摘要：survivin基因有4个外显子和3个隐含外显子（2α、2B和3B），同一个基因的转录产物通过选择性剪接方式产生多种成熟mRNA。目前发现人类存在5种不同剪接变体。我们分别设计了5种survivin剪接变体特异引物，即时荧光定量检测其在胃癌中的表达，同时分析各种变体之间以及其表达水平与临床病理资料之间的相关性。

摘要：人工神经导管(nerve guidance conduits,NGCs)作为一种合成的神经移植物,为神经再生提供结构与营养支持。理想的神经导管对生物相容性、机械强度、拓扑结构和导电性等均有较高要求,因此需对神经导管的设计不断改进并建立更完善的周围神经再生策略,以期满足临床需求。虽然NGCs在周围神经损伤的治疗中已经取得一定进展,但其对长距离神经离断伤的结构与功能修复仍不理想。本文分别从原材料选择、结构设计、治疗因子搭载及自供电元件集成4个方面对神经导管的设计进行综述,归纳总结NGCs在周围神经损伤治疗中的研究进展,以期推动NGCs的迭代更新与临床转化。

摘要：目的克隆人T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(TIM-4)基因cDNA,构建其真核表达载体pEGFP-C2-TIM-4,并转染16HBE细胞。方法根据GeneBank中人TIM-4 cDNA序列(编号:NM-138379.2),设计出带有EcoRI和BamHI的上下游引物,应用RT-PCR技术,从人骨髓中扩增出TIM-4基因编码区序列,克隆到pMD18-T载体,形成pMD18-T-TIM-4重组质粒,经菌落PCR,双酶切,测序鉴定获得人TIM-4基因cDNA片段,然后将其亚克隆入pEGFP-C2绿色荧光载体中,并通过菌落PCR,双酶切,测序鉴定其重组体。将测序正确的pEGFP-C2-TIM-4质粒转染人气道上皮细胞(16HBE),用实时定量PCR检测目的基因的表达。结果成功扩增出人TIM-4 cDNA全长1134 bp,经T-A克隆构建的pMD18-T-TIM-4重组质粒经菌落PCR,双酶切,测序证实载体中含有正确的TIM-4编码区片段。由此构建的真核表达载体pEGFP-C2-TIM-4,经菌落PCR扩增出1134 bp左右的片段,经双酶切后产生4.7 kb和1134 bp左右的2条带,DNA测序显示与GeneBank中人TIM-4 cDNA序列一致。重组质粒转染16HBE细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光,经实时定量PCR分析,转染细胞TIM-4基因的表达显著增加。结论首次从人骨髓中扩增出TIM-4基因cDNA全长,构建了其真核表达载体pEGFP-C2-TIM-4,并在16HBE细胞内成功高表达,为进一步研究TIM-4的生物学功能奠定了基础。

摘要：背景:纳米粒子是一类具有纳米级尺寸的生物材料,在神经干细胞增殖与分化、神经保护性药物递送以及自由基清除等方面表现出优越的性能。目的:归纳总结已经研发的用于缺血性脑卒中治疗的纳米粒子及性能,分析其针对缺血性脑卒中病理过程的治疗作用和相关机制。方法:应用计算机检索2000年1月至2020年12月PubMed数据库、万方数据库及中国知网数据库收录的相关文献,英文检索词为"Ischemic stroke,Nanomaterials,Nanoparticles,Nanozyme",中文检索词为"缺血性脑卒中或脑梗塞、纳米粒子、纳米酶"。根据纳入和排除标准最终选择79篇文献进行综述。结果与结论:纳米粒子在缺血性脑卒中治疗方面取得了一定的进展。有关研究表明,纳米粒子通过:(1)作为载药系统搭载神经保护性药物及分子,实现跨血脑屏障靶向给药;(2)利用本身抗氧化等固有特性,促进脑组织再生;(3)联合干细胞治疗,提高内源性神经发生和外源性干细胞移植治疗疗效。但是目前有关研究较少,且缺乏一个系统的适于缺血性脑卒中治疗的纳米粒子设计标准和最佳配方。未来需要在进一步探讨缺血性脑卒中疾病机制的基础上充分理解纳米粒子与生物系统之间的相互作用,从而合理设计脑靶向纳米粒子治疗系统,以促进其临床应用。

