摘要：目的设计中西医结合病房患者入院护理评估单并检验其信效度。方法在文献研究的基础上,以中医学的四诊“望、闻、问、切”为基础框架,体质判别为评估结局,融入患者入院一般护理评估要点,设计中西医结合病房患者入院护理评估单初稿,采用德尔菲法对评估单初稿进行函询,修改补充后,于2022年4月选取湖北省某三级甲等综合医院中西医结合科3名临床护理人员对160例入院患者进行评估,采用Fleiss’Kappa系数和内容效度系数对评估单进行信效度检验。结果共开展2轮专家函询,问卷回收率分别为95.45%、100%。专家权威系数为0.931、0.957,肯德尔和谐系数为0.101、0.106(P<0.01)。第2轮函询专家条目重要性评分为4.13~4.82分,变异系数为0.07~0.19。最终确定的中西医结合病房患者入院护理评估单包含一般人口学资料、四诊评估及体质判别、护理风险评估3个部分,共32项评估内容。评估单的Fleiss’Kappa系数为0.602(P<0.001),条目水平内容效度指数为0.857~1.000,量表水平内容效度指数为0.920。结论编制的中西医结合病房患者入院护理评估单具有良好的信效度,能体现中医护理的内涵,适用于中西医结合病房患者的入院护理评估。

摘要：目的探讨构建大鼠趋化因子受体4(CXCR4)基因过表达慢病毒载体的技术方法并检测其体外表达目的基因的水平。方法设计CXCR4基因引物,采用聚合酶链反应(PCR)扩增CXCR4基因片段;用AgeⅠ酶切GV208载体;通过连接酶将CXCR4基因片段连接至线性化的GV208载体上;运用PCR方法鉴定阳性克隆的CXCR4-GV208载体;按GV208慢病毒包装试剂盒说明书包装慢病毒并运用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法行滴度检测;然后用重组慢病毒转染293T细胞(人胚肾细胞),观察GFP表达。结果通过PCR成功地扩增了CXCR4基因片段并连接到了GV208病毒载体上,通过PCR及DNA测序鉴定,证明CXCR4-GV208质粒构建正确,重组慢病毒转染293T细胞后可观察到荧光及蛋白表达。包装过表达慢病毒并测其浓缩滴度为2.0×108 TU/mL。结论成功构建CXCR4-GV208慢病毒载体,为CXCR4基因的后期研究提供了实验基础。

摘要：背景:已证实出血性血小板病患者血小板聚集功能存在缺陷,血小板膜糖蛋白在血小板聚集过程中具有重要作用。目的:以健康人作为正常对照,观察出血性血小板病患者血小板膜糖蛋白表达的变化。设计:病例-对照分析。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院中西医结合科。对象:①选取2001-01/2003-03华中科技大学同济医学院附属协和医院中西医结合科和血液专科收治的79例出血性血小板病患者,男31例,女48例,平均年龄(35.76±14.14)岁,病程1～14年,符合1996年出血性血小板病的诊断标准,患者及其家属对本实验知情同意。共计167个出血部位,其中肢体皮肤瘀斑或瘀点64例,鼻出血33例,月经过多29例,齿龈出血28例,眼底出血8例,球结膜出血5例。②纳入标准:均有多部位出血临床表现;血小板计数、出血时间、凝血象检测无明显异常改变;根据出血部位,经内科、耳鼻喉科、妇科、口腔科和眼科等科室诊视,未发现特异诊断性病灶;血压、心率正常;经瑞斯托霉素检测,排除血小板无力症。③另选取健康献血员34例作为正常对照组,男15例,女19例,平均年龄(30.12±7.14)岁。方法:①血小板聚集率测定:以二磷酸腺苷(终浓度1.90μmol/L)、花生四烯酸(终浓度0.37μmol/L),血小板活化因子(终浓度150nmol/L)作为诱聚剂,采用Chronolog430型血小板聚集仪检测正常对照与出血性血小板病患者的血小板最大聚集率。血小板最大聚集率21%～40%为反应不良,低于20%为反应缺如。②血小板膜糖蛋白检测:患者取肘静脉血3.6mL,20g/L的乙二胺四乙酸二钠1:9抗凝,正常对照组标本以同法收集。分离血浆,收集血浆层,离心去上清,加多聚甲醛室温固定,调整血小板浓度为3×107L-1。取调整好的血小板溶液100μL,分别加入异硫氰酸荧光黄标记的CD42b(抗血小板膜糖蛋白Ⅰb)、CD41(抗血小板膜糖蛋白Ⅱb)、CD61(抗血小板膜糖蛋白Ⅲa)、CD42b/CD42a(抗血小板膜糖蛋白Ⅰb/Ⅸ)、CD41/CD61(抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa)、CD62p(抗P-选择素)克隆抗体200μL,混匀后室温避光孵育30min,磷酸盐缓冲液补至终体积1mL,每个样本分析10000个血小板,于FACS420型流式细胞仪上测定荧光阳性百分标记率。主要观察指标:①血小板聚集率。②血小板膜糖蛋白的表达。结果:79例出血性血小板病患者与34例健康献血员全部进入结果分析。①每例出血性血小板病患者均对一项或多项诱聚剂诱导的聚集反应不良或缺如,而正常对照组血小板聚集检测均无异常发现。②与正常对照组比较,出血性血小板病患者血小板膜糖蛋白Ⅰb/Ⅸ,Ⅱb/Ⅲa,Ⅰb,Ⅲa及P-选择素的荧光阳性标记率均明显降低(t=2.50～5.57,P均0.05)。结论:血小板膜糖蛋白表达异常可能是导致出血性血小板病的因素之一。

