摘要：为了对早期猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)感染情况进行监测,根据GenBank中已有的A型PoRV VP6序列,设计2对引物和荧光定量探针,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR方法,并对该方法特异性、灵敏性和重复性进行评价。结果显示所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR方法特异性强、重复性好、灵敏度高,可检测到101拷贝/μL。经对2366份腹泻仔猪的粪便样品进行检测,所建立的方法检出率(5.92%,140/2366)高于常规RT-PCR(4.95%,117/2366),两者的符合率为98.58%。结果表明,本研究建立的PoRV TaqMan荧光定量RT-PCR方法可用于猪轮状病毒病的临床检测。

摘要：布尼亚病毒分布广,传染性强,致死率高,是对全世界的公共卫生事业有重大影响的负链RNA病毒,开发疫苗和寻找药物是预防布尼亚病毒感染的关键。病毒的核蛋白(nucleoprotein,NP)是合成病毒RNA所必需的,其与病毒RNA结合形成核衣壳,参与病毒的组装与RNA转录,在病毒的增殖过程中发挥重要作用;此外,NP还具有B细胞和T细胞表位,能诱发细胞免疫和体液免疫,因此,NP是疫苗设计和药物开发的理想靶点。鉴于NP的丰度和特异性,NP也常用于病毒病的检测。目前,越来越多的布尼亚病毒NP结构及NP-RNA复合物的结构得以解析,研究者已经通过这些结构发现2个重要的抗病毒靶点,即NP的末端臂和RNA结合口袋。本文就布尼亚病毒NP的功能和三维结构以及NP作为抗病毒靶点的研究进展作一综述,以期为布尼亚病毒病的防治提供理论依据。

摘要：为了直观、原位且特异性的检测猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)在感染仔猪后器官和组织中病毒核酸的分布,本研究根据GenBank中PSV的5′端非编码区基因的保守序列设计并合成1对引物,利用PCR地高辛探针合成的方法制备成原位杂交检测探针,建立了PSV原位杂交组织切片检测的方法。应用该方法检测PSV感染仔猪小肠组织,结果表明阳性信号主要存在与在于肠绒毛上皮细胞和固有层淋巴细胞中,阴性对照无显色。该方法可以用于组织切片中的PSV核酸的定位,为猪萨佩罗病毒在感染仔猪后器官和组织中病毒核酸分布及致病机理研究奠定基础。

摘要：为了解山羊内在防御系统中发挥的重要作用,在山羊防御素保守序列的基础上设计了12条不同理化性质的防御素（DGBD1~12）基因,克隆到毕赤酵母表达载体pPICZαA的EcoR I和Not I酶切位点,构建重组表达载体pPICZαA-DGBD。经SaI线性化后电击转化毕赤酵母GS115,经PCR鉴定阳性重组菌。经过摇瓶发酵和甲醇诱导,阳性重组菌的发酵上清液对大肠杆菌,金黄色葡萄球菌等具有较强的抑制作用。最小抑菌浓度测定显示重组质粒对大肠杆菌的抑制作用最强。研究结果显示,疏水指数较高的序列DGBD1~DGBD3的抗菌活性较好,稳定指数较低的序列DGBD4~DGBD6抗菌活性仅次于疏水指数,说明DGBD结构稳定性和疏水性对其抗菌活性有较大影响。

摘要：非洲猪瘟病毒(ASFV)、经典猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是目前影响猪群和我国养殖业的重要的3种病原,且3种疾病临床表现相似,因此,建立一种可以快速检测、区分3种病原的方法十分必要。本研究依据ASFV、CSFV、PRRSV的基因保守片段设计特异性引物和探针,建立了多重荧光PCR检测方法。结果显示,所建立的多重荧光PCR可同时检测ASFV、CSFV、PRRSV 3种病原,特异性好、灵敏度高,对3种病原的检测下限分别达到13,16,26个拷贝;重复性良好,组内及组间重复试验的变异系数(CV)均在2%以内。将ASFV OIE标准、CSFV、PRRSV国家标准荧光qPCR作为金标准,同时对180份样品进行检测对比,结果显示,本研究方法对CSFV灵敏性和特异性分别为94.59%和100.00%,总符合率为98.89%;对PRRSV灵敏性为92.68%,特异性为98.56%,总符合率为97.22%;未检测到ASFV。使用所建立的方法对839份临床样品进行检测,结果显示,CSFV、PRRSV是当前猪群疾病的主要病原,且育肥阶段猪只CSFV、PRRSV核酸检出率均显著高于保育阶段猪只(P<0.01)。结果表明,本研究所建立的方法具有较高的灵敏性和特异性,可用于临床样品检测,猪场在防控非洲猪瘟的同时也须加强对CSF、PRRS的防控工作。