摘要：本研究构建真核表达载体pEGFP-BMI-1并观察其在HeLa细胞中的表达。将BMI-1逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)产物克隆入pEGFP-N1,经酶切、PCR鉴定及测序分析,构建pEGFP-BMI-1真核表达载体;采用脂质体转染法,将融合基因pEGFP-BMI-1转入HeLa细胞,用荧光显微镜和Western blot检测其表达,SYBR Green I实时定量RT-PCR方法检测转染前后HeLa细胞中P16INK4a mRNA的表达变化。结果表明:重组后的pEGFP-N1质粒已成功载入BMI-1的全长编码基因,序列测定的结果与预期设计完全一致。荧光显微镜下可见在转染pEGFP-BMI-1的HeLa细胞中存在荧光分布;Western blot检测发现存在外源性融合蛋白BMI-1-EGFP的表达。在HeLa细胞中过表达BMI-1显著下调P16INK4a mRNA的表达为对照组的9.2%(P<0.01)。结论:成功构建了真核表达质粒pEGFPBMI-1,转染HeLa细胞后可表达融合蛋白BMI-1-EGFP。这为今后研究BMI-1在肿瘤发生发展中的机制奠定了基础。

摘要：肿瘤组织中T细胞表面的程序性细胞死亡1受体(PD-1)和肿瘤细胞分泌的程序性死亡配体1(PD-L1)的过度表达在一定程度上抑制了机体的细胞免疫反应,从而使肿瘤细胞的生长得以逃避免疫系统的监视和清除。PD-1/PD-L1抑制剂就是针对PD-1或PD-L1表达设计的特定蛋白质抗体,可阻止PD-1和肿瘤细胞上PD-L1相互作用,进而部分恢复T细胞功能,增强T细胞杀死肿瘤细胞的作用。然而,在临床应用中,PD-1/PD-L1抑制剂的耐药问题越来越凸显,部分患者的疗效不能持久,甚至无应答。近年来的研究发现,PD-1与PD-L1表达受许多免疫因子调控,PD-L1的转运和降解等过程也会受到糖基化、磷酸化、泛素化等多种因素的影响。对一些可能干预PD-1/PD-L1通路的调控因子的研究将有助于发现新的治疗策略,克服肿瘤对PD-1/PD-L1抑制剂耐药,改善肿瘤免疫治疗效果。

摘要：目的:评估1种应用实时荧光PCR法检测念珠菌(包括白色念珠菌、热带念珠菌和光滑念珠菌)核酸试剂的性能是否满足临床应用要求。方法:(1)应用含白色念珠菌10^(6)和10^(8)CFU/mL 2种浓度水平的临床混合下呼吸道样本,按照EP15-A3文件5×5精密度设计方案,5 d内每天每种浓度做5个复孔,共计25孔,提取核酸后应用该试剂扩增以评价其重复性和实验室内精密度;(2)应用白色念珠菌、热带念珠菌和光滑念珠菌3种念珠菌标准株及大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌标准株菌液,提取核酸后应用该试剂扩增以评价其特异性;(3)将白色念珠菌标准株用生理盐水10倍梯度稀释为1×10^(5)、1×10^(4)、1×10^(3)和1×10^(2)CFU/mL,5 d内每天每种浓度4个复孔,共计20个复孔,提取核酸后应用该试剂扩增以评价其检出限;(4)收集101例来自呼吸系统疾病患者的下呼吸道标本,提取核酸后应用该试剂扩增检测,并与真菌培养法的结果进行比较,以评价其符合率。结果:(1)该试剂检测含白色念珠菌10^(8)CFU/mL和10^(6)CFU/mL的临床混合样本的重复性精密度分别为2.18%和1.32%,实验室内精密度分别为2.18%和1.36%;(2)该试剂检测白色念珠菌、热带念珠菌和光滑念珠菌标准株的结果均为阳性,检测大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌标准株的结果均为阴性,无交叉反应;(3)该试剂检测1×10^(5)、1×10^(4)、1×10^(3)和1×10^(2)CFU/mL的白色念珠菌标准株的检出率分别100.00%(20/20)、100.00%(20/20)、65.00%(13/20)和25.00%(5/20),检出限为5.8×10^(3)(95%CI 2.3×10^(3)~4.3×10^(4))CFU/mL;(4)101例下呼吸道标本,该试剂检出的阳性率为79.21%(80/101),真菌培养法的阳性率为58.42%(59/101),2者间差异有统计学意义(P<0.05);2种方法检测结果一致性中等(Κappa=0.5388),阳性符合率为100.00%(59/59),阴性符合率为50.00%(21/42)。结论:该试剂的精密度高、特异性好,与真菌培养的一致性中等,能基本满足临床应用要求。