摘要：背景:研究已证实血小板活化参与了糖尿病血管病变的发生发展。血小板膜糖蛋白Ib/IX/V复合物是血小板膜上主要的糖蛋白分子之一,是血管性血友病因子和凝血酶的受体,在血小板活化中起重要作用。目的:观察2型糖尿病患者血小板膜糖蛋白Ib/IX/V复合物及其组分糖蛋白Ibα表达的变化。设计:病例-对照实验。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院中西医结合科。对象:根据1999年世界卫生组织制定的糖尿病诊断标准选择2005-12/2007-01本院门诊就诊的外周血小板计数>50×109L-1的2型糖尿病患者51例,男28例,女23例,纳入对象在检查前两周内未服用影响血小板功能的药物。根据病情控制情况将患者分为控制良好组(n=25)和控制不良组(n=26);根据是否合并血管病变分为合并血管病变组(n=27)和无血管病变组(n=24)。选择同期本院健康体检者23名为健康对照组,年龄、性别与病例组匹配。纳入对象或家属对检测项目和试验知情同意。试验经医院伦理委员会批准。方法:患者均在清晨就诊时抽取空腹肘静脉血进行检测。健康体检者于来院体检时进行相同检测。①生化指标检测:由本院检验科完成空腹血糖、糖化血红蛋白和空腹面胰岛素的检测。②糖蛋白Ib/IX/V复合物及其组分糖蛋白Ibα的表达的检测:采集清晨空腹静脉血3mL,38g/L枸橼酸钠抗凝后10g/L多聚甲醛固定45min。取50μL固定后全血加至流式检测管,同时分别向不同管中加入20μL糖蛋白Ib/IX/V复合物单克隆抗体CD42a-b-c-d和PE标记的糖蛋白Ibα单克隆抗体CD42b,混匀后室温避光孵育30min,然后CD42a-b-c-d标记的样品中加入20μLFITC标记的羊抗鼠IgG,混匀后室温避光孵育30min。于FACS420型流式细胞仪上检测样本平均荧光强度。③血小板聚集率测定:参照文献检测血小板聚集率。主要观察指标:①生化指标。②糖蛋白Ib/IX/V复合物及糖蛋白Ibα的表达情况。③血小板最大聚集率。结果:实验纳入的51例2型糖尿病患者和23名健康体检者全部进入结果分析。①生化指标检测结果:控制良好组和控制不良组患者空腹胰岛素与健康对照组比较,差异有显著性意义(P<0.01)。控制不良组患者空腹血糖和糖化血红蛋白均明显高于健康对照组和控制良好组,差异有显著性意义(P<0.01)。②糖蛋白Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ复合物和糖蛋白Ⅰbα表达情况的比较:控制良好组和控制不良组患者糖蛋白Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ复合物和糖蛋白Ⅰbα的表达明显低于健康对照组,控制不良组明显低于控制良好组,差异均有显著性意义(P<0.05～0.01)。无血管病变组和合并血管病变组患者均明显低于健康对照组,差异有显著性意义(P<0.01)。无血管病变组和合并血管病变组患者糖蛋白Ⅰbα明显低于健康对照组,合并血管病变组明显低于无血管病变组,差异均有显著性意义(P<0.05)。糖蛋白Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ复合物平均荧光强度与空腹血糖、糖化血红蛋白和空腹胰岛素呈明显负相关(r=-0.634,-0.573,-0.649,P<0.05);糖蛋白Ⅰbα平均荧光强度与空腹血糖和糖化血红蛋白呈明显负相关(r=-0.602,-0.543,P<0.05)。③血小板聚集功能的比较:2型糖尿病患者血小板最大聚集率较正常人明显升高,差异有显著性意义(t=-3.852,P<0.01),控制不良组明显高于控制良好组,合并血管病变组高于无血管病变组,差异均有显著性意义(P<0.05)。结论:2型糖尿病患者早期无血管病变时即存在血小板活化,发生血管病变后活化更明显,且血小板活化与血糖呈正相关。血小板糖蛋白Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ复合物作为凝血酶和血管性血友病因子的受体,可能参与了2型糖尿病血管病变的发生发展。