摘要：为快速同时检测牛星状病毒(BAstV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV),本研究针对BAstV基因组ORF1a基因、BVDV基因组多聚蛋白基因和IBRV基因组g B基因的保守区域各设计特异性引物和探针,经反应体系和扩增程序优化,建立了BAstV、BVDV和IBRV三重荧光PCR检测方法,对该方法的特异性、敏感性和重复性进行试验,并应用该方法对临床样品进行检测。结果显示,该方法可扩增BAstV、BVDV和IBRV的核酸,不能对多杀性巴氏杆菌(Pm)、B型牛鼻炎病毒(BRBV)、口蹄疫病毒(FMDV)等病原的核酸进行扩增,特异性较强;对BAstV、BVDV和IBRV的最低检测限(LOD)均为305copies/μL,敏感性较高;检测BAstV、BVDV和IBRV的组内、组间重复性试验变异系数(CV)值均小于3%,重复性较好。应用该方法检测100份临床样品,BAstV、BVDV、IBRV的阳性检出率分别为0、11%、6%。本研究建立的三重荧光PCR方法具有敏感性高、特异性强、在同一反应体系中可以快速鉴别检测BAstV、BVDV、IBRV等优点,可应用于临床BAstV、BVDV、IBRV感染的检测。

摘要：摘要：为了进一步研究猪胸膜肺炎放线杆菌（Actionobacillus pleuropneumoniae，App）ApxⅡA基因的结构和功能，选取GenBank中6株不同App分离株，采用生物信息学方法对其ApxⅡA基因及其编码氨基酸序列进行同源性比对，并选择其中AY232288．1菌株（湖北分离株）ApxⅡA基因为研究对象，分析该基因所编码蛋白质的理化性质，并对其可能形成的二级结构及B细胞表位进行预测和分析。结果表明，6株不同App分离株ApxⅡA基因核苷酸及氨基酸序列同源性分别为65．56％和88．42％，在AY232288．1菌株ApxⅡA蛋白的肽链中，745—751和801—807区段可能是其B细胞表位优势区。本研究首次利用生物信息学方法对ApxⅡA基因及其蛋白质结构进行了分析和预测，为ApxⅡA基因功能的深入研究及APP多表住疫苗的设计奠定了基础。

摘要：根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5’端非编码区(5'UTR)的核苷酸序列,设计特异性扩增引物,建立BVDV的实时荧光定量PCR检测方法。建立的方法只能检测到BVDV,与猪瘟病毒等没有交叉反应,具有高度特异性;在10~1～10~8copies/μL模板范围内具有良好的线性关系,所制作的标准曲线相关系数为0.993,最低可检测到3.0×10~4个拷贝数的病毒核酸,其敏感性为普通PCR的100倍,具有灵敏度高的特点;不同情况下3次重复实验,变异系数小于2.8%,具有重复性好的特点。本研究建立的BVDV荧光定量PCR检测方法可以用于牛病毒性腹泻病变的早期诊断和病毒鉴定。

摘要：非洲猪瘟给全球养猪业造成了严重危害,需要建立更加敏感的PCR检测方法。根据非洲猪瘟病毒(ASFV)的VP72基因序列,设计PCR引物,建立了ASFV PCR检测方法。以合成的VP72基因片段为阳性对照,进行敏感性试验和特异性试验。同时与世界动物卫生组织(OIE)推荐的PCR引物进行对比试验。结果显示,建立的方法可用于ASFV检测,且对其他病毒检测时无交叉反应,特异性良好;敏感性可达到10-8,比OIE推荐的方法高10倍,为ASFV检测提供了一种新的PCR方法。

摘要：以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清I型菌株基因组为模板,根据其鞭毛区与其它细菌高度同源性设计引物,利用PCR方法扩增鞭毛蛋白基因flic片段,将其亚克隆到pMD-18T载体中并进行PCR和酶切鉴定,再将其亚克隆与载体pGEX-kG分别双酶切和连接,构建重组表达载体pGEX-flic,并将其转化大肠杆菌工程菌BL21进行原核表达。结果表明,目的基因片段长度为528bp,在大肠杆菌BL21中获得成功表达,且表达蛋白能与猪抗APP血清发生反应。为进一步研究细菌鞭毛的抗原性及其他功能提供参考。