摘要：目的探讨基于EB病毒EBNA基因设计引物的实时PCR在EB病毒DNA检测中的应用以及联合常用方法(Bamh1-W片段)检测在鼻咽癌患者中的诊断价值。方法用两种方法对234例血液标本(包括66例鼻咽癌患者标本)进行EB病毒DNA定量检测,每例样本对细胞内及细胞外分别测定,比较两种方法以及联合检测在各组中的阳性率,观察EBNA法联合Bamh1-W法在鼻咽癌患者中对EB病毒检出率有无提高,方法学的验证采用回归分析及t检验。结果 EBNA法的阳性率(所有样本53.42%,鼻咽癌样本51.52%)低于Bamh1-W法(所有样本69.23%,鼻咽癌样本71.21%),但联合两种方法检测可提高阳性率(所有样本70.94%,鼻咽癌样本72.73%)且在鼻咽癌患者中得到了更大的提高,EBNA法与Bamh1-W法检测标本的相关性R2为0.577,且P0.05,差异无统计学意义。结论联合EBNA法和Bamh1-W法检测EB病毒DNA可提高阳性率且在鼻咽癌患者的检测中阳性率能够得到更大的提高,对EB病毒DNA定量和鼻咽癌的辅助诊断具有一定的意义。

摘要：背景:血小板参数变化可以反映人体凝血功能,但是关于血小板参数在血栓性疾病患者中变化的研究,没有一致的说法,还存在争论。目的:观察脑梗死患者血小板参数变化的规律,探讨使用血细胞分析仪观察患者血小板参数变化是否可行。设计:以患者和健康人对研究对象,病例-对照的验证性研究。单位:一所大学的检验科和内科。对象:2002-01/03华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科确诊的初次发病的脑梗死患者37例,其中男28例,女9例;年龄45～87岁。对照组为37例健康体检者,其中男20例,女17例;年龄40～60岁。方法:用血细胞分析仪检测37例脑梗死患者的血小板分布宽度、血小板平均容积、大血小板比率、血小板数量的变化,同时以健康体检者作对照。主要观察指标:两组对象的血小板各参数变化。结果:血小板分布宽度与大血小板比率、大血小板比率与血小板平均容积之间为正相关关系(r=0.99,0.92,P<0.001),血小板数量与血小板平均容积、大血小板比率之间为负相关(r=-0.58,-0.59,P<0.05)。脑梗死患者的血小板分布宽度、血小板平均容积、大血小板比率犤(14.51±2.88)%,(10.95±1.48)fl,(34.24±11.23)%犦均高于健康体检者犤(12.86±2.02)%,(10.19±1.29)fl,(28.47±9.41)%犦,差异有显著性意义(P分别为0.01931,0.02177,0.

摘要：背景:血小板的参数可反映凝血活性,血小板α颗粒膜蛋白140可反映血小板的活化情况。糖尿病患者由于血糖、血脂代谢紊乱可导致各种并发症如血栓性疾病的发生。目的:分析2型糖尿病患者血小板参数及血小板α颗粒膜蛋白140的变化规律。设计:病例-对照观察。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科和内分泌科。对象:选择2005-03/04在华中科技大学同济医学院附属协和医院内分泌科住院的2型糖尿病患者45例作为糖尿病组,选择同期健康体检者45例作为对照组,均自愿参加观察。方法:使用血细胞分析仪检测2型糖尿病患者的血小板数量、平均血小板容积、血小板容积分布宽度及大血小板比率的变化情况,应用酶联免疫吸附法观察血小板α颗粒膜蛋白140的变化,同时与健康体检者进行对比。主要观察指标:两组观察对象的血小板参数及血浆血小板α颗粒膜蛋白140含量。结果:纳入糖尿病组和对照组均45例,全部进入结果分析,无脱落。①两组观察对象血小板α颗粒膜蛋白140含量的比较:糖尿病组显著高于对照组眼(28.8±10.3),穴9.1±5.6雪μg/L(t=2.37,P<0.01)演。②两组观察对象血小板参数的比较:糖尿病组患者的血小板平均容积、血小板分布宽度及大血小板比率均显著高于对照组(t=2.02熏2.02熏2.02熏P<0.01),而血小板计数则显著低于对照组(t=2.15熏P<0.01)。结论:2型糖尿病患者的血小板平均容积、血小板分布宽度、大血小板比率及血浆血小板α颗粒膜蛋白140含量升高,而血小板计数降低,提示2型糖尿病患者存在着血小板凝血活性增高、血小板消耗增加的现象。