摘要：因胸膜肺炎放线杆菌的致病性主要是由毒素决定的 ,故参照猪胸膜肺炎放线杆血清2型菌株的序列 (GenBankL1 2 1 4 5)设计了一对特异性引物 ,用PCR的方法扩增apxⅢA基因并得到了长 3 466bp的片段 ,然后将其克隆到pMD 1 8T中 ,经酶切鉴定和序列分析表明克隆是成功的 ;再将apxⅢA插入到原核表达载体pET 2 8b后 ,转化BL2 1 (DE3) ,在IPTG诱导下获得高效表达 ,经Westernblotting检测证实表达产物有活性。以表达产物包被ELISA板 ,建立了特异、敏感的ELISA诊断方法。

摘要：根据已发表的基因序列设计了 1对PCR引物 ,以伪狂犬病病毒Ea株 (pseudorabiesvirusEa ,PRVEa)基因组DNA为模板 ,扩增出一大小为 5 11bp的片段。通过酶切和测序证实 ,该基因为伪狂犬病病毒Ea株的又一糖蛋白基因 ,即gL基因。Blast软件分析表明 ,该基因与Kaplan株核苷酸序列的同源性为 94% ,氨基酸序列的同源性为 95 %。将测序结果输入GenBank ,获得登录号AF44 845 6。

摘要：根据猪胸膜肺炎放线杆菌 (Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)的 apx A基因序列设计了 1对可扩增 1个4 2 2 bp片段的特异性引物 ,成功地建立了一种检测 APP的快速 PCR方法 ,并确定了其特异性和灵敏性。对血清 1～ 13型等 13个 APP标准株均能扩增出预期 4 2 2 bp的特异性条带 ;对猪副嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌的扩增结果为阴性。对 APP菌液最低检出浓度为 6 8CFU/ m L(D6 0 0 为 0 .0 0 3)。 12株临床分离菌的 PCR扩增结果与生化鉴定结果是一致的。该方法能从病料中分离培养 8h的混合菌群中快速检测APP,可用于 APP的快速诊断和流行病学的调查。

摘要：根据 Bergeron等报道的猪细小病毒基因组序列设计引物 ,在下游引物中引入 Bgl 酶切位点以便于构建表达载体。利用 PCR技术扩增得到 NS1 全基因 ,将其克隆到 p MD18- T载体中进行序列测定并分析 ,进而构建重组转移载体p Fast- NS1 ,在 DH1 0 Bac大肠杆菌中与改造过的苜蓿夜蛾核型多角体病毒 (Ac NPV )基因组 (Bacmid)发生同源重组 ,获得重组穿梭载体 Bacmid- NS1 ,经脂质体介导转染 Sf9细胞后 ,得到重组杆状病毒 (Ac NPV- NS1 )。SDS- PAGE、Western-blotting分析可见大小约为 84 0 0 0的特异性带 ,表明 NS1 蛋白在杆状病毒 Bac- To- Bac表达系统中成功地实现了表达 ,从而为研究其结构与功能创造了条件。

摘要：根据GenBank中发表的猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)的核苷酸序列,设计3对特异性引物。通过PCR方法,以引物P1和P2从接毒细胞中扩增到猪型圆环病毒(PCV2)全基因组,克隆入pBluescriptⅡ SK(+)载体构建质粒SK-PCV2,以之为模板,用引物P5和P6扩增不包含PCV2-ORF2的部分基因(SK-PCV2△ORF2);另一对引物P3、P4用于特异性扩增猪型圆环病毒(PCV1)的ORF2基因,与前面得到的SK-PCV2△ORF2基因连接,构建嵌合型质粒SK-PCV2-1,以此为基础构建双联体质粒SK-PCV2-1(DB)。体外转染PK-15细胞,盲传4代后,用RT-PCR和间接免疫荧光方法检测,结果表明本试验构建的嵌合病毒PCV2-1克隆具有感染性。

