学方法对解脲支原体 (Ureaplasmaurealyticum ,Uu)第一群进行分型 ,建立简便、可靠的分型方法。方法　设计分型引物 ,用PCR和限制性内切酶消化的方法进行分型。结果　设计了解脲支原体的分型引物UMS5 1|UMAU 1和UMS5 1|UMAU 3 ,前者扩增出Uu1型和Uu6型 ,后者扩增出Uu3型和Uu14型。对于Uu1型和Uu6型 ,用限制性内切酶消化的方法区分。结论　根据MB抗原基因的N端 ,利用PCR结合限制性内切酶消化的方法可以对解脲支原体第一群进行分型 。

摘要：目的:评价羌月乳膏治疗儿童亚急性和慢性湿疹的临床有效性及安全性。方法:采用多中心、分层区组随机、双盲、安慰剂平行对照的设计方法。以中心为分层因素,计划入选240例,按1∶1随机分为试验组和对照组。试验组采用羌月乳膏,对照组采用基质乳膏,均涂敷于患处,每日3次,疗程4周。以靶皮损形态疗效、面积疗效、瘙痒疗效的有效率为主要有效性评价指标。结果:治疗2周及4周后,试验组靶皮损形态的有效率(46.96%、60.87%)均高于对照组(29.66%、44.91%);试验组靶皮损面积有效率(37.39%、55.65%)均高于对照组(22.03%、38.14%);试验组瘙痒疗效的有效率(48.65%、67.57%)均高于对照组(42.24%、51.72%),2组比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论:羌月乳膏局部治疗儿童亚急性和慢性湿疹,能显著改善皮损形态,缩小皮损面积,缓解瘙痒症状,且复发率低,具有较好的疗效和安全性。

摘要：目的探索使用他扎罗汀倍他米松乳膏治疗斑块状银屑病4周后有效但未达基愈患者的后续用药方案。方法本研究采用多中心、随机、开放、平行、对照设计。232例完成0.05%/0.05%他扎罗汀倍他米松乳膏4周治疗,银屑病面积与严重性指数(PASI评分)改善在50%~90%但未达基愈的斑块状银屑病受试者,在第5周时1∶1随机化进入试验组和对照组,试验组每日1次外用0.05%/0.05%他扎罗汀倍他米松乳膏,对照组每日1次序贯使用0.05%他扎罗汀凝胶、0.05%/0.05%他扎罗汀倍他米松乳膏(工作日使用他扎罗汀凝胶、周末使用他扎罗汀倍他米松乳膏),进行第5~8周的治疗,第6周和第8周时评价两组的疗效和安全性。两组间计量资料的比较采用协方差分析或t检验,计数资料的比较采用卡方检验。结果232例进入第5~8周治疗的患者中,200例完成研究,试验组和对照组的全分析集(FAS)分别为110例、112例,安全性分析集(SAS)均为113例。连续治疗6周和8周后,试验组PASI评分的下降率分别为73.05%±16.69%和78.46%±15.40%,对照组分别下降66.73%±21.77%和67.02%±34.19%,两组比较,均P<0.05。治疗6周后,试验组达到PASI90的受试者比例(14例,12.7%)高于对照组(5例,4.5%,χ^(2)=4.842,P=0.028);治疗8周后,试验组达到PASI75、PASI90的受试者比例(61.8%、23.6%)均高于对照组(48.2%、12.5%,均P<0.05)。连续用药8周后,试验组和对照组的不良反应发生率(15.0%、23.9%)差异无统计学意义(χ^(2)=2.822,P=0.093)。结论使用0.05%/0.05%他扎罗汀倍他米松乳膏治疗银屑病4周后有效但未达基愈的患者,继续进行为期4周的0.05%/0.05%他扎罗汀倍他米松乳膏治疗是一种比序贯使用0.05%他扎罗汀凝胶、0.05%/0.05%他扎罗汀倍他米松乳膏更优的治疗方案。

摘要：目的采用氨基酸置换对人乳头状瘤病毒16型E7抗原的人白细胞抗原A2分子限制性细胞毒性T细胞表位HPV-16E7_(11-20)进行修饰和鉴定。方法运用量化模体方案对置换后的多肽与人白细胞抗原A2分子的结合系数进行比较,以分子模拟方法确定合成序列,采用标准Fmoc方案进行合成与纯化多肽以及标准^(51)Cr释放试验检测特异性细胞毒性T细胞诱导活性。结果修饰多肽符合人白细胞抗原A2分子限制性细胞毒性T细胞的表位要求,十肽YLLDLQPEVT具有特异性细胞毒性T细胞诱导活性。结论修饰表位YLLDLQPEVT具有更好的结合力和较强的抗原性,可以代替原有序列E7_(11-20)(YMLDLQPETT)作为人乳头状瘤病毒感染治疗性肽疫苗分子设计的新表位。

摘要：目的探讨蛋白表达技术在支原体研究中的作用。方法以解脲脲原体（ｕｒｅａｐｌａｓｍａｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍＵＵ）为例，根据所研究ＵＵ的目的ＤＮＡ片段设计一对特异性引物，经ＰＣＲ扩增得到目的ＤＮＡ，克隆后运用表达质粒载体ｐＧＥＸ２Ｔ在ＩＰＴＧ诱导下成功诱导了蛋白的表达，并用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测其抗原活性。结果所表达的蛋白具有很好的抗原活性。结论蛋白表达应用于支原体研究中，为研究支原体的致病性与种类或型别的关系提供了重要的手段。实验中我们体会到：（１）在设计引物时，要注意避开ＵＧＡ，可用ＵＧＧ代替。（２）ＩＰＴＧ的浓度从０．１ｍｍｏｌ／Ｌ～１ｍｍｏｌ／Ｌ均有报道，我们实验证实两种浓度在诱导蛋白表达中无差别，因而推荐使用０．１ｍｍｏｌ／Ｌ。（３）蛋白诱导的时间以４～４．５ｈ为最佳。