摘要：目的构建高效表达结核分枝杆菌抗原肝素结合血凝素(HBHA)的重组耻垢分枝杆菌。方法针对结核分枝杆菌H37Rv株HBHA的编码基因Rv0475设计特异引物,利用PCR技术从细菌基因组中获取目的基因,并克隆入pET-30b(+)载体构建重组原核表达质粒pETHBHA,经IPTG诱导pETHBHA转化的重组*** BL21(DE3)细菌,Ni柱纯化携带C-端His标签的HBHA蛋白,并制备鼠源多克隆抗体。PCR扩增含自身启动子和调节序列的Rv0475基因并克隆入大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭载体pMV261,构建重组分枝杆菌表达质粒pMVHBHA,并经酶切鉴定证实后,电转化入耻垢分枝杆菌,涂布含卡那霉素的7H11平板,挑选抗性克隆并扩大培养,15%SDS-PAGE和Western blot鉴定重组耻垢分枝杆菌的表达。结果分别成功构建重组原核表达质粒pETHBHA和重组分枝杆菌表达质粒pMVHBHA;重组蛋白HBHA在大肠埃希菌中成功表达并纯化后,BCA蛋白浓度测定试剂盒测定浓度为1.912 5μg/μL,用其制备鼠源多抗;证实HBHA利用其自身的启动子和调节序列在重组耻垢分枝杆菌中表达。结论成功构建过表达HBHA的重组耻垢分枝杆菌,为研究该蛋白参与结核病的致病机制和研发新型疫苗和诊断试剂奠定了基础。

摘要：目的 :设计淋球菌膜蛋白疫苗并构建原核表达系统 ,测定表达蛋白的免疫活性。方法 :PCR扩增淋球菌膜蛋白( PIA)基因片段 ,构建重组质粒 ,重组质粒宿主菌经 IPTG诱导 ,用 SDS- PAGE分析 PIA的表达情况。淋球菌标准株免疫 BAL B/c小鼠 ,体外凝集检测动物血清的免疫效果及 EL ISA法检测 PIA的免疫活性。结果 :成功构建表达 PIA蛋白的重组质粒 ,SDS-PAGE电泳图上显示 1条相对分子量 ( Mr)约为 4 0 KDa的新生条带 ,能与免疫血清发生特异性结合反应。结论 :淋球菌膜蛋白疫苗原核表达系统的设计和构建正确 ,表达蛋白 PIA具有免疫活性 。

摘要：目的对日本血吸虫Sj23DNA进行缺失突变,构建Sj23DNA突变体疫苗,为寻求更佳免疫效果的疫苗奠定基础。方法利用重叠PCR技术将Sj23DNA上与ME491同源的部分碱基缺失,获得Sj23DNA的突变体,将其克隆入真核表达载体pcDNA3的多克隆位点上,构建重组质粒pcD-NA3-Sj23突变体,进行酶切和测序鉴定,并用CLUSTALX和primerpremier软件将测序的结果与Sj23DNA序列进行分析。结果序列分析显示pcDNA3-Sj23突变体缺失序列与原设计一致,双酶切pcDNA3-Sj23突变体获得预期大小的DNA片段。结论成功构建了缺失与ME491同源部分碱基的质粒pcDNA3-Sj23突变体。

摘要：目的研究双价DNA疫苗pVIVO2-Sj14-Sj23在不同免疫剂量、免疫次数、免疫有效时间及不同免疫途径的最佳免疫方案。方法构建和制备双价DNA疫苗pVIVO2-Sj14-Sj23;110只雄性BALB/c小鼠随机分成11组,每组10只,按照四因素三水平分成2个对照组和9个实验组。各组统一在末次免疫后30d每鼠感染(40±2)条日本血吸虫尾蚴,感染后45d剖杀,计数成虫虫荷。结果双价DNA疫苗9个实验组获得40.14%～62.68%的减虫率。通过SPSS12.0进行正交设计的统计分析:F值0.05。免疫剂量,免疫次数,免疫途径和免疫有效时间几个因素间差异无统计学意义。结论实验结果提示该疫苗的较好免疫方案为:50μg/只,免疫2次,采取皮内注射,免疫有效时间至少为12周。

