摘要：目的构建靶向人肝素酶（HPSE）的短发卡状RNA（shRNA）表达载体，探讨其基因沉默作用。方法根据人肝素酶mRNA序列设计shRNA，合成两条互补的寡核苷酸链，退火后连接人pGenesil-1载体，转化扩增后进行测序鉴定；重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine2000的介导下，瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901、人前列腺癌细胞株PC-3、人膀胱癌细胞株EJ，每种细胞分别设空白对照组、空载体pGenesil-Negative转染组、pGenesil-HPSEshRNA转染组3组，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Westernblot法检测各种细胞中肝素酶基因表达水平，黏附实验和transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力。结果所构建的shRNA载体插入基因片段与设计序列完全匹配，载体构建成功；重组质粒转染SGC-7901、PC-3、EJ细胞后，肝素酶mRNA表达分别下调78．6％（P〈0．01）、82．6％（P〈0．01）、81．9％（P〈0．01），肝素酶蛋白表达分别下调76．4％（P〈0．01）、85．9％（P〈0．01）、83．3％（P〈0．01），细胞黏附能力分别下降37．7％（P〈0．01）、44．6％（P〈0．01）、43．8％（P〈0．01），细胞侵袭能力分别下降66．8％（P〈0．01）、76．6％（P〈0．01）、80．5％（P〈0．01）。结论成功构建了靶向人肝素酶的shRNA表达载体，沉默肝素酶基因表达后，能抑制多种癌细胞的游走和侵袭能力。

摘要：目的从Toll样受体9(TLR9)的角度探讨溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的发病机制和微生态制剂治疗UC的作用机制。方法采用随机、对照设计,将30例轻、中度活动期的UC患者分为:美常安联合柳氮磺胺吡啶(SASP)组(A组)10例、丽珠肠乐联合SASP组(B组)10例、SASP组(C组)10例,疗程均为4周;正常对照组10例(肠镜及结肠病检均示正常)。于治疗前后取病变肠组织,用免疫组化法检测TLR9的表达水平,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TLR9mRNA的表达,比较UC患者与正常对照组TLR9蛋白和mRNA在结肠组织中的表达水平,及UC患者治疗前后TLR9蛋白和mRNA在结肠组织中的表达变化,并对3组UC患者治疗前后的Sutherland疾病活动性指数(DAI)、肠镜分级积分、病理组织学分级积分、大便菌群变化进行比较。结果 1免疫组化显示TLR9在UC结肠上皮和炎症细胞中的表达均高于正常对照组(P<0.01)。RT-PCR检测UC患者结肠组织可见TLR9mRNA表达,而正常对照组未检出TLR9mRNA的表达。且TLR9与Sutherland DAI、肠镜分级积分、病理组织学分级积分及大便菌群积分呈正相关性。2免疫组化及RT-PCR检测显示A、B、C 3组治疗前病变肠组织中TLR9及TLR9mRNA均为阳性表达,治疗后均为弱阳性或阴性表达,各组治疗前后3组组内比较差异有统计学意义(P<0.05);3组组间比较,A、B组间无差异,C组与A、B组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。33组治疗前后Sutherland DAI、肠镜分级积分、病理组织学分级积分变化均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);3组(组间)比较:Sutherland DAI、肠镜分级积分、病理组织学分级变化差值A、B组间差异无统计学意义,与C组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。大便菌群变化A、B组治疗前后具有统计学意义,C组治疗前后大便菌群变化无统计学意义。结论 TLR9失调可能参与溃疡性结肠炎发病机制;微生态制剂能有效降低UC患者的TLR9表达水平,TLR9下调可能是益生菌治疗UC的作用机制之一。

