摘要：根据GenBank中发表的猪的IgG Fc段基因及鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因序列,设计并合成引物。以猪肝组织总RNA为模板扩增出猪IgG Fc基因,以含全长IBV M41S基因的质粒为模板扩增出IBVS1基因,分别克隆至T载体。DNA测序表明,所获得的IBV S1基因大小为1.5kb,IgG Fc大小为1kb,序列正确。将IBVS1与IgG Fc基因串连,插入含有人组织型纤维蛋白溶酶原激活物分泌信号肽序列(tPA)的真核表达载体pcD-NA3.1-tPA上,在HeLa细胞上进行瞬时融合表达。经免疫光和斑点杂交检测,表达产物同时具有IBV S1蛋白和IgG Fc活性。

摘要：DNA螺旋酶中的GyrA与GyrB亚基只有互作重组后才有酶活性。为寻找GyrB亚基和GyrA亚基相互作用的关键区域,构建了不同的GyrB亚基突变体,分析GyrB各突变体与GyrA亚基的相互作用对全酶活性的影响。结果显示:GyrB亚基C端是其与GyrA相互作用的主要结构域,结合GyrB的二维结构,提出GyrB中第531~550位氨基酸是影响螺旋酶功能的关键区域,并可能是理想的新药设计靶标。

摘要：根据GenBank登陆的H9N2亚型AIV全基因组序列,设计了8对引物,运用RT-PCR的方法获取了3株H9N2亚型AIV西藏分离株A/Chiken/Tibet/S1/2009、A/Duck/Tibet/S2/2009和A/Chiken/Tibet/S4/2009的8个基因序列,并对所得序列进行同源性及遗传进化分析。结果显示,分离毒株的各基因片段均有完整的开放阅读框,HA基因裂解位点处均为RSSR/G,符合低致病性禽流感的特征;3株西藏分离毒株之间同源性为98%~99%,可能起源于同一种系;各分离毒的HA、NS和NA基因与欧亚分支A/Chiken/Beijing/1/94分支中的A/Duck/HongKong/Y280/97遗传距离最近,而M、NP、PA、PB1和PB2基因与欧亚分支中另一分支A/Quail/HongKong/G1/97群系遗传关系近。由此可见3株分离株的各基因所属分支不具有统一性,说明本研究所分离的3株H9N2亚型AIV西藏分离毒株可能是来源于不同亚系AIV的毒株在感染同一种宿主时发生基因重排的产物。

摘要：主要对从脱色及离子交换等预处理后的发酵液中制备木糖醇结晶体进行研究。结合均匀设计和逐步回归分析对结晶工艺进行优化,在降温速度为1℃/h、V乙醇∶水=1/5、初始过饱和度为0.22、pH4.0、初始浓度为85C*、搅拌转速为250r/min、晶种量为0.05g/mL的条件下,晶体收率达88.45%,纯度为79.20%。再经过一次重结晶操作后获得的木糖醇晶体终产品,外观色白,颗粒均匀,无结块现象,纯度不低于99%,不含结晶水。

摘要：本研究旨在获得华中地区的犬细小病毒分离株并对其基因型分型、生物学特性及致病力进行探讨。从武汉部分宠物医院采集胶体金初检阳性的14份可疑病料,用猫肾细胞(F81)进行病毒分离。根据犬细小病毒2型(CPV-2)保守的VP2,先后设计2对引物,进行PCR扩增。在细胞上对其进行空斑纯化,进行一步法生长曲线测定,并进行电镜观察。最后对这5株病毒都进行动物回归试验。细胞传代结果表明得到5株细小病毒。PCR扩增结果表明获得390和583bp 2个片段。将2个片段测序的结果与GenBank发布的CPV-2比对,表明所获得的5株病毒中,有4株属于2a型,1株属于2b型。空斑纯化及生长曲线绘制结果表明分离毒株增殖滴度可达105.5 ***-1。电镜观察结果表明,感染细胞的线粒体肿胀。动物试验结果表明犬都能表现不同程度的发病状况,大体解剖发现肠管有坏死、心肌变薄。将病变的心脏制作切片观察,结果表明心肌细胞变性、坏死。本研究结果为进一步研究CPV-2的分子生物学和分子致病机理奠定了基础。