摘要：目的克隆旱獭白细胞介素-10(IL-10)全长cDNA序列进行序列分析,为IL-10分子的表达和在土拨鼠肝炎病毒(woodchuckhepatitisvirus,WHV)感染中的应用奠定基础。方法根据Genbank的土拨鼠IL-10cDNA序列,在5′非编码区和3′非编码区设计特异性引物,提取旱獭脾组织总RNA作为模板,RT-PCR扩增旱獭IL-10cDNA。PCR产物纯化后连接至T载体(pMD18-T),构建重组质粒pMD18-T-cmIL-10。对重组质粒进行酶切鉴定,选择阳性克隆测序。对所获得的序列应用分析软件进行分析。结果RT-PCR扩增产物为685bp。重组质粒pMD18-T-cmIL-10经EcoRⅠ与PstⅠ双酶切提示含目的基因片段。序列分析提示旱獭IL-10的编码序列为537bp,与土拨鼠IL-10的同源性为100%。结论成功克隆旱獭IL-10分子,并构建重组质粒pMD18-T-cmIL-10。

摘要：目的建立一种快速的多重聚合酶链反应(PCR)方法,用于检测葡萄球菌对甲氧西林的耐药性,同时对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的种进行鉴定。方法对临床分离的武汉地区金黄色葡萄球菌80株,表皮葡萄球菌70株,其余凝固酶阴性葡萄球菌60株,提取其基因组DNA,针对金黄色葡萄球菌独有的femA基因,表皮葡萄球菌的种特异性序列,决定葡萄球菌对甲氧西林耐药性的mecA基因,和细菌共有的16srRNA基因的保守序列设计四对引物,同时加入PCR体系中对相应片段进行扩增。结果在210株葡萄球菌中,mecA基因检测结果与苯唑西林敏感试验结果的一致率为96.2%。mecA基因阳性但苯唑西林敏感的5个菌株,通过由低到高浓度的苯唑西林筛选培养后,均表现出耐药性。mecA基因阴性但苯唑西林耐药的3个菌株,经过对阿莫西林-克拉维酸敏感性试验后,被证明是β-内酰胺酶的高产株。结论此多重PCR方法不仅可以对临床分离葡萄球菌菌株的甲氧西林耐药性作出判断,同时还可以对金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌做出种的鉴定,是一种高效、敏感、特异性高的检测技术。

摘要：目的构建携带炭疽芽孢杆菌保护性抗原(PA)的两种穿梭载体与上游强启动子。方法将解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶启动子克隆到载体pbluescript-sk(+)上,构建载体pBLKSP;以A16R疫苗株(Tox+,Cap-,弱毒株)DNA为模板,设计合成内外侧引物巢式PCR扩增获得保护性抗原(PA)的全基因,先克隆到载体pBLKSP,再将其和质粒PUB110重组构建成两种穿梭载体。结果酶切鉴定显示所切下的片段大小均与预计相符。测序结果与文献报道序列及预计结果一致。结论成功构建了带有强启动子的两种穿梭载体。为在无毒炭疽疫苗株中的高效表达和炭疽芽孢杆菌的分子疫苗研究奠定了基础。

摘要：目的：利用小分子干扰RNA（siRNA）技术抑制人直肠癌Colo320细胞c—my基因的表达，探讨c—myc基因在人直肠癌Colo320细胞中的作用。方法：设计人直肠癌Colo320细胞基因特异性小分子干扰RNA，用体外转录方法合成人直肠癌Colo320细胞的小分子干扰RNA并转染该细胞，培养48—96h后，收集细胞RNA，应用实时荧光定量PCR方法检测转染细胞中c-myc基因mRNA水平变化，Western blotting检测c—myc表达的蛋白，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和集落形成试验检测细胞增殖活性。结果：转染siRNA后，与对照组相比，实验组pGensil-c-myc-1、2、3、4的c—myc基因mRNA水平明显降低，c—myc的蛋白表达也明显降低。MTT法和集落形成试验检测表明，实验组的细胞增殖速率明显低于对照组。结论：在人直肠癌Colo320细胞中存在RNA干扰的机制，特异性siRNA能够有效地抑制c—myc基因的表达，从而抑制Colo320细胞的增殖。

摘要：目的研制现场工作数据管理软件,用于多中心的血吸虫病流行病学现场研究工作,以实现现场工作的系统化、规范化,确保现场工作质量。方法采用程序设计语言VB、ACCESS数据库、ActiveX、标签打印等技术,根据血吸虫病现场工作流程,设计相应的功能模块,并将各个模块衔接组成1个完整的管理系统。结果成功研制出血吸虫病现场数据管理系统V1.0软件,并将其应用于多个血吸虫病调查研究现场,取得了很好的效果。结论血吸虫病现场数据管理系统V1.0软件为血吸虫病现场调查工作提供了简便、高效的管理工具,可大大提高血吸虫病现场工作的效率和质量。