摘要：目的:构建并筛选肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)短发夹RNA(shRNA)表达质粒.方法:针对小鼠TRAF6 mRNA设计4条理论上最佳的siRNA序列,经退火成互补双链,将相应双链DNA插入pGCsi-U6/GFP/Hygro质粒中,构建重组表达质粒pGCsi-TRAF6-shRNA1,2,3,4,并以不同比例DNA质粒/脂质体转染重组质粒(1∶2、2∶5、1∶3和1∶4)至RAW264.7细胞中,观察转染效果.结果:靶向TRAF6 mRNA的4个shRNA重组质粒载体pGCsi-TRAF6 shRNA1,2,3,4,经测序分析,shRNA编码序列与设计的片段完全一致,证实载体构建成功.应用荧光显微镜分析转染效率显示,DNA(g)/脂质体转染重组质粒(L)按1∶2、2∶5、1∶3和1∶4比例转染细胞的效率分别为13.7%±1.2%、24.5%±2.1%、19.3%±1.7%、16.3%±2.8%,以2∶5为最佳比例.只加了脂质体未加质粒(试剂对照)的细胞无荧光表达.结论:TRAF6靶向RNA干扰重组表达质粒构建成功,为进一步研究阻断TRAF6表达对急性肝衰竭过度炎症反应的基因治疗奠定基础.

摘要：目的:构建靶向髓细胞白血病基因-1(myeloidcell leukemia-1,mcl-1)的shRNA的真核表达质粒,并筛选出沉默mcl-1基因效果最明显的shRNA表达质粒.方法:设计3对针对mcl-1基因不同位点的shRNA片段,构建携带此shRNA片段的真核表达质粒(shRNA1-3)并行酶切鉴定和测序分析.然后通过脂质体将重组质粒转染到肝癌细胞株HepG2中,48h后测定转染率,并分别采用RT-PCR及Western blot检测mcl-1mRNA和蛋白表达情况.结果:重组质粒经酶切鉴定与测序证实构建成功.质粒在HepG2细胞中的转染率约为64%.shRNA1-3导入HepG2细胞48h后,mcl-1mRNA水平和蛋白水平均明显低于空白对照组和阴性对照组(0.61±0.02,0.56±0.02,0.46±0.01vs0.97±0.01,0.95±0.00;0.53±0.01,0.48±0.03,0.36±0.01vs0.90±0.03,0.88±0.01,均P<0.01).与shRNA1和shRNA2相比,shRNA3对mcl-1mRNA和蛋白的抑制作用均最强(52.6%vs36.3%,42.9%;63.2%vs41.5%,49.6%,均P<0.01).结论:成功构建并筛选出的靶向mcl-1的shRNA真核表达质粒对肝癌细胞HepG2内的mcl-1表达具有明显抑制作用.

摘要：目的:研制新式智能监测内窥镜咬嘴,以改变现有咬嘴包裹性不强、舒适感较差以及胃镜易咬坏的问题。方法:研制一种智能监测内窥镜咬嘴,采用齿形结构的设计,即U型结构的咬嘴本体,咬嘴本体连接用于限制舌头活动的压舌部,压舌部具有与外界连接的通道,将咬嘴设置为U型结构,使咬嘴覆盖整个牙齿。结果:内窥镜的U型结构咬嘴,经过实验验证,压强测量为0~250 kPa,测量误差<1.2%,通过恒压驱动传感器,可使传感器模块的最低功耗达到14.7μW,降低了传感器模块的温度漂移,提高设计的稳定性和可靠性。咬嘴覆盖整个牙齿,舒适度高,且胃镜不易受损。结论:研制的新式智能监测内窥镜咬嘴能够有效减少胃镜咬伤事件,使患者在胃镜检查佩戴咬嘴时更为舒适安全。

摘要：目的:调查护理实习生软技能水平,分析相关影响因素,并提出改善策略,以提高护生的综合素质和实习质量。方法:采用由付艳芬设计的护理软技能测评量表,对武汉协和医院316名护生进行问卷调查。结果:护生软技能总均分为(3.79±0.77)分,其中人际关系技能维度得分最高(3.91±0.29)分,组织管理技能最低(3.66±0.79)分。学历、父母文化程度以及是否班团干部是影响护生护理软技能的相关因素。结论:护生具有较高的护理软技能水平,建议护理院校及实习医院在认知技能和管理能力上为护生提供更多的锻炼机会,进一步提高护生的护理软技能水平。