摘要：针对液体培养基人工制备过程低效且目前国内外缺乏具有完整流程的液体培养基自动制备系统的问题,开发了一套基于可编程逻辑控制器(programmable logic controller,PLC)的液体培养基自动制备系统,其选用动作与感知层、传输层和应用层相结合的架构体系,由进料子系统、出料子系统和控制子系统组成。该系统以PLC、MCGS(monitor and control generated system,监视与控制通用系统)触摸屏、传感器和执行设备组合的方式,实现基于培养基配方的组分全自动选择和配比,在线pH监控和溶解氧(dissolved oxygen,DO)监测,以及全自动清洗、过滤、混匀和分装,完成液体培养基的自动配制。同时,监控数据可实时采集和图形化显示,且全流程可回溯、可存储。针对系统的误差,基于试验数据获得误差模型后通过预测确定误差修正量。经实际测试与修正,所设计系统制备液体培养基的相对误差在0.336%以下,重复性误差在0.274%以下,pH的最大控制误差为±0.18,pH和DO的最大测量误差分别为±0.04和±1%,能够满足液体培养基的制备需求。研究结果对全流程自动化液体培养基制备系统的开发有一定的参考意义。

摘要：针对前期筛选的自养硝化杆菌(Nitrobacter)菌株y3-2,以实时荧光定量核酸扩增检测系统(qPCR)测定的菌液终浓度为指标,设计单因素试验和正交试验对其培养基和培养条件进行优化。结果表明,优化的硝化杆菌y3-2的培养基中CaCO3、Na2CO3、NaNO2浓度分别为0.5、1.0、0.5 g/L。最佳培养条件为培养温度28℃、pH 8.0、摇床转速200 r/min。优化后硝化杆菌y3-2的发酵周期由优化前的7 d缩短至4 d,菌液终浓度达到4.31×109CFU/mL。

摘要：对1 432株海洋和极地来源的细菌进行抗南方根结线虫的离体筛选,并对其中活性较好的一株菌进行菌种鉴定并通过盆栽实验验证其在实际生防中的效果.设计诱导系统抗性实验,测定植物防御酶活的变化,初步研究细菌的抗虫机制.结果显示,从1 432株细菌离体筛选得到了9株具有抗南方根结线虫的细菌,其中南极土壤来源的菌株1A00316在离体和活体中均表现出较好的抗性,其生防效果达到71.67%,经鉴定该菌株为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida).诱导番茄系统抗性实验结果显示,经菌株1A00316发酵液处理后的番茄3种防御酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)以及过氧化物酶(POD)的酶活均显著提高,分析数据认为该菌株的菌体可诱导番茄系统抗性.本研究表明恶臭假单胞菌1A00316抗南方根结线虫效果较好,可作为微生物制剂应用于实际生防中;该菌不仅有直接抗虫作用,还存在间接抗虫机制,其多重抗虫机制也具有进一步的研究价值.

摘要：非洲猪瘟病毒(ASFV)、经典猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是目前影响猪群和我国养殖业的重要的3种病原,且3种疾病临床表现相似,因此,建立一种可以快速检测、区分3种病原的方法十分必要。本研究依据ASFV、CSFV、PRRSV的基因保守片段设计特异性引物和探针,建立了多重荧光PCR检测方法。结果显示,所建立的多重荧光PCR可同时检测ASFV、CSFV、PRRSV 3种病原,特异性好、灵敏度高,对3种病原的检测下限分别达到13,16,26个拷贝;重复性良好,组内及组间重复试验的变异系数(CV)均在2%以内。将ASFV OIE标准、CSFV、PRRSV国家标准荧光qPCR作为金标准,同时对180份样品进行检测对比,结果显示,本研究方法对CSFV灵敏性和特异性分别为94.59%和100.00%,总符合率为98.89%;对PRRSV灵敏性为92.68%,特异性为98.56%,总符合率为97.22%;未检测到ASFV。使用所建立的方法对839份临床样品进行检测,结果显示,CSFV、PRRSV是当前猪群疾病的主要病原,且育肥阶段猪只CSFV、PRRSV核酸检出率均显著高于保育阶段猪只(P<0.01)。结果表明,本研究所建立的方法具有较高的灵敏性和特异性,可用于临床样品检测,猪场在防控非洲猪瘟的同时也须加强对CSF、PRRS的防控工作。

摘要：采用Plackett-Burman设计对出发培养基各种成分影响苏云金芽孢杆菌中华亚种CT43发酵合成苏云金素的效应进行评价,筛选出有显著影响效应的因素为葡萄糖和黄豆饼粉。利用最陡爬坡路径试验逼近最大苏云金素产出区域,找到后续试验中心点。综合中心组合设计和响应面分析法确定显著因素的最佳浓度。优化后培养基组成为(g/L):葡萄糖22.8g、黄豆饼粉32.5g、酵母抽提物3.0g、蛋白胨4.5g、玉米浆3.0g、KH2PO42.0g、MgSO4.7H2O 0.15g、MnSO4.H2O0.02g,苏云金素产量可达3.2g/L,比出发培养基提高2倍以上。