摘要：口蹄疫病毒主要免疫原性基因VP1的B细胞和T细胞抗原表位位于其C末端,参照Taiwanse97(AJ294928)设计了1对特异性引物,扩增出VP1基因C末端。序列分析表明:其C末端长285bp,编码74个氨基酸,与O/HKN/12/91、O/PEN/TAW/99核苷酸和氨基酸同源性分别为95%、93%和96%、93%;利用同尾酶Xho 、Sal 将VP1基因C末端串连起来;再将单拷贝和双拷贝C末端基因插入到原核表达载体pGEX-KG后,转化BL21(DE3),在IPTG诱导下获得表达,经Westernblot检测证实表达产物具有活性。以表达产物包被ELISA板,初步建立了特异、敏感的ELISA诊断方法。同时用表达产物免疫Balb/c小鼠,能产生一定的抗O型口蹄疫病毒的抗体。

摘要：参照国外发表的猪Ⅱ型圆环病毒 (porcinecircovirustype 2 ,PCV - 2 )全基因组序列 ,设计一对PCV - 2特异性引物 ,用该室分离的PCV - 2豫A株感染PK - 15细胞 ,从中提取PCV - 2复制型基因组DNA ,并以之为模板进行PCR扩增。回收PCR产物 ,构建重组测序质粒T -PCV - 2。测序结果表明 ,猪Ⅱ型圆环病毒豫A株的全基因组为 176 7bp ,与GenBank收录的PCV - 2国外分离株核苷酸的同源性可高达 97%。序列分析表明 ,复制型豫A株的基因组包含 10个读码框架 ,其中ORF1、ORF2是其两个最主要的读码框架 ,分别编码 314、2 34个氨基酸。豫A株和PCV - 1间的ORF1、ORF2的氨基酸序列同源性分别为 85 %、6 6 % ,与其它PCV - 2毒株间的ORF1氨基酸同源性均在 98%以上 ,而ORF2的氨基酸同源性为 92 %～ 97%。

摘要：采用鸭胚成纤维细胞培养从山东和北京两地暴发的鸭瘟临床病例中分离到两株鸭肠炎病毒(DEV),分别命名为SD和BJ。以单抗介导的间接免疫荧光(IFA)检测方法,对两个分离株感染细胞滴片进行间接IFA检测,可见感染细胞内有明显的蓝绿色荧光。试验感染7日龄北京鸭可引起鸭瘟的典型临床症状,死亡率为100(%3/3),取试验感染死亡鸭肝脏、法氏囊和脑组织等制备石蜡包埋切片,利用单抗进行免疫组化检验,除脑组织外均检测到病毒抗原。根据在GenBank上已发表的DEV两段序列设计两对引物,采用聚合酶链式反应(PCR)对野毒SD株人工感染鸭肝脏和BJ珠自然发病鸭肝脏病科提取核酸为模板进行扩增,得到预期大小为765 bp和1954 bp的目的片段,对长片段进行测序,与发表序列进行比较,毒株间的碱基序列同源性达到99.73%。

摘要：本试验采用L9(34)正交设计法 ,配制九种不同能量、蛋白质、磷水平的配合饲料投喂彭泽鲫春片鱼种 ,测定鱼体的增重。试验结果为 :第1～9组的日增重分别为2.49g、2.28g、1.83g、2.14g、2.19g、1.87g、3.11g、3.10g 和2.67g;增重率分别为0.76 %、0.70 %、0.56 %、0.67 %、0.65 %、0.56 %、0.91 %、0.91 %和0.86 %;相对增重率分别为33.63 %、30.77 %、23.55 %、29.07 %、28.30 %、23.16 %、41.87 %、41.91 %和36.09 %。方差分析的结果表明 :本次试验中 ,影响彭泽鲫春片鱼种生长的因素重要性为能量>蛋白质>磷。彭泽鲫春片鱼种适宜生长的能量水平为12.12MJ/kg,蛋白质的适宜水平为30.0 %,磷为1.20 %。

摘要：根据报道的猪产肠毒素性大肠杆菌K88菌毛结构基因DNA序列 ,在其保守区用Goldkey软件设计了 1对引物 ,经PCR扩增从 2 0株野生分离株质粒中得到 17个大小在 815bp左右的阳性产物 ,经纯化、连接、转化、筛选及核酸序列测定与分析 ,确认所克隆的外源基因与报道的K88菌毛 (亚单位K88ab、K88ac、K88ad)蛋白结构基因序列一致 。