摘要：背景:“毒损脑络”是急性脑血管病的主要病机,以脑微血管损伤为主要表现。目的:建立不同缺氧缺血再灌注时间的细胞模型及施加药物干预,观察清开灵注射液对不同损伤程度人脐静脉内皮细胞ECV304的保护作用。设计:以培养的细胞为观察对象的随机对照实验。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院中西医结合科。材料:实验于2002-02/04在北京中医药大学附属东直门医院中心实验室完成。实验用人脐静脉内皮细胞ECV304随机分为7组,即正常组、缺氧6h再灌注12h对照组、缺氧24h再灌注12h对照组、缺氧24h再灌注12h低浓度清开灵组、缺氧24h再灌注12h中浓度清开灵组、缺氧24h再灌注12h高浓度清开灵组、缺氧6h再灌注12h中浓度清开灵组。清开灵注射液主要成分为牛胆酸、猪去氧胆酸、黄芩苷、栀子总苷等。方法:缺血再灌注模型的制作:①从培养箱中取出培养的细胞,缺氧6h再灌注12h对照组、缺氧24h再灌注12h对照组分别吸除原培养液,换入无糖Earle’s液,细胞放入缺氧槽中37℃缺血缺氧培养。缺氧6h再灌注12h对照组培养6h,缺氧24h再灌注12h对照组培养24h后,分别吸去无糖Earle’s液,换入无血清1640液后置于37℃CO2培养箱中再灌注培养12h。②缺氧24h再灌注12h低浓度清开灵组、缺氧24h再灌注12h中浓度清开灵组、缺氧24h再灌注12h高浓度清开灵组分别在缺氧24h再灌注12h对照组造模的基础上,向各自培养液中加入质量浓度为5,10,20mg/L的清开灵对细胞进行培养。③缺氧6h再灌注12h中浓度清开灵组在缺氧6h再灌注12h对照组造模的基础上,向培养液中加入质量浓度为10mg/L的清开灵。④细胞存活率以四唑盐比色试验测定,乳酸脱氢酶漏出率用乳酸脱氢酶试剂盒测定,细胞凋亡率行碘化吡啶染色后用流式细胞仪检测,Cellquest软件进行分析。主要观察指标:①细胞形态学观察结果。②各组细胞存活率、乳酸脱氢酶漏出率及细胞凋亡率。结果:①细胞形态学观察:正常组细胞密集,贴壁良好,伸展充分,细胞表面光滑,有较多的分裂期细胞,细胞长满底面,呈典型的“铺路石征”;缺氧6h再灌注12h对照组及缺氧24h再灌注12h低浓度清开灵组细胞形态改变不明显;缺氧24h再灌注12h对照组细胞较稀疏,脱壁较多,可见大量肿胀变圆的损伤细胞及破碎细胞的碎片,贴壁细胞皱缩明显,可见伪足,分裂期细胞少;缺氧24h再灌注12h中浓度清开灵组细胞贴壁良好,表面光滑,未发生皱缩,可见分裂期细胞。②各组ECV304细胞存活率:与缺氧24h再灌注12h对照组比较,缺氧24h再灌注12h低浓度清开灵组、缺氧24h再灌注12h中浓度清开灵组均显著升高犤(42.5±2.8),(72.9±8.0),(80.3±12.7)%,P均<0.01犦,而缺氧24h再灌注12h高浓度清开灵组则显著下降至(10.1±0.4)%,P<0.01。正常组为100%。③各组ECV304细胞乳酸脱氢酶漏出率:与缺氧24h再灌注12h对照组比较,缺氧24h再灌注12h低浓度清开灵组、缺氧24h再灌注12h中浓度清开灵组均显著升高犤(6.6±1.4),(2.4±1.4),(2.4±0.5)%,P均<0.01犦,而缺氧24h再灌注12h高浓度清开灵组则显著升高至(16.1±2.2)%,P<0.01。正常组为(2.2±1.0)%。④各组ECV304细胞凋亡率:与缺氧6h再灌注12h对照组比较,缺氧6h再灌注12h中浓度清开灵组明显升高犤(2.2±0.5),(1.5±0.4)%,P<0.05犦;与正常组比较,缺氧24h再灌注12h对照组、缺氧24h再灌注12h中浓度清开灵组均显著升高犤(0.9±0.2),(5.5±2.5),(9.9±4.3)%,P均<0.01犦;并且缺氧24h再灌注12h中浓度清开灵组比与缺氧24h再灌注12h对照组升高更明显(P<0.01)。结论:①清开灵注射液对不同程度缺血再灌注损伤的ECV304细胞均有保护作用,但随着损伤程度的不同而表现为两种相反的保护形式。②对于缺血6h再灌注12h此类受损伤较轻的ECV304细胞,主要表现为降低细胞的凋亡率;而对于缺血24h再灌注12h此类缺血再灌注损伤较重的ECV304细胞,则增加细胞的凋亡率,使坏死的细胞减少。③与坏死细胞相比,凋亡细胞不发生溶酶体、线粒体及胞膜的破裂,没有内涵物的外泄,故不引起周围细胞的次级损伤,从而提高了细胞存活率,起到保护大多数细胞的作用。