摘要：目的 评价小麦纤维素治疗中老年人功能性便秘的疗效和安全性.方法 采用多中心随机对照设计.纳入符合罗马Ⅲ功能性便秘诊断标准且排除了器质性疾病的患者,年龄55 ～ 85岁.采用随机数字表法随机分为两组,分别服用小麦纤维素颗粒（3.5g/次,2次/d）和聚乙二醇4000散剂（10g/次,2次/d）,治疗期8周,减量维持治疗期4周,停药后4周末、12周末随访.由独立问卷员对症状进行评分.主要疗效指标是治疗2周、4周和8周时的显著有效率、有效率和总有效率,分别按治疗后症状计分减少≥75％、50％ ～ 74％、≥25％的例数计算.结果 3个临床中心共纳入受试者127例,有效例数122例,年龄（69.4±6.9）岁.小麦纤维素组62例,聚乙二醇组60例,两组受试者人口学资料、基线期症状评分和各亚型便秘所占比例有可比性.小麦纤维素和聚乙二醇治疗2周、4周和8周时的总有效率分别为37.70％（23/61）比59.32％ （35/59）（P=0.018）、57.38％（35/61）比74.14％ （43/58） （P =0.054）、64.41％（38/59）比79.31％ （46/58）（P=0.073）.小麦纤维素治疗2周、4周和8周后自发排便次数≥3次/周的患者比例由治疗前的43.55％（27/62）提升至80.33％（49/61）、83.61％（51/61）和93.22％ （55/59） （P ＜0.01）,与各时间点的聚乙二醇组相比,差异均无统计学意义（P均＞0.05）.小麦纤维素治疗后粪便性状正常的患者比例明显提升,治疗8周时明显高于聚乙二醇组[86.44％（51/59）比67.24％（39/58）,P=0.014].小麦纤维素组仅1例出现轻度腹胀.结论 小麦纤维素对中老年人功能性便秘的疗效与渗透性泻剂聚乙二醇4000相当,其在有效改善粪便性状的同时较少引起稀粪,安全性好.

摘要：目的了解消化内科护士对基于Watson关怀理论护理人文关怀的认知现状,为临床开展相关的培训及管理提供参考依据。方法采用自行设计的消化内科护士护理人文关怀认知调查问卷,对3所三级甲等综合医院的136名消化内科护士进行调查。结果 136名消化内科护士对护理人文关怀认知得分总均分为(12. 56±2. 61)分,正确率为62. 39%。不同性别、年龄、工作年限、所在医院、知识获取途径护士对护理人文关怀认知得分比较,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论消化内科护士对护理人文关怀的认知水平不高,护理管理者应参考影响因素,建立并完善专科护理人文关怀的学习与临床实践环境,以提高消化内科护士对基于Watson关怀理论护理人文关怀的认知水平。

摘要：介绍一种肝脏穿刺术后创口压迫式盐袋,其结构包括弹性固定带、粘贴扣及粘贴区、盐袋。在使用中可以通过调整粘贴扣及粘贴区的位置适当调节压迫力度、中间透明的压迫片方便及时观察患者穿刺点情况,同时确保患者体位改变的安全性及舒适性。该设计制作和操作十分简单,方便临床使用,减少并发症发生、提高患者满意度。

摘要：目的探讨预防消化内科住院患者自杀的培训方法。方法设计了"教学做合一"的系统化培训方法。做中教:培训者为主导者,以自杀风险管理的实际工作过程确定培训内容和方法,将培训计划与工作任务合一;做中学:以学习者为中心,在工作中实践自杀预防管理知识和技能,做到知行合一;做中评:根据"做"的内涵决定评价方式的多样性。结果经过1年的培训后,护士对自杀风险管理综合能力得分、消化内科自杀风险管理质量达标率、患者对护理工作满意度均较培训前显著提高(P<0.01);医生对护理工作满意度较培训前提高(P<0.05);患者自杀率从2.14‰下降到0.93‰。结论自杀预防系统化培训能提高护士的自杀风险管理能力和科室的风险管理质量以及患者和医生对护理工作的满意度,有效预防患者自杀。