摘要：目的探讨构建大鼠微小RNA(miRNA)146a基因过表达慢病毒载体的技术方法并检测其体外表达目的基因的水平。方法设计miRNA146a基因引物,采用聚合酶链反应(PCR)扩增miRNA146a基因片段;用Age I酶切GV342载体;通过连接酶将miRNA146a基因片段连接至线性化的GV342载体上;将构建的重组载体阳性克隆送美国英杰公司进行DNA测序分析;重组慢病毒转染骨髓间充质干细胞(BMSC),利用RT-PCR检测BMSC的miRNA146a表达量。结果通过PCR成功地扩增了miRNA146a基因片段并连接到了GV342病毒载体上,通过DNA测序鉴定,证明miRNA146a-GV342质粒构建正确,通过RT-PCR检测,表明相对于空白组,mi RNA146a过表达组的miRNA146a基因表达量明显上升。结论成功构建miRNA146a-GV342慢病毒载体,为mi RNA146a基因的后期研究提供了实验基础。

摘要：目的构建并鉴定小鼠SMAC特异干扰载体,并进行慢病毒包装。方法针对小鼠SMAC基因设计并合成3对干扰序列siRNA1、siRNA2、siRNA3及一对阴性对照序列siRNAn,脂质体法转染小鼠肝细胞,Real time PCR法筛选出最佳干扰序列。依据该最佳干扰序列合成DNA oligo,连接GV115载体,获得重组干扰质粒,PCR鉴定阳性克隆并测序鉴定构建的正确性。将该重组干扰质粒与辅助质粒pHelper1.0和pHelper2.0共转染293T细胞,进行慢病毒包装,收集细胞上清并浓缩,梯度稀释法测定病毒滴度。多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果 3条siRNA对肝细胞SMAC mRNA均有不同程度的抑制作用,其中siRNA1的抑制效应最强,抑制效率达到70.3%。依siRNA1片段合成DNA oligo,并与慢病毒载体连接,测序显示其构建正确,梯度稀释法测定慢病毒滴度为6×108TU/ml。结论成功构建了小鼠SMAC基因特异干扰性的慢病毒,为研究SMAC基因在肝衰竭中的作用奠定基础。

摘要：医学教育和其他学科的教育不同:其他学科的教育往往将理论教育和实践教育分开,在学校期间完成理论方面的教育,而实践教育一般在步入社会后、于实习和工作过程中完成,侧重培养高尖端专项人才;而医学具有多学科交叉的特点,侧重培养“精英化”人才,在教育过程中注重对学习者知识、技能、态度的多维度训练,需要将理论教育和实践教育融合进行[1]。为达到医学教育教学目的,国外采用学徒(体验式)医疗培训模式,而中国广泛采用基于问题导向(problem-based learning,PBL)教学模式。有学者提出“医学是不完美的科学和具有专业精神的艺术”,医学教育从诞生起始是不成熟的,是需要持续改善的[2]。后疫情时代如何充分利用网络和多媒体手段,改善线上医学教育和传统医学教育模式的不足,成为医学教育研究重要且亟待解决的课题。

摘要：股骨头缺血性坏死是由于供应股骨头血运损伤或中断，导致股骨头出现坏死所致。中药治疗股骨头缺血性坏死可取得一定的疗效，但有关中药与西药对比治疗该病的研究尚未见报道。为此我们特设计了此实验：将免制成股骨头坏死的模型，分别采用补肾活血中药和口服西药左旋多巴治疗，并观察了其治疗后骨密度和生物力学的变化。现将结果报告如下。